一种嗜氯节杆菌海藻糖合成酶及其编码基因和应用
【技术领域】
[0001] 本发明一种嗜氯节杆菌（AriAroAacier SK33. 001)的海藻糖 合成酶及其编码基因和应用，属于基因工程和现代酶工程技术领域。
【背景技术】
[0002] 海藻糖是一种安全、稳定的非还原性二糖，在自然界中广泛存在，如百余种植物、 藻类、真菌、酵母、细菌和无脊椎动物如虾、昆虫、线虫等中都含有一定量的海藻糖。特别是 在酵母、霉菌等真菌中，含量可高达生物体干重的20%以上。海藻糖由两个吡喃环葡萄糖以 α-1，1-糖苷键连结而成。海藻糖存在3种光学异构体，但α，α型是最为常见的海藻糖， 其他两种α，β和β，β型在自然界中很少存在。α，α型海藻糖结构式如式（I)所示。
[0003] 式（I)
【主权项】
1. 一种海藻糖合成酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2. 权利要求1所述的海藻糖合成酶的编码基因，其特征在于：所述的海藻糖合成酶的 编码基因从嗜氯节杆菌（ArtAroAacter SK33. 001)克隆得到，具有下述 核苷酸序列之一： (1) 序列表中的SEQ ID NO. 1的核苷酸序列； (2) 编码序列表中SEQ ID NO. 2氨基酸序列的多核苷酸。
3. 含有权利要求2所述的海藻糖合成酶编码基因的重组表达载体、转基因细胞系或转 基因重组菌。
4. 根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于所述的重组表达载体为将权利要 求2所述的海藻糖合成酶编码基因插入到大肠杆菌表达载体中得到的表达海藻糖合成酶 的重组表达载体；所述的大肠杆菌表达载体优选为pET-28a载体。
5. 根据权利要求3所述的转基因重组菌，其特征在于所述的转基因重组菌是将权利要 求4所述重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选得到表达海藻糖合成酶的转基因重组菌；所 述的大肠杆菌优选为大肠杆菌BL21 (DE3)。
6. 权利要求2说述的海藻糖合成酶编码基因的应用，其特征在于在表达海藻糖合成酶 中的应用。
7. 权利要求1所述的海藻糖合成酶的应用，其特征在于在制备海藻糖中的应用。
8. -种表达权利要求1所述的海藻糖合成酶的方法，其特征在于是培养权利要求3或 5所述的转基因重组菌得到海藻糖合成酶。
9. 一种制备海藻糖的方法，其特征在于是以麦芽糖为底物，用权利要求1所述的海藻 糖合成酶进行催化反应，得到海藻糖；反应底物麦芽糖浓度为l〇〇mM，适合反应温度20~ 40 °C，适合反应pH在6~7. 5。
10. 根据权利要求9所述的制备海藻糖的方法，其特征在于酶反应的最适反应温度为 30°C ;最适反应pH为7. 5。
【专利摘要】本发明公开一种嗜氯节杆菌海藻糖合成酶及其编码基因和应用，属于基因工程和现代酶工程技术领域。该海藻糖合成酶的编码基因从嗜氯节杆菌（Arthrobacter Chlorophenolicus SK33.001）克隆得到，该海藻糖合成酶能一步转化麦芽糖生成海藻糖，酶的适合反应温度为20～40℃，酶的适合反应pH在6～7.5。在最适温度下，转化率可达到65%左右。该海藻糖合成酶能用于转化麦芽糖或麦芽糖浆制备海藻糖，为海藻糖的工业化生产提供了新的方法。
【IPC分类】C12P19-12, C12N1-21, C12N9-90, C12R1-19, C12N15-61, C12N15-70, C12P19-24
【公开号】CN104877984
【申请号】CN201510256646
【发明人】江波, 沐万孟, 蔡雪, 张涛
【申请人】江南大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月20日