基因突变体及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因突变体及其应用。具体地，本发明涉及分离的核酸、分离的多肤、 筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法、筛选易感常染色体隐 性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的系统、用于筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色 素变性疾病的生物样品的试剂盒、构建体W及重组细胞。
【背景技术】
[0002] 原发性视网膜色素变性（retinitispigmentosa,在本文中有时也简称为"RP") 是最常见的遗传性致盲疾病，在全世界的发病率约为1/3500至1/5000,在我国的发病率约 为1/3467,目前已经成为威胁全球青年和中年人群视觉功能和质量的主要眼部疾病。RP是 由于视网膜感光细胞(包括视锥细胞和视杆细胞W及视网膜色素上皮细胞）的变性，外层视 网膜进行性退化而导致的眼底病。RP的遗传方式表现为多种形式，其中常染色体显性遗传 (autosomadominantretinitispigmentosa,简称为ADRP)约占发病率的 15-20%、常染色 体隐性遗传（autosomarecessiveretinitispi卵entosa,简称为ARRP)占 20-25%、X连 锁遗传（X-linkedretinitispigmentosa,简称为）(LRP)占 10-15%、其余 40-55% 不能确定 其遗传方式。到目前为止，通过连锁分析或候选基因筛选已经确定了 19个ADRP基因位点， 26个ARRP基因位点，6个化RP基因位点，其中43个基因已经得到克隆巧etNet:http:/7 WWW.S地.uth.tmc.e化/retnet/sum-dis.htm)。虽然在每种遗传方式中均发现了一些致病 基因，但仍存在着相当一部分未知致病基因位点，预计在人类中可能仍然存在70多个位点 与RP相关。
[0003] 因而，目前对原发性视网膜色素变性疾病的研究仍有待深入。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种能够有效筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品的方 法。
[0005] 本发明是基于发明人的下列工作而完成的：发明人通过已知致病基因捕获测序联 合候选基因突变验证的方法确定了常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的致病基因上 的新突变。
[0006] 根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例， 与SEQIDNO;1相比，该核酸具有C. 1924T〉A突变；或者与SEQIDNO;3相比，该核酸具有 c.472delC突变，或者C. 1744G〉A突变。根据本发明的实施例，发明人确定了ABCA4和CNGA1 基因突变体，该些新突变体与常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的发病密切相关，从 而通过检测该些新突变体在生物样品中是否存在，可W有效地检测生物样品是否易感常染 色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。
[0007] 根据本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的多肤。根据本发明的实施例，与 SEQIDN0;2相比，该分离的多肤具有P.F642I突变；或者与SEQIDN0;4相比，该分离的 多肤具有P.L158F*4突变，或者P.G582R突变。通过检测生物样品中是否表达该多肤，可W 有效地检测生物样品是否易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病。
[0008] 根据本发明的第H方面，本发明提出了一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色 素变性疾病的生物样品的方法。根据本发明的实施例，该方法包括W下步骤：从生物样品 提取核酸样本；确定所述核酸样本的核酸序列；所述核酸样本的核酸序列或其互补序列， 与SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A突变，或者与SEQIDN0;3相比具有C. 472delC和 C.1744G〉A的复合杂合突变，是所述生物样品易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病 的指示。通过根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物 样品的方法，可W有效地筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。
[0009] 根据本发明的第四方面，本发明提出了一种筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色 素变性疾病的生物样品的系统。根据本发明的实施例，该系统包括：核酸提取装置，所述核 酸提取装置用于从所述生物样品提取核酸样本；核酸序列确定装置，所述核酸序列确定装 置与所述核酸提取装置相连，用于对所述核酸样本进行分析，W便确定所述核酸样本的核 酸序列；判断装置，所述判断装置与所述核酸序列确定装置相连，W便基于所述核酸样本的 核酸序列或其互补序列，与SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A突变，或者与SEQIDN0;3相 比具有C. 472delC和C. 1744G〉A的复合杂合突变，判断所述生物样品是否易感常染色体隐 性遗传视网膜色素变性疾病。利用该系统，能够有效地实施前述筛选易感常染色体隐性遗 传视网膜色素变性疾病的生物样品的方法，从而可W有效地筛选易感常染色体隐性遗传视 网膜色素变性疾病的生物样品。
[0010] 根据本发明的第五方面，本发明提出了一种用于筛选易感常染色体隐性遗传视 网膜色素变性疾病的生物样品的试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒含有：适于检测 ABCA4和CNGA1基因突变体的至少一种的试剂，其中与SEQIDN0;1相比，所述ABCA4基因 突变体具有C. 1924T〉A突变；与SEQIDN0;3相比，所述CNGA1基因突变体具有C. 472delC 突变，或者C. 1744G〉A突变。利用根据本发明的实施例的试剂盒，能够有效地筛选易感常染 色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物样品。
[0011] 根据本发明的第六方面，本发明还提出了一种构建体。根据本发明的实施例，该构 建体包含前面所述的分离的核酸。需要说明的是，"构建体包含前面所述的分离的核酸"表 示，本发明的构建体包含与SEQIDN0;1相比具有C. 1924T〉A突变的ABCA4基因突变体的核 酸序列，或者包含与SEQIDN0;3相比具有C. 472delC突变，或者C. 1744G〉A突变的CNGA1 基因突变体的核酸序列，或者同时包含上述ABCA4基因突变体和CNGA1基因突变体的核酸 序列。由此，利用本发明的构建体转化受体细胞获得的重组细胞，能够有效地用于筛选治疗 常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药物。
[0012] 根据本发明的第走方面，本发明还提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例， 该重组细胞是通过前面所述的构建体转化受体细胞而获得的。根据本发明的一些实施例， 利用本发明的重组细胞，能够有效地筛选治疗常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的药 物。
[0013] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0014] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0015] 图1 ;显示了根据本发明一个实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变 性疾病的生物样品的系统及其组成部分的示意图，其中，
[0016] A为根据本发明实施例的筛选易感常染色体隐性遗传视网膜色素变性疾病的生物 样品的系统的示意图，
[0017] B为根据本发明实施例的核酸提取装置的示意图，
[0018] C为根据本发明实施例的核酸序列确定装置的示意图；
[001引图2 ;显示了根据本发明一个实施例的两个ARRP家系的家系图谱，其中，
[0020] A为根据本发明实施例的ARRP家系1的家系图谱，
[0021] B为根据本发明实施例的ARRP家系2的家系图谱；
[0022] 图3 ;显示了根据本发明一个实施例，各物种间的ABCA4基因的P. 642F、CNGA1基 因的P. 15化和P. 582G，该3个位点的保守性比较结果；
[0023] 图4 ;显示了根据本发明一个实施例，ARRP家系1内的先证者11:8及正常对照的 ABCA4基因突变位点的Sanger测序验证峰图；
[0024] 图5 ;显示了根据本发明一个实施例，ARRP家系2内的先证者11:6及正常对照的 CNGA1基因突变位点的Sanger测序验证峰图。
【具体实施方式】
[0025] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。
[0026] ABCA4及CNGA1基因突变体
[0027] 根据本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的核酸。根据本发明的实施例， 与SEQIDNO;1相比，该核酸具有C.1924T〉A突变；或者与SEQIDNO;3相比，该核酸具有 C.472delC突