乳酸菌株及其引物组的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种乳酸菌株，尤指关于Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101的一种乳酸菌株及其引物组。
【背景技术】
[0002] 乳酸菌是指能够代谢醣类，并产生50%以上乳酸的细菌，例如：乳酸杆菌 (Lactobacillus)、键球菌（Streptococcus)、念球菌（Leuconostoc)等。人类饮用酿酵乳品 历史非常悠久，所以，乳酸菌一直被认为是非常安全的菌种（GRAS, generally recognized as safe)，是最具代表性的肠内有益菌。
[0003] 乳酸菌是益生菌中最重要的一群，益生菌的定义为某一种或多种微生物当喂食予 人类时可增进人类肠内菌丛的质量。其中，乳酸菌能增进肠内菌丛质量的作用机理有以下 几种：
[0004] (1)生产有机酸、降低肠 PH ;
[0005] (2)和有害菌竞争养份；
[0006] (3)附着于肠粘膜上皮，减少有害菌增殖场所；以及
[0007] (4)产生抗菌物质。
[0008]目前国内许多酿酵乳产品，皆实施大规模人体饮用实验，证明其产品增进肠道有 益菌的效果，且通过卫生署的保健食品认证。
[0009] Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 由台湾国立大学微生物与 生化学研宄所所长潘子明教授及其研发团队所研发的一个优良的本土乳酸菌株。目前，许 多文献已证实L. paracasei subsp. paracasei NTU 101具有改善肠胃道菌相、降血压、降血 月旨、降胆固醇、抗过敏等多种保健功效，深具市场潜力，已有多种产品上市或准备上市。虽 然，L. paracasei subsp. paracasei NTU 101已成功商品化，但是仍缺乏菌株鉴别与申请专 利保护所需的DNA分子识别标记。DNA分子识别标记为可供鉴别特定菌株的DNA序列或是 DNA多型性图谱。
[0010] 因此，为了提供L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的可供鉴别特定菌株的 DNA序列及其DNA多型性图谱，本案的发明人极力加以研宄发明，终于研发完成本发明的一 种NTU 101乳酸菌株及其引物组。
【发明内容】
[0011] 在下文中给出关于本发明的简要概述，以便提供关于本发明的某些方面的基本理 解。应当理解，这个概述并不是关于本发明的穷举性概述。它并不是意图确定本发明的关 键或重要部分，也不是意图限定本发明的范围。其目的仅仅是以简化的形式给出某些概念， 以此作为稍后论述的更详细描述的前序。
[0012] 本发明的主要目的，在于提供关于L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的一 种乳酸菌株及其引物组。
[0013] 因此，为了达成上述本发明的主要目的，本案的发明人提出一种乳酸菌株，为 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 (副干酪乳杆菌副干酪亚种），且 其系寄存于德国微生物菌种保藏中心，寄存编号为DSM 28047,其中该Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101具有SEQ ID NO: 1的一核昔酸序列D前述的该核昔 酸序列可通过逢机增殖多型性DNA(Random Amplification of Polymorphic DNA，RAPD)以 及聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR)的技术进而增幅多条引物增幅而 得。并且，该多条引物系包括具有SEQ ID N0:2的一核苷酸片段与具有SEQ ID N0:3的一 核苷酸片段。
[0014] 进一步地，通过将该Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 与一 碳源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 会产生乳酸。
[0015] 进一步地，该碳源为下列任一种：葡萄糖、半乳糖、D-核糖、木糖、果糖、α -乳糖、 麦芽糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖、肌醇、山梨糖醇、D-甘露糖醇、柠檬酸、糊精、淀粉、以及糖蜜。
[0016] 进一步地，通过将该 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 与一 氮源置入一培养基之中，并经过至少24小时的培养，该Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 会产生乳酸。
[0017] 进一步地，该氮源为下列任一种：酵母萃取物、牛肉膏、蛋白胨、大豆胨、胰蛋白、玉 米浆、酪蛋白、尿素、柠檬酸铵、以及硫酸铵。
[0018] 并且，为了达成上述本发明的主要目的，本发明提出一种用以鉴别前述的 Lactobacillus paracasei subsp. paracasei NTU 101 乳酸菌株的引物组，该引物组为： (1)A3-5F3CGCCGAACGCGACTTACATC(SEQ ID N0:4);或（2)A3-5R3GGCAAATTTAAACTTGCCTTC AACG(SEQ ID N0:4)。其中，通过逢机增殖多型性DNA以及聚合酶链式反应的技术可将该 A3-5F3引物增幅制成具有SEQ ID NO: 1的该核苷酸序列。
[0019] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0020] 本发明使得相关技术人员于L. paracasei subsp. paracasei NTU 101的菌株鉴别 上可以有所依据；并且，进一步地，相关技术人员还可通过DNA分子识别标记来快速地鉴定 NTU 101菌株，而不需要培养分离菌株或者培养活菌。
【附图说明】
[0021] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本 发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可 以根据这些附图获得其他的附图。
[0022] 图1为引物组合A、J与L的RAPD多型性图谱的影像图；
[0023] 图2A为一引物组A与casei group乳酸杆菌的RAPD多型性图谱的比对分析的影 像图；
[0024] 图2B为又一引物组A与casei group乳酸杆菌的RAPD多型性图谱的比对分析的 影像图；
[0025] 图2C为再一引物组A与casei group乳酸杆菌的RAPD多型性图谱的比对分析的 影像图；
[0026] 图3A为一引物组L与casei group乳酸杆菌的RAPD多型性图谱的比对分析的影 像图；
[0027] 图3B为又一引物组L与casei group乳酸杆菌的RAPD多型性图谱的比对分析的 影像图；