一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒的制作方法

文档序号:8496468阅读:354来源:国知局
一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域,具体地涉及肺癌多重基因突变的引物、探针、及检测试 剂盒和体系。
【背景技术】
[0002] 大肠癌是在世界范围内发病率第三的恶性肿瘤,死亡率高居第二,大约每年新增 一百二十万患者。在中国,所有恶性肿瘤中,大肠癌己经一跃成为死亡率高达第三位的恶性 肿瘤。大肠癌治疗是以手术为主的积极综合治疗,手术治疗可以切除原发灶,解除肿瘤造成 的梗阻症状。手术后化疗近年来发展迅速,辅以免疫治疗、中药治疗、基因靶向治疗、特别是 靶向治疗越来越多的用于临床。大肠癌的发生是多阶段、多步骤、涉及到多种癌基因及抑癌 基因激活或失活等复杂过程形成的。化疗会提高晚期大肠癌的生存期,但一部分患者会出 现耐药,一旦晚期大肠癌发生耐药的不良事件,据文献报道生存期不会超过半年。
[0003] 大肠癌的发生、发展是一个受多基因、多步骤调控的复杂过程,是基因突变致癌的 经典模式,此过程常与细胞增殖、凋亡失控有关,涉及癌基因(主要为Ras基因)、抑癌基因 (主要包括P53基因、APC基因等)、错配修复基因(MMR基因)以及一些修饰基因(如C0X-2 等)。
[0004]KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF都是EGFR下游的信号分子,是众多信号通路上关键的 激活因子。这些基因的突变常见于多种恶性肿瘤,在大肠癌患者中的突变率分别为20~ 50%、1 ~6%、10 ~30%、8 ~15%。KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变一般会使结直肠 癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。因此,对大肠癌进行KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基 因遗传变异的检测至关重要,然而目前临床上大多每次只能检测一个突变或一段基因的突 变,检测通量低,耗时长,尚无能够同时、一次性完成对此4个基因突变进行检测的试剂盒。
[0005] 因此以期待找到适合大肠癌靶向治疗将提高晚期大肠癌的预后生存期、减少耐药 不良事件的发生,为大肠癌的个体化治疗提供新方案,使晚期大肠癌患者受益。基因突变的 联合检测能提高肿瘤临床治疗的针对性,降低治疗费用,节省宝贵的治疗时间
[0006] 本发明提供一种高灵敏度和高特异性的用于一次性检测多重大肠癌突变基因的 引物、探针、试剂盒及引物分配方式。该检测试剂盒利用DNA样本进行基因突变的检测, 提供突变状态的定性评估,特异性和灵敏度高,检测结果重复性好,而且引入了荧光检测技 术,克服了传统PCR产物遗留污染的问题,操作简便快捷,可辅助临床医生筛选出可受益于 肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者,为临床肠癌基因突变的检测提供了一种快速可靠的检 测方法。该方法可以实现一次性检测DNA的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变,大大 缩短了检测的时间,为临床医生对结直肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。

【发明内容】

[0007] 本发明的目的在于提供一种用于一次性检测多重肠癌突变基因的引物、探针,包 括10^^1^、?11(304、81^等突变基因的引物、探针及分配方式,其序列如表1;
[0008] 表1肠癌突变特异性引物、新型探针及分配方式
【主权项】
1.用于检测肠癌的引物和探针,包括如下61条序列,且所述的序列用12联管分装分组 如下:

2. -种用于检测肠癌基因突变检测的反应体系,包括:
3. -种试剂盒,包括权利要求1所述的序列。
【专利摘要】本发明公开了一次性检测肠癌多重突变基因的引物、探针、检测体系和试剂盒,其中包括用于检测肠癌KRAS、NRAS、PIK3CA和BRAF基因突变的引物、探针及其分配方式。本发明的检测试剂盒采用12联PCR反应条设计,每一个12联PCR条检测一个样品,12联条的1-11管内装有相应的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变检测和内控试剂,突变由FAM信号指示,内控由HEX(或VIC)信号指示;12号管作为DNA提取质量的外控检测管,亦由FAM信号指示。本发明可以实现一次性检测DNA的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变,大大缩短了检测的时间,灵敏度高,特异性强,操作简便快捷,可为临床医生对肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
【IPC分类】C12Q1-68, C12N15-11
【公开号】CN104818317
【申请号】CN201410213583
【发明人】江风阁, 林清华, 曹樱, 陈婷, 宋庆涛, 阮力, 郑立谋
【申请人】厦门艾德生物医药科技有限公司
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2014年5月20日
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1