一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品功能性成分的制作方法，具体是一种微生物法制备海洋鱼蛋白降 血压肽的方法。
【背景技术】
[0002] 海洋鱼资源丰富，鱼蛋白含量高，是开发利用的良好资源。高血压是目前困扰全球 的一个难题，据世界卫生组织统计，全球大约有超过5亿人患此疾病。高血压发病率逐年升 高，常导致中风、猝死等重大疾病或死亡的发生。食源性活性肽是预防、缓解和治疗高血压 的一个有效手段。海洋鱼蛋白经过微生物发酵，可制备出具有降血压功能的活性肽，可以用 于保健食品的开发利用，符合市场需求。
[0003] 目前鱼蛋白制备降血压肽的方法主要有酶法、复合酶法等，本发明则采用微生物 发酵法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是公开微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法。
[0005] 本发明通过如下技术方案实现。
[0006] 一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法，其包括以下步骤： 前处理：海鱼去皮、骨、刺、杂质后，将鱼肉打成匀浆； 胶原蛋白提取：在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:10或1:15的纯净水，再加入 2000U/g鱼肉-3000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：ρΗ1. 5-2. 5、 35°C -40°C、酶解时间 3h-6h ; 离心分离：酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜制品 或通过干燥加工成为鱼粉；所述离心的转速2000转/min -3000转/min，离心时间10 min -15min ； 发酵液调节：在离心分离得到的上清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠得 发酵液，调节该四种物质在上清液中的质量浓度分别为l%-3%、0. 05%-0. 10%、0. 05%-0. 10%、 0· 1%-0· 3% ;调节发酵液的pH值为7. 0-7. 5 ; 降血压肽制备：在发酵液中接种枯草芽孢杆菌（Baci Ilus subtil is)，接种量为 10%-20% (相对培养物重量)，35°C-38°C发酵，发酵时间为20 h -25h; 超滤：将发酵后的液体进行超滤分离，收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力 在0. 5 MPa -1.0 MPa，室温操作； 干燥：将分子量在3000Da以下的肽组分通过真空冷冻干燥获得降血压肽粉末产品；真 空冷冻干燥时间20 h -30h，温度30°C -35°C，真空度100 Pa -300Pa。
[0007] 与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果： (1)先利用胃蛋白酶处理海洋鱼肉，将胶原蛋白从鱼肉蛋白中分离出来。（2)接种枯草 芽孢杆菌，同时利用微生物的发酵和产酶特性，使海洋鱼胶原蛋白在受到枯草芽孢杆菌侵 蚀的同时，还受到该菌所产的多种蛋白酶的酶解。（3)本方案复合使用胃蛋白酶酶解和枯草 芽孢杆菌发酵技术制备降血压肽。（4)本方案利用枯草芽孢杆菌产酶功能，能产生中性蛋白 酶、碱性蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等多种酶类的特性，使得海洋鱼胶原蛋白的发酵 过程既是微生物发酵过程，又是复合酶解过程，相互协调作用，海洋鱼胶原蛋白受到枯草芽 孢杆菌侵蚀，有利于暴露出多个酶切位点进行复合酶解。（5)不同的发酵参数所能制备出来 的肽组分具有不同的活性或生理功能，本发明采用控制微生物接种量、发酵温度、PH值及发 酵时间的协调作用，达到一种"可控发酵+复合酶解"制备特定功能的活性肽一一降血压肽 的目的。（6)分子量在3000Da以下的肽组分具备降血压功能。
【具体实施方式】
[0008] 以下结合具体的实例对本发明的具体实施进行说明，但本发明的实施和保护不限 于此。
[0009] 实施例一： 海鱼去皮、骨、刺、杂质，鱼肉打成匀浆；在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:10的纯 净水，再加入2000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pHl. 5、35°C、 酶解时间6h ;酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜制品或 通过干燥加工成为鱼粉；离心转速2000转/min，离心时间15min ;在离心分离得到的上 清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠，调节葡萄糖等四种物质的质量浓度分 别为3%、0. 05%、0. 10%、0. 3%。调节发酵液的pH值为7. 0 ;在发酵液中接种枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，接种量为20% (相对培养物重量)，35°C发酵，发酵时间为20h。将发 酵液进行超滤分离，收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力在1.0 MPa，室温操作；将 分子量在3000Da以下的肽组分通过真空冷冻干燥获得降血压肽粉末产品；真空冷冻干燥 时间20h，温度35°C，真空度lOOPa。
[0010] 实施例二： 海鱼去皮、骨、刺、杂质，鱼肉打成匀浆；在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:15的纯 净水，再加入3000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH2. 5、40°C、 酶解时间3h ;酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜制品或 通过干燥加工成为鱼粉；离心转速3000转/min，离心时间IOmin ;在离心分离得到的上 清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠，调节葡萄糖等四种物质的质量浓度分 别为1%、0. 10%、0. 05%、0. 1%%。调节发酵液的pH值为7. 5 ;在发酵液中接种枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，接种量为10% (相对培养物重量)，38°C发酵，发酵时间为25h ;将发 酵液进行超滤分离，收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力在0. 5MPa，室温操作；将 分子量在3000Da以下的肽组分通过真空冷冻干燥获得降血压肽粉末产品；真空冷冻干燥 时间30h，温度30°C，真空度300Pa。
[0011] 活性肽功能测定： 表1海洋鱼蛋白生物活性肽的降血压功能
【主权项】
1. 一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法，其特征是包括以下步骤： 前处理：海鱼去皮、骨、刺、杂质后，将鱼肉打成匀浆； 胶原蛋白提取：在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:10或1:15的纯净水，再加入 2000U/g鱼肉-3000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pHl. 5-2. 5、 35°C -40°C、酶解时间 3h-6h ; 离心分离：酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜制品 或通过干燥加工成为鱼粉；所述离心的转速2000转/min -3000转/min，离心时间10 min -15min ； 发酵液调节：在离心分离得到的上清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠得 发酵液，调节该四种物质在上清液中的质量浓度分别为l%-3%、0. 05%-0. 10%、0. 05%-0. 10%、 0? 1%-0. 3% ;调节发酵液的pH值为7. 0-7. 5 ; 降血压肽制备：在发酵液中接种枯草芽孢杆菌（Baci Ilus subtil is)，接种量为 10%-20%，35°C -38°C发酵，发酵时间为 20 h -25h ; 超滤：将发酵后的液体进行超滤分离，收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力 在0. 5 MPa -1.0 MPa，室温操作； 干燥：将分子量在3000Da以下的肽组分通过真空冷冻干燥获得降血压肽粉末产品；真 空冷冻干燥时间20 h -30h，温度30°C -35°C，真空度100 Pa -300Pa。
2. 根据权利要求1所述的微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法，其特征是按以下 步骤进行： 海鱼去皮、骨、刺、杂质，将鱼肉打成匀浆；在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:10 的纯净水，再加入2000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH1.5、 35°C、酶解时间6h ;酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜 制品或通过干燥加工成为鱼粉；所述离心转速2000转/min，离心时间15min ;在离心分离 得到的上清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠，调节该四种物质的质量浓度 分别为3%、0. 05%、0. 10%、0. 3% ;调节发酵液的pH值为7. 0 ;在发酵液中接种枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，接种量为20%，35°C发酵，发酵时间为20h ;将发酵液进行超滤分离， 收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力在1.0 MPa，室温操作；将分子量在3000Da以 下的肽组分通过真空冷冻干燥获得降血压肽粉末产品；真空冷冻干燥时间20h，温度35°C， 真空度lOOPa。
3. 根据权利要求1所述的微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法，其特征是按以下 步骤进行： 海鱼去皮、骨、刺、杂质，将鱼肉打成匀浆；在鱼肉匀浆中加入与鱼肉质量比为1:15 的纯净水，再加入3000U/g鱼肉的胃蛋白酶处理鱼肉提取胶原蛋白，酶解条件是：pH2. 5、 40°C、酶解时间3h ;酶解后的鱼肉糜混合液通过离心分离，取上清液备用，沉淀作为鱼糜 制品或通过干燥加工成为鱼粉；离心转速3000转/min，离心时间IOmin ;在离心分离得 到的上清液中加入葡萄糖、氯化钙、硫酸镁和磷酸氢二钠，调节该四种物质的质量浓度分 别为1%、0. 10%、0. 05%、0. 1%% ;调节发酵液的pH值为7. 5 ;在发酵液中接种枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)，接种量为10%，38°C发酵，发酵时间为25h ;将发酵液进行超滤分离， 收集分子量在3000Da以下的肽组分；超滤压力在0. 5MPa，室温操作；将分子量在3000Da以
【专利摘要】本发明公开一种微生物法制备海洋鱼蛋白降血压肽的方法，属于食品加工领域。本发明以海洋鱼为原料，采用胃蛋白酶酶解和枯草芽孢杆菌发酵法，制备生物活性肽降血压肽。先利用胃蛋白酶处理海洋鱼肉，将胶原蛋白从鱼肉蛋白中分离出来。接种枯草芽孢杆菌，同时利用微生物的发酵和产酶特性，使海洋鱼胶原蛋白在受到枯草芽孢杆菌侵蚀的同时，还受到该菌所产的多种蛋白酶的酶解。本发明采用控制微生物接种量、发酵温度、pH值及发酵时间的协调作用，达到一种“可控发酵+复合酶解”制备特定功能的活性肽——降血压肽的目的。
【IPC分类】C12P21-06
【公开号】CN104878062
【申请号】CN201510248644
【发明人】王娟, 汪雨亭, 黄儒强
【申请人】华南理工大学
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2015年5月18日