一种高产猴头菌诱变菌株h07及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及到一种高产猴头菌诱变菌株H07及制备方法，为一种新的菌株品种， 本发明还提供了该菌株的培育方法，属于生物发酵工程技术领域。
【背景技术】
[0002] 猴头菌属于一种药食两用真菌，在分类学上隶属真菌界，担子菌门，担子菌纲，猴 菇目，猴菇科。猴头菌所含有的营养成分与目前人工栽培的其他食用菌相比都居第一、二 位。对猴头菌的基础与临床应用研究证实猴头菌拥有可靠的药效。它具有营养神经作用， 治疗消化道疾病，抗肿瘤，并有促进人体新陈代谢，提高免疫力，增强人体抗病的活性能力。 因为其毒副作用少，药效可靠，所以它具有很大的开发利用前景。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是提供一株猴头菌诱变菌株H07,为一种新的菌株，其菌丝体干重及 有效成分多糖、腺苷、蛋白质的产量和原始菌株相比具有显著提高。
[0004] 本发明还提供了该菌株的培育方法，适用于工业化生产。
[0005] 本发明所述的猴头菌诱变菌株H07:于2014年12月26日在中国典型培养物保 藏中心保藏，保藏地址：武汉大学，分类名称：猴头菌H07 Hericium erinaceus H07 ;保藏登 记号为 CCTCC NO :M 2014669。
[0006] 本发明所述的猴头菌诱变菌株H07,用以下方法诱变选育而制得，以猴头菌（CICC 14026)为出发菌株，采用化学诱变处理技术，选育出高产的猴头菌高产突变菌株H07。
[0007] 猴头菌诱变菌株H07的特征为：菌丝体干重、多糖、腺苷和蛋白质的含量均有明显 提高，其中菌丝体干重较原出发菌株提高了 73%，腺甘含量提高了 20%，蛋白质含量提高了 51%，多糖含量提高了 69%。
[0008] 该猴头菌诱变菌株H07菌丝生长快速，菌丝体为乳白色，可进行快速液体深层培 养，该菌株的液体深层发酵特征如下： (1) 一级斜面菌种 斜面培养基：葡萄糖 18~20g/L，胰蛋白陈 18~20g/L，KH2P042~3g/L，MgSO4. 7H20 I. 0~2· Og/L，维生素 B10.0 5~0· lg/L，琼脂 15. 0~18· Og/L ; 斜面菌种培养温度26 ± I °C，3~5天菌丝长满斜面，放冰箱（2~4°C )保存备用； (2) 二级摇瓶菌种 种子培养基：葡萄糖 18~20g/L，胰蛋白陈 18~20g/L，KH2P042~3g/L，MgSO4. 7H20 I. 0~2· Og/L，维生素 B10.0 5~0· lg/L ; 种子培养方法：将斜面母种接入液体种子培养基，在26±1°C，120~160r/min的摇床培 养6d ; (3) 摇瓶发酵培养 将种子液按5%接种量接入液体发酵培养基(葡萄糖20~25g/L，胰蛋白陈20~25g/L， KH2P042~4g/L，MgS04. 7Η20 2· 0~4· Og/L，维生素 B1O. 1~0· 2g/L冲进行液体发酵，发酵培养基 装液量为250mL的摇瓶装IOOmL,培养温度26°C，摇床转速为150rpm，培养5d后收获菌丝 体； (4) 100L发酵罐放大培养 将种子液按6%接种量接入60L液体发酵培养基中，于100L发酵罐中进行液体深层发 酵培养，26°C，180r/min，通气量4L/min，初始pH为5. 0,培养48h。
[0009] 本发明培养猴头菌诱变菌株H07的培养基，其特征在于是由以下原料按重量份数 比制成的：葡萄糖 20. 032g/L，胰蛋白陈 19. 976g/L，ΚΗ2Ρ043· 021/L，MgS04. 7H20 I. 793g/L， 维生素 B10.0 95g/L。
[0010] 本发明的积极效果在于：诱变的猴头菌诱变菌株经10次以上传代培养不退化，具 有遗传稳定性，菌丝体干重、多糖、腺苷和蛋白质的含量均有明显提高，其中菌丝体干重较 原出发菌株提高了 73%，腺甘含量提高了 20%，蛋白质含量提高了 51%，多糖含量提高了 69%。
【附图说明】
[0011] 图1为原出发菌株与株突变株的有效成分比较； 图2为葡萄糖浓度和胰蛋白胨浓度对D值影响的响应面和等高线图。
【具体实施方式】
[0012] 为了便于理解本发明，特例举以下实施例。其作用被理解为是对本发明的阐释而 非对本发明的任何形式的限制。
[0013] 实施例1: 猴头菌诱变菌株H07的诱变和选育方法。
[0014] 本发明所述获得高产猴头菌诱变菌株的诱变方法为亚硝基胍化学诱变。
[0015] 1)将猴头菌（CICC 14026)菌株，以3%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的 培养为：葡萄糖 20. 032g/L，胰蛋白陈 19. 976g/L，ΚΗ2Ρ043· 021/L，MgSO4. 7H20 I. 793g/L，维 生素&0.0958/1。26°C恒温摇床中150r/min培养4天后，将猴头菌菌株，接种于斜面培养 基中（葡萄糖 20g/L，胰蛋白陈 20g/L，KH2P043g/L，MgSO4. 7H20 2. Og/L，维生素 B1O. lg/L，琼 脂18. Og/L)，23~26°C恒温箱中培养5天，向斜面试管中注入无菌生理盐水，振荡后用无菌 脱脂棉过滤，稀释成浓度为2 X 107~3 X IO7个/mL的孢子悬液； 2) 在培养皿中加入亚硝基胍IOmg及0. 5mL丙酮后，用PH=6. 0无菌磷酸缓冲液9mL溶 解亚硝基胍，亚硝基胍终浓度为lmg/mL，加入步骤1)中得到的孢子悬液lmL，开始诱变；分 别诱变2~25min之后，取菌悬液于无菌蒸馏水中逐级稀释，至浓度为3 X IO7个/mL，斜面培 养基培养3~5天后，将菌株于96孔板保存； 3) 利用平板初步筛选生长迅速的菌株； 4) 将筛选获得的菌株在摇瓶中复苏，传代后26°C 150rmp恒温摇床中培养3~5天，得菌 丝体。
[0016] 5)获得的高产诱变猴头菌诱变菌株经过连续传代，培养条件为26°C，150r/min恒 温摇床中培养80h，测定各代的菌丝体干重、多糖、腺苷和蛋白质的含量，以筛选高产突变 株。采用HPLC法测定菌丝体中腺甘含量；采用苯酚一硫酸法测定多糖含量；利用考马斯亮 蓝法测定蛋白质含量。
[0017] 共得到3株高产菌株分别命名为H07、H12、H15,其中H07的干重、多糖、腺苷和蛋 白质含量均高于出发菌株，这3株突变株与出发菌株的有效成分比较见图1。选取H07为高 产突变株，命名为：猴头菌Hericium erinaceus，该诱变菌株已于2014年12月26日保藏 于《中国典型培养物保藏中心》，保藏号为：CCTCC NO :M 2014669,根据真菌的系统分类学和 鉴定的进化树表明，菌株属于真菌界，担子菌门，担子菌纲，猴菇目，猴菇科。
[0018] 实施例2: 猴头菌诱变菌株H07与出发菌株比较及遗传稳定性考察 1) 将原始出发菌株与诱变菌株H07分别再培养于种子培养基(葡萄糖20~25g/L，胰蛋 白陈 20~25g/L，KH2P042~4g/L，MgSO4. 7Η20 2. 0~4· Og/L，维生素 B1O. 1~0· 2g/L)中，于 26°C， 150r/min培养5d进行发酵培养，猴头菌诱变菌株菌丝体干重、多糖、腺苷和蛋白质的含量 均有明显提高，菌体体干重达6. 733g/L，较原始出发菌提高了 73% ;多糖含量可达I. 573g/ L，较原出发菌提高了 69% ;腺苷含量可达0. 0237/L，较原出发菌提高了 20% ;蛋白质含量可 达I. 621g//L，较原出发菌提高了 51%。
[0019]
【主权项】
1. 一种猴头菌诱变菌株H07 :分类名称：猴头菌H07 Hericium erinaceus H07 ;于2014 年12月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址：武汉大学，保藏登记号为CCTCC NO :M 2014669。
2. 权利要求1所述的猴头菌诱变菌株H07的制备方法，包括以下步骤： 1) 将猴头菌（CICC 14026)菌株，以3%接种量接种至产孢培养基中，产孢培养基的培 养为：葡萄糖 20. 032g/L，胰蛋白陈 19. 976g/L，KH2P043. 021/L，MgSO4. 7H20 I. 793g/L，维生 素B10.0 95g/L ;26°C恒温摇床中150r/min培养4天后，将猴头菌菌株，接种于斜面培养基 中（葡萄糖 20g/L，胰蛋白陈 20g/L，KH2P043g/L，MgSO4. 7H20 2. Og/L，维生素 B1O. lg/L，琼脂 18. Og/L)，23~26°C恒温箱中培养5天，向斜面试管中注入无菌生理盐水，振荡后用无菌脱 脂棉过滤，稀释成浓度为2 X 107~3 X IO7个/mL的孢子悬液； 2) 在培养皿中加入亚硝基胍IOmg及0. 5mL丙酮后，用PH=6. 0无菌磷酸缓冲液9mL溶 解亚硝基胍，亚硝基胍终浓度为lmg/mL，加入步骤1)中得到的孢子悬液lmL，开始诱变；分 别诱变2~25min之后，取菌悬液于无菌蒸馏水中逐级稀释，至浓度为3 X IO7个/mL，斜面培 养基培养3~5天后，将菌株于96孔板保存； 3) 利用平板初步筛选生长迅速的菌株； 4) 将筛选获得的菌株在摇瓶中复苏，传代后26°C 150rmp恒温摇床中培养3~5天，得菌 丝体； 5) 获得的高产诱变猴头菌诱变菌株经过连续传代，培养条件为26°C，150r/min恒温摇 床中培养80h，测定各代的菌丝体干重、多糖、腺苷和蛋白质的含量，以筛选高产突变株。
【专利摘要】本发明公开了一种猴头菌诱变菌株及其培育方法，于2014年12月26日在中国典型培养物保藏中心保藏，保藏地址：武汉大学，分类名称：猴头菌H07 Hericium erinaceus H07；保藏登记号为CCTCC NO：M 2014669。该菌株是通过化学诱变筛选分离得到的，其菌丝体干重提高了73%，多糖含量提高了69%，腺苷含量提高了20%，蛋白质含量提高了51%。本发明的猴头菌诱变菌株经10代以上传代培养不退化，具有遗传稳定性。本发明还公开了猴头菌诱变菌株的最适发酵培养基。CCTCC NO：M 201466920141226
【IPC分类】C12R1-645, C12N1-14, C12N15-01
【公开号】CN104877914
【申请号】CN201510289395
【发明人】滕利荣, 张峻榕, 逯家辉, 胡爽, 孟庆繁, 闫国栋, 蔡广胜, 张洋, 权宇彤
【申请人】吉林大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年6月1日