包含抗体和甲磺酸卡莫司他(cm)的组合物的制作方法
【专利说明】包含抗体和甲磺酸卡莫司他（CM)的组合物
【背景技术】
[0001] 绝大多数生物药物（尤其是治疗性抗体及其片段）通过胃肠外途径（例如静脉或 皮下注射）进行给药。这些给药途径通常是不方便且痛苦的，这降低了患者的顺应性，尤其 是当需要每日多次注射时。对于保健医疗提供者而言，在工作人员的时间、储存和设备方 面，这些生物药物也是花费巨大的。
[0002] 口服给药生物药物将克服许多的这些缺点，但也具有其自身的问题。具体地，这些 分子易在胃和肠的蛋白酶富集的环境中发生蛋白降解。
[0003] 重点是，对治疗胃肠（GI)道疾病的口服药物存在需求。尤其是对以低剂量使用的 药物存在需求，以降低系统毒性的风险。
[0004] 因此，迫切地需要稳定蛋白以便使它们抵御胃肠道的蛋白酶富集的环境，从而促 成成功口服给药生物药物。
[0005] 发明概述
[0006] 本发明提供了组合物（任选地药物组合物），其包含甲磺酸卡莫司他（camostat mesylate)和抗体。
[0007] 提供了用作药物的本发明的组合物。还提供了本发明的组合物在制备药物中的用 途。尤其是所述组合物是口服给药的。
[0008] 本发明提供了治疗胃肠道病症的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患者给药 (任选地口服给药）本发明的组合物。
[0009] 本发明还提供了在蛋白酶富集的溶液中稳定抗体的方法，其包括将该抗体配制于 包含甲磺酸卡莫司他的组合物中，在该组合物暴露于蛋白酶富集的溶液之前。
【附图说明】
[0010] 图1显示了在SIF中，单克隆抗体（mAb)的稳定性的缺乏：（a)显示的是代表性的 SDS-PAGE凝胶，（b)显示的是所测试的mAb的半衰期。
[0011] 图2显示了在SIF中，CM稳定mAb的能力：(a)显示的是代表性的SDS-PAGE凝胶， (b)显示的是在存在或不存在CM时，所测试的mAb的半衰期。
[0012] 图3显示了在ELISA中，完整的mAb与其配体的结合：（a)显示的是抗-IL6结合测 定的结果，（b)显示的是抗-IL23结合测定的结果。结果以初始mAb的百分比表示（Oh时 间点=100% )。
[0013] 发明详述
[0014] 本发明提供了对上述问题的解决方法。本发明提供了稳定抗体的方法。提供了组 合物，尤其是药物组合物，其包含抗体和甲磺酸卡莫司他，以及所述组合物作为药物和在治 疗方法中的用途。本文的实施例表明，在禁食的模拟肠液中，可使用甲磺酸卡莫司他（CM) 来稳定单克隆抗体。所述抗体保留了结构完整性和结合能力。因此，该数据支持了CM在口 服递送生物药物以局部治疗GI病症（例如克罗恩病或溃疡性结肠炎）以及直接作用于肠 黏膜免疫系统中的用途。
[0015] 甲磺酸卡莫司他（CAS号：59721-29-8)的化学名为4-[[4_[(氨基亚氨基甲基） 氨基]苯甲酰基]氧基]苯乙酸2-(二甲基氨基）-2-氧代乙基酯甲磺酸盐且其可从例 如SequoiaResearchProducts购得。甲磺酸卡莫司他（CM)是有口服活性的丝氨酸蛋 白酶抑制剂，其在日本和韩国被批准用于治疗胰腺炎和术后食道反流（FoipanProduct informationsheet；Takasugi等人，Digestion1982,24:36 - 41;Kono等人，AmJ Surg. 2005S印，190(3) : 412-7)。CM具有广谱抑制，包括胰蛋白酶、凝血酶、激肽释放酶和 纤溶酶（Tamura等人，1977，BiochimicaetBiophysicaActa484,417 _ 422)。CM在肠 内的代谢尚不明确，但是代谢产物GBPA本身是有活性的（Beckh等人，ResExpMed，1987， 187:401-406)。
[0016] 本文所用术语"抗体"是指具有免疫球蛋白样结构域（例如IgG、IgM、IgA、IgD或 IgE)的分子，且包括单克隆抗体、重组抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、人抗体、人源化抗体、多 特异性抗体（包括双特异性抗体）和异源缀合抗体（heteroconjugateantibodies)。在一 个实施方式中，所述抗体为单克隆抗体。在一个实施方式中，所述抗体为人源化抗体。在一 个实施方式中，所述抗体为人抗体。
[0017] 抗祀点（anti-target)抗体，例如抗-TNFa抗体，是指结合祀点（例如TNFa)的 抗体。所述靶点可为任何合适的靶点。在一个实施方式中，本发明的抗体靶向以下的任一 种：1呖(1、11^23、1^6-3、11-6、11-13、11-18、151^、0)3或前述任一个的受体，例如1呖€[受 体（例如TNFRaRI或TNFRaRII)、IL-23 受体、LAG-3 受体、IL-6 受体、IL-13 受体、IL-18 受体、TSLP受体或CD3受体。在一个实施方式中，本发明的抗体靶向趋化因子或趋化因子 受体，例如谷氨酸-亮氨酸-精氨酸受体，即ELR受体（例如包含SEQIDNO: 12和19-22 所示的氨基酸序列的受体）。在一个实施方式中，所述靶点为人靶点，例如人TNFa。
[0018] 亲和力是一个分子（例如本发明的抗体）与另一个分子（例如其靶点）在单一结 合位点处结合的力。抗体与其靶点的结合亲和力可通过平衡方法（例如酶联免疫吸附测定 (ELISA)或放射免疫测定（RIA))或动力学（例如BIAC0RE?分析）进行测定。
[0019] 在一个实施方式中，所述抗体-靶点间的相互作用的平衡解离常数（KD)为100nM 或更小、10nM或更小、2nM或更小或InM或更小。或者，该KD可在5至10nM之间；或1至 2nM之间。该KD可在lpM至500pM之间；或500pM至InM之间。本领域技术人员将理解， KD数值越小，结合越强。KD的倒数（即1/KD)为具有单位M4的平衡结合常数（KA)。本领 域技术人员将理解，KA数值越大，结合越强。
[0020] 解离速率常数（kd)或"解离速率（Off-rate) "描述了抗体-靶点复合物的稳定性， 即每秒发生衰变的复合物的比例。例如，O.OlsH的kd等于每秒有1%的复合物发生衰变。 在一个实施方式中，该解离速率常数（kd)为lxl(r3s_1或更小、lxl(T4s_1或更小、lxl(T5s_1或 更小，或IxKTY1 或更小。该kd可在 1x10 _5s_i至 1x10 _4s_i之间；或 1x10 _4s_i至 1x10、―1 之间。
[0021] 在整个申请中所用的术语"中和"是指，在存在本文所述的抗体的情况下，靶点的 生物活性相比于不存在该抗体的靶点的生物活性有所降低，无论是在体外还是体内。中和 可归因于以下的一种或多种：阻断所述靶点与其受体结合、防止靶点激活其受体、下调该靶 点或其受体，或影响效应器的功能。在一个实施方式中，本发明的抗体中和其靶点。
[0022] 本文所用的"口服给药"是指经口给药本文公开的组合物。本发明的组合物通常 经吞咽并进入到其发挥作用的胃肠（GI)道。
[0023] "胃肠（GI)道"包括上消化道（upperGItract) :口、咽、食道和胃；和下消化道 (lower GItract):小肠、十二指肠、空肠、回肠、大肠（盲肠、结肠，包括升结肠、横结肠、降 结肠和乙状结肠）、直肠和肛门；以及胆、肝和胰。本发明的组合物可靶向任一或多个上述 GI道区域。在一个实施方式中，组合物革E1向小肠。在一个实施方式中，组合物革E1向大肠。
[0024] 本文所公开的药物组合物可治疗任一或多种本文所描述的人疾病。在一个实施方 式中，所述药物组合物包含抗体，其任选地与一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形 剂组合。
[0025] 这样的组合物包含药学上可接受的载体，该载体是已知的且符合可接受的药 学实践的要求，参见例如RemingtonsPharmaceuticalSciences，第 16 版（1980)Mack PublishingCo.。制备这样的药物组合物的方法是本领域技术人员熟知的。
[0026] 在一个实施方式中，本发明的药物组合物是口服给药的。包括多种剂型，包括液体 (溶液、混悬液（水性或油性）和乳液）、半固体（糊剂）、薄膜和固体（片剂、锭剂、胶囊、粉 剂、晶体和颗粒）。
[0027] 用于口服给药的液体分散剂可以是糖浆、乳液和混悬液。所述糖浆可包含作为载 体的，例如，蔗糖或蔗糖与甘油和/或甘露醇和/或山梨糖醇。
[0028] 混悬液和乳液可包含作为载体的，例如天然树胶、琼脂、海藻酸钠、果胶、甲基纤维 素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。
[0029] 药物组合物，尤其是固体组合物（例如片剂和胶囊），可为肠溶包衣的。用 于肠溶包衣的材料包括脂肪酸、蜡、虫胶、塑料和植物纤维。合适的肠溶包衣公开于 EURDAGIT?ApplicationGuidelines(第 11 版，09/2009)中。
[0030] 给药所述抗体的有效剂量和治疗方案可取决于各种因素，例如患者的年龄、体重 和健康状况，以及待治疗的疾病。这些因素是在主治医师的认识范围之内的。对于选择合适 剂量的指导可见于例如Smith等人（1977)Antibodiesinhumandiagnosisandtherapy， RavenPress，NewYork〇
[0031] 抗体与甲磺酸卡莫司他在本发明的组合物中的比例可约为1:0. 1、1:1、1:10、 1:25、1:50或1:100。在一个实施方式中，单一可变域与甲磺酸卡莫司他在本发明的组合物 中的比例约为1:100。在一个实施方式中，单一可变域与甲磺酸卡莫司他在本发明的组合物 中的比例约为1:10。
[0032] 所述药物组合物可包括所述抗体以及其他药物的试剂盒，任选地附有使用说明。 为了方便起见，所述试剂盒可包含预定量的试剂以及使用说明。
[0033] 本发明提供了治疗本文所公开的疾病的方法，其包括以下步骤：向有此需要的患 者给药本发明的组合物。
[0034] 本发明还提供了本文所描述的组合物在制备治疗本文所列疾病和病症的药物中 的用途。可用本发明的组合物治疗的疾病和病症包括胃肠道病症。
[0035] "胃肠道病症"是影响GI道的病症，其包括肠炎、直肠炎、炎性肠病（IBD)(包括克 罗恩病）、结肠炎（包括溃疡性结肠炎）、乳糜泻、贝赫切特综合征（Behet'ssyndrome)和 口腔粘膜炎。在一个实施方式中，所述胃肠道病症为IBD。在一个实施方式中，所述胃肠道 病症为克罗恩病。在一个实施方式中，所述胃肠道病症为溃疡性结肠炎。
[0036] 任何可通过靶向GI道进行治疗的其他疾病均涵盖在通过本公开的方法所治疗的 疾病中。例如，本公开的单一可变域（其结合GI道内的靶点）可能会造成超越GI道的效 果，从而治疗系统疾病。
[0037] 术语"个体"、"受试者"和"患者"在本文中可互换使用。所述受试者通常为人。所 述受试者也可为哺乳动物，例如小鼠、大鼠或灵长类动物（例如狨猴或猴）。所述受试者可 以是非人动物。
[0038] 治疗可以使治疗性的、预防性的（prophylactic)或防范性的（preventative)。所 述受试者将是需要此治疗的个体。需要治疗的那些个体，除了可能在将来发展成特定医学 疾病的个体，可包括已经患有所述疾病的个体。治疗有效量的本文所描述的抗体是有效地 改善或减轻该疾病的一种或多种症状或者预防或治愈该疾病的量。