抗kir抗体和抗pd-1抗体的组合用于治疗癌症的制作方法
【专利说明】抗KIR抗体和抗PD-1抗体的组合用于治疗癌症
【背景技术】
[0001]自然杀伤（NK)细胞占到外周血淋巴细胞的15%，并在先天免疫系统防止病毒感 染以及癌症的能力中起重要作用（Purdy AK等，Cancer Biol Ther 2009;8:13-22)。疆细胞 通过多种受体与靶细胞结合，这些受体包括天然细胞毒性受体（NCR)、Fc受体CD16、NKG2D 和其它受体。配体与受体的结合开始酪氨酸磷酸化和辅助信号传导分子的募集。这一级联 导致NK细胞的活化、包含穿孔素和粒酶的预成型颗粒释放至靶细胞中以及细胞凋亡。细胞 因子和趋化因子的同时释放形成募集其它免疫细胞的微环境。NK细胞具有结合身体中每一 细胞的能力（Murphy WJ等，Biol Blood Marrow Transplant 2〇l2;l8:S2_S7)。但是，正常 细胞的结合不能导致细胞毒性活性，因为NK细胞能够同时利用不同的受体组以结合主要 组织相容性复合体（MHC) I类分子。人白细胞抗原（HLA)E与NKG2A/CD94异质二聚体受体 的结合，或者HLA-A、B和C分子与抑制性杀伤Ig样受体（KIR)的结合导致酪氨酸磷酸化、 信号传导适配体SHP-I或SHP-2的募集以及下游信号传导。最终的结果是抑制正常激活信 号的主要信号。因此，KIR/HLA相互作用可影响NK细胞反应性以及成熟的反应性NK细胞 总数的发展，称为许可（licensing)。
[0002] 有7种抑制性KIR和7种活化KIR，其是导致KIR遗传和表达的多样性的一种因素。 KIR也在自然杀伤T(NKT)细胞和T细胞的小子集上表达（Uhrberg M等，J. Immunol. 2001 ; 166:3923-3932)。因此，机械地，抑制性KIR的阻断可以通过允许NK细胞以及可能地一些 T细胞的激活而诱导抗肿瘤作用。
[0003] 支持NK细胞参与抗肿瘤反应的证据来自于造血干细胞移植（HSCT)的情形。鉴 于KIR和HLA中的多样性，供体NK细胞上的KIR可能不与主体HLA相互作用（称为KIR失 配）并不是令人惊异的。移植有KIR失配的供体NK细胞的AML患者具有较低复发率（3% 相对于47%，p〈0. 01)以及降低的复发风险（相对风险0. 48,95%CI0. 29-0. 78)的发现为 NK细胞在抗肿瘤反应中的作用提供了科学支持（Ruggeri L等Blood. 2007 ;110:433-440)。
[0004] 在黑色素瘤中，某些KIR和HLA的组合可提供更高免疫抑制性的环境，因为与 非转移性患者相比，在转移性患者中更常见到某些组合（Naumova E等，Cancer Immunol Immunother 2005 ;54:172-178)。对于遭受自身HSCT的高风险成神经细胞瘤患者而言，KIR 失配已经显示出是有利的预后标志物（Delgado DC等，Cancer Res 2010;70:9554-9561)。 用于NK细胞在实体肿瘤中重要作用的实验证据来自于鼠类研宄，其中缺乏T细胞的小鼠在 通过加入IL-15的NK细胞活化后依然可根除大的实体肿瘤（Liu RB等，Cancer Res 2012; 72:1964-1974)。
[0005] 程序性细胞死亡因子I (PD-I)是细胞表面信号传导受体，其在T细胞活化和耐受 的调节中起决定性作用（Keir ME等，Annu Rev Immunol 2008 ;26:677-704)。它是I型跨 膜蛋白，且与BTLA、CTLA-4、ICOS和⑶28 -起构成T细胞共刺激受体的⑶28家族。H)-l 主要在活化的T细胞、B细胞和骨髓细胞上表达（Dong H等，Nat Med 1999;5:1365-1369)。 它也在自然杀伤（NK)细胞上表达（Terme M 等，Cancer Res 2011 ;71:5393-5399)。PD-I 通过它的配体（PD-L1和TO-L2)的结合导致近端细胞内免疫受体酪氨酸抑制域中的酪氨酸 残基的磷酸化，接着是磷酸酶SHP-2的募集，最终导致T细胞活化的下调。ro-i的一个重要 作用是在针对感染的炎性反应时限制外周组织中T细胞的活性，从而限制自身免疫的发生 (Pardoll DM.，Nat Rev Cancer 2012; 12:252-264)。这种负向调节作用的证据来自于PD-I 缺陷小鼠发生狼疮样自身免疫疾病（包括关节炎和肾炎以及心肌症）的发现（Nishimura H 等，Immunity 1999;11:141-151 和 Nishimura H 等，Science 2001;291:319-322)。在 肿瘤情况中，结果是在肿瘤微环境中发生了免疫抵抗。ro-i在肿瘤浸润淋巴细胞上高度表 达，且它的配体在许多不同肿瘤的细胞表面上上调（Dong H等，Nat Med 2002 ;8:793-800)。 多种鼠类癌症模型已经证明，配体与ro-i的结合导致免疫逃避。此外，阻断该相互作用 导致抗肿瘤活性（Topalian SL 等，New Eng J Med 2012 ;366 (26) :2443-2454 ;Topalian SL 等，Curr Opin Immunol 2012 ;24:207-212 ;Brahmer JR 等，New Eng J Med 2012 ; 366(26) :2455-2465 ;Hamid 0等，New Eng J Med 2013 ;369:134-144;Hamid C^PCarvajal RD，Expert Opin Biol Ther 2013; 13 (6):847-861)〇
[0006] 患有转移性或难治性实体肿瘤的患者具有非常不好的预后（Rosenberg SA 等，Cancer immunotherapy in Cancer:Principles &Practice of Oncology(Eds DeVita VT1Lawrence TS and Rosenberg SA)2011 ；332~344(Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia PA))。尽管存在多模式治疗中的进步，在这种患者群体中总体存活 的增加受到限制。因此，本发明的目标是提供用于治疗患有这种肿瘤（如，晚期难治性实体 肿瘤）的患者的改进方法。
【发明内容】
[0007] 本文提供用于治疗人类患者中的癌症（如，晚期难治性实体肿瘤）的方法，包括 向所述患者施用抗KIR抗体和抗ro-i抗体的组合，其中所述组合根据具体临床给药方案 (即，以特定的剂量并根据具体的给药时间表）施用（或用于施用）。在一种非限制性的实 施方式中，所述人类患者患有肿瘤（如，晚期难治性实体肿瘤），所述肿瘤选自非小细胞肺 癌（NSCLC)、肾细胞癌（RCC)、黑色素瘤、结肠直肠癌和浆液性卵巢癌。其它可以治疗的肿瘤 将在下面的【具体实施方式】中描述。
[0008] 示例性的抗KIR抗体是Iirilumab (之前也被称为BMS-986015或IPH2102)(其 包含分别具有如SEQ ID NO: 1和2中所示序列的重链和轻链）或者其抗原结合片段或变 体。在其它实施方式中，所述抗体包含Iirilumab的重链和轻链互补决定区（CDR)或可变区 (VR)。因此，在一种实施方式中，所述抗体包含Iirilumab的重链可变（VH)区的⑶R1XDR2 和CDR3域以及LIRILUMAB的轻链可变（VL)区的CDR1、CDR2和CDR3域，所述Iirilumab的 重链可变（VH)区具有SEQ ID N0:3所示的序列，所述LIRILUMAB的轻链可变（VL)区具有 SEQ ID NO: 5所示的序列。在另一种实施方式中，所述抗体包含分别如SEQ ID NO: 7、8和9 中所示的⑶R1XDR2和⑶R3重链序列，以及分别如SEQ ID NO: 10、11和12中所示的⑶R1、 ⑶R2和⑶R3轻链序列。在另一种实施方式中，所示抗体包含分别具有SEQ ID N0:3和/或 SEQ ID N0:5中所示的氨基酸序列的VH和/或VL区。在另一种实施方式中，所述抗体包含 分别由SEQ ID N0:4和/或SEQ ID N0:6所示的核酸序列编码的VH和/或VL区。在另一 种实施方式中，所述抗体与上述抗体竞争结合KIR上的相同表位，和/或结合与上述抗体相 同的KIR上的表位。在另一种实施方式中，所述抗体具有与上述抗体至少约90%的可变区 氨基酸序列同一性（如，与SEQ ID N0:3或SEQ ID N0:5至少约90%、95%或99%的可变 区同一性）。
[0009] 示例的抗ro-1抗体是nivolumab (在W02006/121168中称为5C4;也称为是 BMS-936558、MDX-1106或0N0-4538)，所述抗体包含具有分别SEQ ID NO: 17和18中所示 序列的重链和轻链，或者它们的抗原结合片段及变体。在其它实施方式中，所述抗体包含 nivolumab的重链和轻链⑶R或VR。因此，在一种实施方式中，所述抗体包含Iirilumab 的VH区的CDR1、CDR2和CDR3域以及Iirilumab的VL区的CDR1、CDR2和CDR3域，所述 Iirilumab的VH区具有SEQ ID NO: 19中所示的序列，所述Iirilumab的VL区具有SEQ ID N0:21中所示的序列。在另一种实施方式中，所述抗体包含具有分别如SEQ ID N0:23、24和 25中所示序列的重链CDR1、CDR2和CDR3域，以及具有分别如SEQ ID N0:26、27和28中所 示序列的轻链⑶Rl XDR2和⑶R3域。在另一种实施方式中，所述抗体包含VH和/或VL区， 所述VH和/或VL区分别具有SEQ ID NO: 19和/或SEQ ID NO:21中所示的氨基酸序列。 在另一种实施方式中，所述抗体包含重链可变（VH)区和/或轻链可变（VL)区，所述重链可 变（VH)区和/或轻链可变（VL)区分别由SEQ ID NO:20和/或SEQ ID NO:22中所示的核 酸序列编码。在另一种实施方式中，所述抗体与上述抗体竞争结合ro-i上的相同表位，和/ 或结合与上述抗体相同的ro-i的表位。在另一种实施方式中，所述抗体与上述抗体具有至 少约90%的可变区氨基酸序列同一性（如，与SEQ ID N0:9或SEQ ID N0:21至少约90%、 95%或99%的可变区同一性）。
[0010] 因此，在一个方面，提供治疗人类患者中的癌症（如，晚期难治性实体肿瘤）的方 法，所述方法包括向所述患者施用有效量