及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(油'）2及其制备方法，属于生物技 术制药领域。
【背景技术】
[0002] 邸0V巧bolavirus,邸0V)是最烈性的人畜共患病之一，往往引起患者发烧、 恶屯、、呕吐、腹泻、肤色改变、全身酸痛、体内出血、体外出血等多种症状，又常因中风、屯、 肌梗塞、低血容量性休克或多发性器官衰竭而致患者死亡，人类感染的死亡率最高可 达90%。邸0V包括五种亚型，埃博拉-扎伊尔巧bola-Zaire，Z-EBOV)、埃博拉-苏丹 巧bola-Sudan，S-EB0V)、埃博拉-科特迪瓦巧bola-Coted'Ivoire，C-EB0V)、埃博拉-莱斯 顿巧bola-Reston，R-邸0V)和埃博拉-本迪布焦巧bola-bundibugyo,B-EB0LA)。其中W Z-EB0V的毒力最强，人感染后死亡率最高；S-EB0V次之；C-EB0V对黑猩猩有致病性，对人则 毒力最弱；R-EB0V对人不致病，但对人W外的灵长类动物具有致死性。2014年，邸0V在非 洲肆虐，导致塞拉利昂等西非国家进入"紧急状态"，W册建议全球联防联控邸0V，邸0V已成 为"国际关注的突发公共卫生事件"，防控邸0V已成为当今国际社会急需解决的重大科学 问题。
[0003] 至今全球尚无预防和治疗邸0V的有效方法。众所周知，治疗性抗体是治疗病毒的 最有效措施之一，直接注射于患者体内，起效快，疗效好，副反应低，是当今重大疫病防控的 "杀手铜"，成为疫病防控的首选药物。目前，美国国立卫生研究院（NIH)和防务威胁缓解委 员会值efenseThreatReductionAgency)方負下的MappBiopharmaceutical公司石开发的 鼠单抗ZMapp，治愈了邸OV感染的两名美国重症患者（援非医务人员），同时，即便在邸OV 感染5天内注射ZMapp，也能完全保护受攻击的非人灵长类动物，使其症状明显改善并完全 康复，直接证明了治疗性抗体在防控邸0V的关键治疗作用。
[0004] 根据人类历史与疾病斗争的经验，特异性抗体治疗已是传染病防治的重要手段之 一。随着分子生物学技术的不断进步，抗体制备随之经历了几个发展阶段，第一阶段，直接 输注康复者血浆；第二阶段，输注免疫异源动物后制备的抗血清；第=阶段，输注单克隆抗 体；第四阶段，输注人源化抗体，目前，上述各类抗体制备技术仍在产业界广泛应用。而免 疫异源动物后制备抗血清技术也经历了传统的整个抗体分子，发展到今天有效去掉能引起 毒副作用的化片段抗体分子和其它血浆外源因子，得到具有与病原体特异结合的高纯度 F(油'）2治疗抗体，安全性进一步提高。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供一种用于制备抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(油'）2的 成套免疫原。
[0006] 本发明提供的用于制备抗埃博拉病毒的免疫球蛋白F(油'）2的成套免疫原由埃 博拉病毒的核酸疫苗、埃博拉病毒的亚单位疫苗和埃博拉病毒的病毒样颗粒疫苗组成；
[0007] 所述埃博拉病毒的核酸疫苗为如下至少一种；扎伊尔型邸OV核酸疫苗I、苏丹型 邸0V核酸疫苗II和科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III;
[0008] 所述埃博拉病毒的亚单位疫苗为如下至少一种；扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV、苏 丹型邸0V亚单位疫苗V和科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI;
[0009] 所述埃博拉病毒的病毒样颗粒疫苗为如下至少一种；扎伊尔型邸0VVLP疫苗W、 苏丹型邸0VVLP疫苗W和科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX;
[0010] 所述扎伊尔型邸0V核酸疫苗I为表达扎伊尔型邸0VG蛋白1编码基因的重组载 体；
[0011] 所述苏丹型邸0V核酸疫苗II为表达苏丹型邸0VG蛋白1编码基因的重组载体；
[0012] 所述科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III为表达科特迪瓦型邸0VG蛋白1编码基因的重 组载体；
[0013] 所述扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV为扎伊尔型邸0VG蛋白2 ;
[0014] 所述苏丹型邸0V亚单位疫苗V为苏丹型邸0VG蛋白2 ;
[0015] 所述科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI为科特迪瓦型邸0VG蛋白2 ;
[0016] 所述扎伊尔型邸0VVLP疫苗W为表达扎伊尔型邸0VG蛋白1编码基因和扎伊尔 型邸0VVP40蛋白3编码基因的病毒样颗粒；
[0017] 所述苏丹型邸0VVLP疫苗W为表达苏丹型邸0VG蛋白1编码基因和苏丹型邸0V VP40蛋白3编码基因的病毒样颗粒；
[0018] 所述科特迪瓦型邸0VVLP疫苗IX为表达科特迪瓦型邸0VG蛋白1编码基因和科 特迪瓦型邸0VVP40蛋白3的病毒样颗粒；
[0019] 所述扎伊尔型邸0VG蛋白1的氨基酸序列如序列表中序列10所示；
[0020] 所述苏丹型邸0VG蛋白1的氨基酸序列如序列表中序列11所示；
[0021] 所述科特迪瓦型邸0VG蛋白1的氨基酸序列如序列表中序列12所示；
[0022] 所述扎伊尔型邸0VG蛋白2的氨基酸序列如序列表中序列13所示；
[0023] 所述苏丹型邸0VG蛋白2的氨基酸序列如序列中序列14所示；
[0024] 所述科特迪瓦型邸0VG蛋白2的氨基酸序列如序列15所不；
[0025] 所述扎伊尔型邸0VVP40蛋白3的氨基酸序列如序列表中序列16所示；
[0026] 所述苏丹型邸0VVP40蛋白3的氨基酸序列如序列表中序列17所示；
[0027] 所述科特迪瓦型邸0VVP40蛋白3的氨基酸序列如序列表中序列18所示。
[002引上述成套免疫原中，
[0029] 所述埃博拉病毒核酸疫苗由所述扎伊尔型邸0V核酸疫苗I、所述苏丹型邸0V核 酸疫苗II和所述科特迪瓦型邸0V核酸疫苗III组成；
[0030] 所述扎伊尔型邸0V核酸疫苗I、所述苏丹型邸0V核酸疫苗II和所述科特迪瓦型 邸0V核酸疫苗III的质量比为1:1:1 ;
[0031] 所述埃博拉病毒亚单位疫苗为由所述扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV、所述苏丹型 邸0V亚单位疫苗V和所述科特迪瓦型邸0V亚单位疫苗VI组成；
[0032] 所述扎伊尔型邸0V亚单位疫苗IV;所述苏丹型邸0V亚单位疫苗V;所述科特迪 瓦型邸0V亚单位疫苗VI的质量比为1:1:1 ;
[0033] 所述埃博拉病毒疫苗为由所述扎伊尔型邸0VVLP疫苗W、所述苏丹型邸0VVLP 疫苗W和所述科特迪瓦型邸OVVLP疫苗IX组成；
[0034] 所述扎伊尔型邸0V VLP疫苗W、所述苏丹型邸0V VLP疫苗W和所述科特迪瓦型 邸0VVLP疫苗IX的质量比为1:1:1。
[00巧]上述成套免疫原中，
[0036] 所述表达扎伊尔型邸0V G蛋白1的重组载体为将所述扎伊尔型邸0V G蛋白1的 编码基因插入pVAXl载体得到的载体；
[0037] 所述表达苏丹型邸0V G蛋白1的重组载体为将所述苏丹型邸0V G蛋白1的编码 基因插入pVAXl载体得到的载体；
[0038] 所述表达科特迪瓦型邸0V G蛋白1的重组载体为将所述科特迪瓦型邸0V G蛋白 1的编码基因插入pVAXl载体得到的载体；
[0039] 上述成套免疫原中，所述扎伊尔型邸0VG蛋白2为将扎伊尔型邸0VG蛋白2的 编码基因插入pFas巧acl载体，得到重组载体A，再将重组载体A导入目的细胞中，表达得到 的扎伊尔型邸0VG蛋白2;
[0040] 所述苏丹型邸0VG蛋白2为将苏丹型邸0VG蛋白2的编码基因插入pFas巧acl 载体，得到重组载体B，再将重组载体B导入目的细胞中，表达得到的苏丹型邸0VG蛋白2;
[0041] 所述科特迪瓦型邸0VG蛋白2为将科特迪瓦型邸0VG蛋白2的编码基因插入 P化stBacl载体，得到重组载体C，再将重组载体C导入目的细胞中，表达得到的科特迪瓦型 邸0VG蛋白2。
[0042] 上述成套免疫原中，
[0043] 所述扎伊尔型邸0VG蛋白1编码基因和扎伊尔型邸0VVP40蛋白3编码基因通 过名称为A的重组载体转染目的细胞，即得到扎伊尔型邸0VVLP疫苗W;
[0044] 所述名称为A的重组载体为将扎伊尔型邸0VG蛋白1编码基因和扎伊尔型邸0V VP40蛋白3编码基因插入pFas巧acDUAL载体中得到的载体；
[0045] 所述苏丹型邸0VG蛋白1编码基因和苏丹型邸0VVP40蛋白3编码基因通过名 称为B的重组载体转染目的细胞，即得到苏