用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法

文档序号:8507882阅读:400来源:国知局
用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于材料化学技术领域,特别设及一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体 微柱及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 阿奇霉素(Azit虹omycin),化学名为;(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S, 14R)-13-[(2,6-二脱氧-3-C-甲基-3-0-甲基-0斗-核-已化喃糖基)氧]-2-己 基-3,4,10- ^哲基-3,5,6,8,10,12,14- 甲基-ll-[[3,4,6- ^脱氧-3-(二甲氨 基)-0 -D-木-已化喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烧-15-酬,是具有氮杂环的 十五元环大环内醋类抗生素,对肺炎链球菌、流感嗜血杆菌W及肺炎支原体所致的肺炎、化 脈性链球菌等具有良好的疗效。由于该药尚未列入兽医临床用药,国内还未制定阿奇霉素 在动物可食性组织中的最高残留限量(MRLs)和检测标准,但有不少畜牧养殖者违规使用 阿奇霉素。最新研究表明,阿奇霉素不仅可能导致急性肝损伤,还可能引发屯、脏活动异常 变化,长期食用阿奇霉素残留的动物源性食品,不仅会导致耐药性的产生,而且可能对敏感 个体造成致命的伤害。动物源性食品中阿奇霉素残留越来越受到人们的关注,阿奇霉素在 畜禽、水产品体内的代谢和残留消除规律已有研究报道,主要采用高效液相色谱、高效液相 色谱-串联质谱等方法分析测定阿奇霉素残留。因阿奇霉素本身的大环内醋结构,无特征 紫外吸收基团,高效液相色谱紫外检测不灵敏;目前,一般都采用高效液相色谱-串联质谱 分析阿奇霉素残留,虽然灵敏度大大提高,但前处理一般都是采用蛋白沉淀法或采用传统 的固相萃取小柱(如Ci8、HLB),缺乏选择性,特异性不强,净化不理想,分析测定中基质效应 强,从而影响整个检测方法的灵敏度和准确定量。
[0003] 基于类似抗原-抗体作用的分子印迹固相萃取技术具有高选择性和特异性,是一 种具有广泛应用前景的固相萃取材料。如果能像抗体一样,合成某些类似抗体的对阿奇霉 素具有高选择性的高分子吸附材料,可大大提高阿奇霉素检测的灵敏度和准确性。
[0004] 分子印迹(molecularimprinting)是基于分子识别理论而迅速发展起来的一个 新的研究领域,分子印迹技术(MIT)也被称为制造"塑料抗体"的技术。分子印迹整体微柱 (molecularlyimprintedpolymermonolithicmicro-column,MIPMMC) ^一类集成了分子 印迹的立体选择性和整体柱制备简单、柱压低W及传质速率快等优点,因此它具有特殊的 分子结构和官能团,能选择性地识别印迹分子或其结构类似物。
[0005] 有机聚合物基质分子印迹整体柱的制备较简单,通常是将一定比例的模板分子、 功能单体、交联剂、致孔剂和引发剂的混合溶液注入空的管柱(通常为不诱钢管或石英毛 细管)中,密封,通过热引发或光引发进行原位聚合反应,再用有机溶剂洗净模板分子、残 余单体和致孔剂。分子印迹整体柱内的印迹位点完整,非特异性结合位点比本体聚合的少, 具有较高的选择识别能力和较好的色谱性能。其制备方法及后处理操作简单,克服了填充 柱分子印迹聚合物(molecularlyimprintedpolymers,MIPs)材料制备的诸多不足。可作 为色谱的固定相、固相萃取材料、生物传感器和化学反应催化剂等,已被广泛用于环境、生 物、药物分析、食品分析等领域。

【发明内容】

[0006] 为了克服现有技术的不足,本发明的首要目的是提供一种用于检测阿奇霉素的分 子印迹整体微柱的制备方法。该制备方法成本低廉,操作简单。
[0007] 本发明的另一个目的是提供通过上述制备方法制备得到的用于检测阿奇霉素的 分子印迹整体微柱。该分子印迹整体微柱对阿奇霉素有高选择性和亲和性,对阿奇霉素的 回收率达90 %W上。
[000引本发明的目的是通过W下技术方案实现的:
[0009] 一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法,包括W下步骤:将模板、 混合致孔剂、功能单体、交联剂和引发剂在50~80°C聚合12~4她,除去模板后,即得用于 检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱。
[0010] 所述的模板为螺旋霉素或替米考星。
[0011] 所述的混合致孔剂为良性溶剂与非良性溶剂的混合体系。
[0012] 所述的模板、功能单体、交联剂、良性溶剂、非良性溶剂和引发剂的比例为 0. 04mmol:0. 04 ~0. 32mmol:0. 04 ~1. 6mmol: 50 ~200yL:300 ~450yL:1 ~lOmg;分 子印迹整体微柱的体积为20~60yL。
[0013] 所述的功能单体为甲基丙締酸、丙締酸、2-己締基化晚、4-己締基化晚、甲基丙締 酸哲己醋、对己締苯甲酸或丙締酷胺中的一种或多种。
[0014] 所述的交联剂为己二醇二甲基丙締酸醋、S哲甲基丙烷S甲基丙締酸醋或二己締 苯中的一种或多种。
[001引所述的良性溶剂与非良性溶剂的混合体系中,良性溶剂/非良性溶剂为甲苯/ 十二醇,甲苯/庚烧,环己醇/十二醇,二甲基甲酯胺/十二烧,四氨快喃/异辛烧中的一种 W上;优选的混合致孔剂的混合体系为体积比为1:4的甲苯与十二醇的混合液。混合致孔 剂一方面要保证模板的充分溶解,另一方面混合致孔剂的比例对制备的分子印迹整体微柱 透液性、表面特性具有重要影响,同时致孔剂对印迹聚合物在使用介质体系中阿奇霉素的 识别也非常关键,当致孔剂选择甲苯-十二醇(l:4,v/v)时,能够制备出对阿奇霉素具有高 度特异性识别的分子印迹整体微柱。
[0016] 所述的引发剂为水溶性引发剂或油溶性引发剂;所述的油溶性引发剂为偶氮二异 了膳;所述的水溶性引发剂为过硫酸锭。
[0017] 一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备方法,其优选的具体步骤为:
[001引 (1)预聚物的制备:向模板中加入混合致孔剂,祸旋至模板溶解,加入功能单体, 超声,静置,得到预聚物;
[0019] 似聚合固化;向预聚物中加入交联剂和引发剂,超声,通氮气,用移液枪精确移 取一定混合体系至一端封口的小枪头里,密封,真空干燥箱中聚合,得到聚合物;
[0020] (3)用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱的制备;枪头连接注射器,结合可调 流速注射累,溶剂A洗漆去模板,溶剂B洗漆后,即得用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微 柱。
[002U步骤(1)中所述的超声时间为2min;静置时间为比;
[002引步骤似中所述的超声时间为5min;所述的通氮气时间为5min;所述体积为20~ 60yL;所述的真空干燥箱中聚合的温度为50~80°C,时间为12~4她。
[002引步骤做中所述注射器规格为2~10血。
[0024] 步骤(3)中所述的溶剂A为己酸与甲醇的混合溶液,混合溶液中己酸与甲醇的体 积比为1:9 (v/v);所述的溶剂A洗漆的流速为0. 2mL/min;
[002引步骤做中所述的溶剂B为甲醇,体积为6血。
[0026] 一种用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱由上述制备方法获得,所述的的分子 印迹整体微柱对阿奇霉素的回收率为90%W上。
[0027] 根据上述所述的制备方法制备得到的用于检测阿奇霉素的分子印迹整体微柱,该 分子印迹整体微柱对阿奇霉素的回收率达90%W上。对阿奇霉素显示高的交叉反应,具有 高的选择性和特异性,作为分析动物组织、饲料及环境水等基质中阿奇霉素的样品净化前 处理材料有着广泛的应用前景。
[002引本发明的分子印迹整体微柱,经试验检测发现;将该MIPMMC用于固相萃取净化 (15mg/枪头),聚合物结合阿奇霉素的吸附量约为30yg/mg聚合物;在猪肉中添加阿奇霉 素回收率试验表明,在0.5~lOng/g浓度添加水平范围内,阿奇霉素回收率大于86% ;本 发明MIPMMC通过注射器与注射累连接工作,重复使用10次后,阿奇霉素的回收率仍然大于 80%。
[0029] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果:
[0030] (1)本发明制备MIPMMC时,采用的致孔剂为甲苯-十二醇(l:4,v/v),既有利于模 板的溶解,而且制备的整体微柱的透液性能良好,使制备的印迹聚合物特异性识别能力强, 使用方便。
[0031] (2)本发明的制备方法后处理简单,无需研磨过筛,有效的克服了传统聚合方式的 繁琐前处理,同时避免了对有效印迹孔穴的破坏,具有较高的吸附容量。
[003引 做本发明的MIPMMC在己膳、己酸己醋、水加8)中对阿奇霉素呈现高的亲和性 和选择性,回收率大于90%。
[0033] (4)本发明W对螺旋霉
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