一种新型酶制超低分子肝素的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种新型超低分子肝素，具体而言是设及使用来源于 成Ai略施e如(9/7e/7S6細菌的新型肝素酶SDhepII降解肝素获得的超低分子肝 素产物，W及其制备和应用。
【背景技术】
[0002] 肝素于1916年被发现，后来被广泛用于临床抗凝血。过程中标准肝素为第一代产 品，低分子肝素为第二代产品，当前低分子肝素已取代大部分标准肝素市场。而创新药物研 发正向第S代产品--超低分子肝素发展。
[000引肝素能与血浆白蛋白、血小板、巨瞻细胞、内皮细胞等结合，引起患者血小板减少、 骨质疏松、出血等一系列副作用。该些副作用大多是因为糖链过长引起（化iticalReviews ;[]1〇]1(3〇1〇肖7/化1]131:〇1〇肖7 2013;88:1-18)，故可考虑将肝素分子量减小。
[0004] 肝素抗凝血有两条路径；一方面通过活性中屯、的核屯、戊糖序列与抗凝血酶（AT) 结合，促进AT与凝血因子Xa结合从而抗凝血；另一方面，当肝素糖链> 18个糖单元， 即分子量大于5400化时，能促进AT与Ila结合，发挥抗凝血活性（T虹ombosisClinic 2008;2:8-21)。
[0005] 因此，在活性中屯、保留完整而分子量足够小的情况下，肝素抗凝血过程中出现副 作用的风险小。此时一般抗巧a效价高而抗Flla效价低。
[0006] 基于此，低分子肝素被发明，临床应用证明低分子肝素具强抗凝血作用且副作 用减少，低分子肝素迅速占领市场。目前有依诺肝素、达肝素、亭扎肝素、舍托肝素、那 曲肝素等（CriticalReviewsinOncology/Hematology2013; 88:1-18)，平均分子量 4500-6000Da，抗巧a/抗Flla效价在2-5。分子量减小使得抗Flla效价大幅度降低，而抗 巧a效价有所降低，则是由于制备过程中活性中屯、受到破坏导致。
[0007] 超低分子肝素是新一代产品，指平均分子量<4000Da，拥有更高的抗巧a/抗Flla 效价比的低分子肝素。抗凝血优于低分子肝素，而出血和血小板减少症等副作用更小。
[000引 目前已报道的超低分子肝素主要有S种（T虹ombosisResearch2011; 127:292-298)，分别是由ROVI公司研发的RO-14和Bemiparin、由赛诺菲-安万特研 发的Semuloparin，其具体特性如下表所示；
【主权项】
1. 一种新型超低分子肝素，其特征在于该新型超低分子肝素由肝素酶SDhepII降解肝 素得到。
2. 如权利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于分子量分布在600Da-3800Da区间范 围内。
3. 如权利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于抗FXa效价大于150IU/mg。
4. 如权利要求1所述的超低分子肝素，其特征在于抗FIIa效价小于3IU/mg。
5. 如权利要求1所述的超低分子肝素，其制备方法包括以下步骤： (1) 将肝素配成质量百分比为2-10%的水溶液，加入氯化钙1-lOOmM，溶解； (2) 向步骤（1)所述的肝素溶液中按1-10IU/g比例加入肝素酶SDh印II，降解反应 12-48小时； (3) 向步骤（2)所述得到的降解液加入质量百分比为1-5%氯化钠，溶解后用截留分子 量1-5万的超滤膜过滤； ⑷向步骤⑶得到的溶液中加入1-1. 8倍重的乙醇，沉淀静置6-18小时，倾去上清 液； (5)将步骤（4)得到的沉淀于60-75°C烘干。
6. -种新型超低分子肝素，具有独特抗凝血特性，可作为活性成分用于抗凝血药物的 制造。
【专利摘要】本发明公开了一种新型超低分子肝素，使用从Sphingobacterium daejeonense细菌中得到的肝素酶SDhepⅡ，降解肝素、超滤分离、乙醇沉淀等步骤最终得到。这种超低分子肝素在抗凝血方面具有特异性，有望成为临床抗凝血药物的活性组分。
【IPC分类】C12P19-26, A61P7-02, C08B37-10
【公开号】CN104774279
【申请号】CN201510135193
【发明人】马小来, 李锂, 白佳珂, 张紫恒
【申请人】深圳市海普瑞药业股份有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年3月26日