寡肽cd01及其制备方法和应用

文档序号:8495775阅读:735来源:国知局
寡肽cd01及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于蛋白质领域,特别涉及寡肽及其应用。
【背景技术】
[0002] 寡肽是多肽的一种分类,分子量段一般在1000道尔顿以下,也称作小肽,一般由 2-6个氨基酸组成。与其他肽的区别是,寡肽在人体不需消化,即可直接吸收。
[0003] 炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子所发生的防御反应。对机体的损伤的 局部组织所呈现的反应称为炎症反应,炎症发展后期会产生渗出液,渗出物的压迫和炎症 介质的作用可引起患者疼痛。现在抗炎的临床应用药物主要为化学合成药物,如萘丁美 酮、吲哚美辛、吡罗昔康、布洛芬等,这些化学药物虽然抗炎效果明显,但不能治本,不能 消除致炎的基本原因,大多都有较严重的不良反应,给患者造成痛苦和损失。
[0004] 创面修复,创面是正常皮肤(组织)在外界致伤因子如外科手术、外力、热、电流、化 学物质、低温以及机体内在因素如局部血液供应障碍等作用下所导致的损害。常伴有皮肤 完整性的破坏以及一定量正常组织的丢失,同时,皮肤的正常功能受损。也称为伤口或者创 伤。创面修复既伤口修复。
[0005] 消化道溃疡病,胃溃疡、十二指肠溃疡统称为消化道溃疡病。由于生活节奏加快, 工作压力加大,近年消化道溃疡病的发病率不仅未见下降,反有上升趋势。近10多年来本 病的症状也变得不典型,无规律的胃部隐痛常引不起人们的注意,直到发生呕血或黑便时 方到医院就诊。消化性溃疡主要指发生在胃和十二指肠的慢性溃疡,亦可发生于食管下段、 胃空肠吻合口周围及含有异位胃粘膜的美克尔(MECKEL)憩室。这些溃疡的形成与胃酸和 胃蛋白酶的消化作用有关,故称消化性溃疡。近年研究发现溃疡的形成与幽门螺旋桿菌(H P)的存在有关。本病绝大多数(95%以上)位于胃和十二指肠,故又称胃十二指肠溃疡。本 病的总发病率占人口的5-10%,十二指肠溃疡较胃溃疡多见,以青壮年多发,男多于女,儿 童亦可发病,老年患者所占比例亦逐年有所增。由于复发率很高,给患者带来痛苦。
[0006] 免疫力是人体自身的防御机制,是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细 菌等);处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细 胞的能力。现代免疫学认为,免疫力是人体识别和排除"异己"的生理反应。年老体弱的人 员由于自身免疫系统较弱,所以需要提高细胞的识别能力。免疫力低下是会造成人体容易 受到外界的感染,功能下降。

【发明内容】

[0007] 为了寻找一种可以多角度保护人体创面和抗炎镇痛,同时提高人体免机能的药 物,发明人通过大量合成试验,广泛的筛选,采用Fmoc保护的氨基酸来合成,得到大量寡肽 分子,其中部分寡肽分子获得了意想不到的技术效果。意外地发现治疗效果较好的寡肽 ⑶01,其由Y、E、H3个氨基酸残基组成,分子量为447. 45Da,其氨基酸序列如SEQID: 1所示。
[0008] 上述寡肽的制备方法可以使用合成,也可以采用从生物体中提取纯化得到。寡肽 的制备方法,其特征在于包括如下的步骤:
[0009]a.合成顺序为从C端到N端;取1倍摩尔当量的树脂放入多肽合成仪反应器中, 加入DCM(二氯甲烷)溶胀半小时,然后抽掉DCM,加入序列中第一个Fmoc保护的氨基酸 10mmol,2倍摩尔当量的DIEA(二异丙基乙胺),适量的DMF(二甲基甲酰胺)、DCM溶液(适 量是指以可使树脂充分鼓动起来为宜),用氮气鼓泡反应60min;然后加入约5倍摩尔当量 甲醇,反应半小时,抽掉反应液,用DMF、甲醇洗净;
[0010]b.加入适量哌啶去除Fmoc(9-芴甲氧羰基)保护基,洗净,茚三酮检测;
[0011]c.往反应器中加入序列中第二个氨基酸(也为2倍摩尔当量),2倍摩尔当量HBTU(苯并三氮唑-N,N,N',N' -四甲基脲六氟磷酸盐)及DIEA,氮气鼓泡反应半小时,抽掉液体, 用DMF,甲醇洗净,茚三酮检测;
[0012]d.重复依步骤b、c的方式依次加入序列中氨基酸,抽掉液体,用DMF洗净,茚三酮 检测;
[0013]e.将树脂用氮气吹干后,从反应柱中取下并称取重量,倒入烧瓶中,然后往烧瓶中 加一定量的95%TFA(三氟乙酸)切割液,震荡反应2h,目的是将多肽从树脂载体上裂解下来 并去除氨基酸的侧链保护基团;
[0014]f.滤掉树脂,得到滤液,然后向滤液中加入大量乙醚,析出粗产物,然后离心,清洗 即可得到该序列的粗产物;
[0015] g.分析提纯和质谱检测:用ESI(电喷雾电离)离子源质谱仪和测序仪检测该序列 的正确性,用高效液相色谱将粗品提纯至要求纯度;
[0016] h.收集纯化好的目标寡肽溶液放入冻干机中进行浓缩,冻干成白色粉末。
[0017] 本发明提供的寡肽可作为普通食品、保健品或者药品的组成部分。本发明还提供 一种寡肽的组合物,其中含有药学可以接受的载体。组合物可以以药物制剂形式存在,优选 的是注射剂,更优选的是冷冻干燥注射剂,该药物制剂形式药物组合物,可以按照制剂学常 规技术制备,包括将药物活性成分,本发明的寡肽与药物载体混合,按照制剂学常规技术制 成所需要的剂型。
[0018] 本发明中的寡肽,分子量小、人工合成方便、纯度很高,生产方面,适合大规模生 产,在应用方面,这些寡肽抗炎镇痛效果明显,对创面损伤、烧伤、烫伤、消化道溃疡具有显 著的治疗效果;该寡肽还有能提高动物免疫机能的作用,寡肽能够在制备抗菌、抗炎镇痛、 抗肿瘤和提高免疫力的药物中的应用。
【具体实施方式】
[0019] 以下是结合具体试验对本发明的说明,并不是对本发明保护范围的限制。实施例 1本发明中寡肽的制备方法
[0020]原料:树脂(WangResin),Fmoc保护的氨基酸,
[0021] 试剂:N,N-二甲基酰胺(DMF),DCM,ME0H,乙酸酐,吡啶,DIEA,HBTU,六氢吡啶
[0022] 仪器:十二通道半自动多肽合成仪,高效液相色谱(HPLC),型号:Waters2695检测 试剂:苯酚试剂,吡啶,茚三酮试剂
[0023] (1)合成顺序为从C端到N端。
[0024] (2
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