吖啶酯衍生物及其合成方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及吖啶酯衍生物，尤其涉及一种化学发光吖啶酯衍生物及其合成方法， 本发明还涉及该吖啶酯衍生物作为化学发光物质在免疫检测中的应用，属于化学发光底物 吖啶酯衍生物领域。
【背景技术】
[0002] 化学发光免疫分析（ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)是将化学发光或生 物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 其检测免疫反应原理与放射免疫（RIA)和酶免疫（EIA)相同，不同之处是以发光物质代替 显色物质等，以样本检测相对发光强度（RLU)，定量或定性推导待测物含量。其分析方法优 点是操作简便、灵敏度高、快速且易于标准化操作，另外测试中不使用有害的试剂，试剂保 持期长，现已广泛应用于生物学、医学研宄和临床实验诊断等领域。
[0003] 经过近十多年CLIA的迅猛发展，现已开发出多种类型的化学发光底物，常见的类 型主要有吖啶酯类、鲁米诺及其衍生物、过氧化草酸酯类、金刚烷类等。其中吖啶酯和吖啶 酰胺类吖啶衍生物作为免疫分析示踪物具有许多优点：无需催化剂、高特异性、发光量子产 率高，稳定性好等，从而得到广泛的应用。
[0004] 目前，在以碱性磷酸酶（ALP)为标记酶的化学发光免疫检测试剂系统中尚缺乏一 种灵敏度高，发光持续时间长，使用简便，在室温情况下强度恒定的化学发光免疫分析示踪 物。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种新的化学发光吖啶酯衍生物，适用于以碱 性磷酸酶（ALP)为标记酶的化学发光免疫检测试剂系统。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
[0007] 本发明首先公开了一种化学发光吖啶酯衍生物，其结构式为式I所示：
[0008]
【主权项】
1. 一种吖啶酯衍生物，其特征在于，其结构式为式I所示：
2. -种合成权利要求1所述吖啶酯衍生物的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤： (1) 、吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯的合成：将4-三氟甲基苯硫酚和吖啶-9-碳酰 氯加入到二氯甲烷中，滴加三乙胺进行搅拌反应，反应完毕，蒸去溶剂，过滤，水洗，干燥，得 到吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯； (2) 、10-甲基-吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯的合成：将上步制备的吖啶-9-硫 代羧酸对三氟甲基苯酯和溶剂二氯甲烷加入到反应器中，冰浴控温在〇~5°C，向反应器中 滴加三氟甲烷磺酸甲酯，滴加完毕，撤掉冰水浴，常温下搅拌反应1-8小时，收集反应产物， 即得； (3) 、10-甲基-9, 10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯的合成：将步骤⑵制 备的产物加入到无水甲醇溶液中，加入氰基硼氢化钠进行回流反应，反应结束后静置至室 温，过滤，滤液浓缩，得到二氢化硫酯粗产物； (4) 、TfS-APS 的合成： a、 将二异丙基氨基锂（LDA)的溶液加入到反应瓶中，外用干冰浴； b、 滴加步骤（3)的反应产物的THF溶液，控制混合物温度在-65~-70°C，滴加完毕，搅 拌反应； c、 加入三氯氧磷的四氢呋喃溶液，10-60分钟后撤去冰浴，再搅拌反应60-120分钟； d、 向反应器中加入3-羟基丙氰，室温下搅拌反应6-14小时； e、 过滤，除去固体物，滤液用乙酸乙酯稀释后，水洗，干燥，除去溶剂，得到固体物； f、 将固体物溶于丙酮溶液中，通氮气保护下，加入2N氢氧化钠的水溶液，然后室温下 搅拌反应8-36小时，即得。
3. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：按摩尔比计，步骤（1)中4-三氟甲基苯 硫酚和吖啶-9-碳酰氯的比例为1:1 ;所述的搅拌反应温度优选为40~50°C。
4. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中向反应器中滴加 I. 1当量的 三氟甲烷磺酸甲酯；所述的常温为20-35°C ;所述的搅拌反应的时间为4小时。
5. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2)中所述的收集反应产物为将反 应产物过滤，滤饼用无水乙醚冲洗1~2遍，50°C真空干燥6-8小时，即得。
6. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3)中加入1. 5摩尔量的氰基硼氢 化钠回流反应1. 5~2小时。
7. 按照权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（4)的a步骤中外用干冰浴，使体系 温度控制在-70 °C ;步骤（4)的b步骤中控制混合物温度在-65~-70 °C ;步骤（4)的c步 骤中加入三氯氧磷的四氢呋喃溶液反应30分钟后撤去冰浴，再搅拌反应90分钟；f步骤中 将固体物溶于丙酮溶液中，通氮气保护下，加入2N氢氧化钠的水溶液，室温下搅拌反应24 小时。
8. 权利要求1所述的吖啶酯衍生物作为免疫分析示踪物中的用途。
9. 一种化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：以权利要求1所述的吖啶酯衍生物作 为免疫分析示踪物。
10. 按照权利要求9所述的化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于：以碱性磷酸酶为标 记酶。
【专利摘要】本发明公开了吖啶酯衍生物及其合成方法和应用。本发明所提供的化学发光吖啶酯衍生物的结构式为式Ⅰ所示。本发明进一步公开了合成式Ⅰ所述化合物的方法，包括：(1)、合成吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯；(2)、合成10-甲基-吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯；(3)、合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸对三氟甲基苯酯；(4)、合成TfS-APS。本发明吖啶酯衍生物作为免疫分析示踪物适用于以碱性磷酸酶为标记酶的化学发光免疫检测试剂系统。应用效果证明，本发明试剂盒可检测到1×10-19mol的ALP分子，具有灵敏度高，发光持续时间长，使用简便，在室温情况下强度恒定，无需精确温控等优点。
【IPC分类】G01N33-535, C09K11-06, C07F9-64
【公开号】CN104761584
【申请号】CN201510090045
【发明人】叶建峰
【申请人】北京利德曼生化股份有限公司
【公开日】2015年7月8日
【申请日】2015年2月27日