一种拉科酰胺类似物的分离方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种拉科酰胺类似物的分离方法。
【背景技术】
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[0003] 拉科酰胺，一种新型N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA)受体甘氨酸位点拮抗剂，它可 选择性促进钠通道缓慢失活并调节塌陷反应介导蛋白22 (CRMP22)，属于新一类功能性氨基 酸，具有全新双重机制作用的抗癫痫药物。在中国癫痫已经成为神经科仅次于头痛的第二 大常见病，我国对抗癫痫药物有着巨大需求，而拉科酰胺的作用机制不同于已上市的其他 抗癫痫药，对现有药物无法控制症状的患者有较好的疗效，因此拉科酰胺的临床用量需求 较大，市场前景好，其原料药与制剂的开发都具有重要意义。
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[0005] 目前在文献中报道过的拉科酰胺合成方法多以中间体式III通过脱保护再上乙 酰基得到拉科酰胺，如原研公司的专利CN101928230A、浙江九洲药业股份有限公司的专利 CN102020589A 以及中国专利 CN103319366A。
[0006] 众所周知，为了确保药品安全，须对药物质量进行严格控制，药物含量测定、未知 杂质的结构鉴定和杂质限量是药物质量控制的有效方法，杂质分析是药物质量标准的重要 内容。目前，国内外尚未见拉科酰胺类似物的报道。
[0007] 因此，本领域亟需对拉科酰胺类似物进行分离、鉴定并合成。
【发明内容】
[0008] 本发明所要解决的问题是为了克服现有技术中缺乏拉科酰胺在合成过程中产生 的类似物的分离、鉴定并合成等缺陷，而提供了一种拉科酰胺类似物的分离方法。本发明的 拉科酰胺类似物是对拉科酰胺进行质量控制的必需品；本发明的分离方法可以高效地分离 得到上述的类似物。
[0009] 发明人在研发过程中发现，中间体式III的合成过程中会产生杂质，对终产品拉 科酰胺的质量和收率的影响很大。如果反应条件不当，生成杂质过多，就会在后面步骤中被 衍生化产生更多更复杂的杂质，会严重影响拉科酰胺的药物质量和最终收率，因此，中间体 式III的质量控制至关重要。我方将其分离鉴定，发现其结构如式I所示。
[0010] 本发明提供了一种如式I所示的拉科酰胺类似物的分离方法，其包括下列步骤：
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[0012] (a)将拉科酰胺类似物的反应母液进行水洗、酸洗再水洗；
[0013] (b)减压浓缩蒸除有机溶剂，得到油状物；
[0014] (C)将所述的油状物进行正相柱层析或高效液相制备色谱，得到式I化合物即可；
[0015] 所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法，包括下述步骤：在有机溶剂和水 的两相溶剂中，在碱和相转移催化剂的存在下，将式II化合物与甲基化试剂进行取代反 应，得到即可；
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[0017] 在所述的分离方法中，所述的酸可为本领域后处理中常规的酸，较佳地为经水稀 释后的酸，更佳地为质量分数为5%的磷酸水溶液。
[0018] 在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的条件较佳地为：流动相为正己烷或石 油醚，与乙酸乙酯的混合液，进行洗脱。
[0019] 在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的色谱柱的内径较佳地为30_ ;所述的 正相柱层析的色谱柱的长度较佳地为400mm。
[0020] 在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的填料较佳地为硅胶；所述的硅胶较佳 地为100目~200目的硅胶。
[0021] 在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的流动相中，较佳地，当所述的流动相为 正己烷和乙酸乙酯时，正己烷和乙酸乙酯的体积比为2~5(例如3);当所述的流动相为石 油醚和乙酸乙酯时，石油醚和乙酸乙酯的体积比为2~4(例如2. 5)。
[0022] 在所述的分离方法中，所述的正相柱层析的洗脱体积较佳地为5~10个柱体积， 例如7或8个柱体积。
[0023] 在所述的分离方法中，较佳地，所述的正相柱层析的洗脱液经蒸馏除去溶剂，得到 式I化合物。
[0024] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的条件较佳地为：流动相A为乙 腈或甲醇，流动相B为水，进行梯度洗脱。
[0025] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的色谱柱较佳地为Varian L&L4002 ;所述的高效液相制备色谱的色谱柱的内径较佳地为50mm ;所述的高效液相制备 色谱的色谱柱的长度较佳地为200mm。
[0026] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的填料较佳地为PLRP-S ;所述的 高效液相制备色谱的填料的粒径较佳地为10 μ m，孔径较佳地为10nm。
[0027] 在所述的分离方法中，所述的梯度洗脱较佳地为0 - 15min，A:B = 30:70 ; 15 - 55111丨11，4:8 = 30:70 - 80:20;55 - 65111丨11，4:8 = 90:10，进行线性梯度洗脱。
[0028] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的流速较佳地为100mL/min。
[0029] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的检测波长较佳地为210nm。
[0030] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的温度较佳地为25°C~35°C。
[0031 ] 在所述的分离方法中，所述的高效液相制备色谱的洗脱液较佳地经蒸馏除去溶 剂，得到式I化合物。
[0032] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的有机溶剂可为本领域 该类反应常规的有机溶剂，较佳地为甲苯或二氯甲烷，更佳地为甲苯。
[0033] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的有机溶剂与式II化 合物的体积摩尔比可为本领域该类反应常规的体积摩尔比，较佳地为4L/mol~5L/mol，例 如 4. 8L/mol。
[0034] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的水与式II化合物的 体积摩尔比可为本领域该类反应常规的体积摩尔比，较佳地为〇. lL/mol~0. 5L/mol，更佳 地为 0· 17L/mol ~0· 28L/mol，例如 0· 24L/mol。
[0035] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的有机溶剂与所述的水 的体积比可为本领域该类反应常规的体积比，较佳地为17~28,例如20。
[0036] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的碱可为本领域该类反 应常规的碱，较佳地为无机碱，更佳地为氢氧化钠和/或氢氧化钾。
[0037] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的碱与式II化合物的 摩尔比可为本领域该类反应常规的摩尔比，较佳地为3~5,例如4. 2。
[0038] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的相转移催化剂可为本 领域该类反应常规的相转移催化剂，较佳地为季铵盐相转移催化剂，更佳地为四丁基溴化 铵。
[0039] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的相转移催化剂与式II 化合物的摩尔比可为本领域该类反应常规的摩尔比，较佳地为0. 1~0. 15,例如0. 12。
[0040] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的甲基化试剂可为本领 域该类反应常规的甲基化试剂，较佳地为碘甲烷、硫酸二甲酯和对甲苯磺酸甲酯中的一种 或多种，更佳地为硫酸二甲酯。
[0041] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的甲基化试剂与式II 化合物的摩尔比可为本领域该类反应常规的摩尔比，较佳地为3~5,例如4。
[0042] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的取代反应的温度可为 本领域该类反应常规的温度；较佳地为〇°C~50°C，更佳地为25°C~35°C。温度超过45°C 时会导致Boc-保护基的脱除，从而收率下降。
[0043] 在所述的拉科酰胺类似物的反应母液的制备方法中，所述的取代反应的时间较佳 地为3h~100h，例如21h、40h、96h。在3h~IOOh范围内，反应时间越长，收率越高。
[0044] 本发明还提供了上述如式I所示的拉科酰胺类似物作为标准品在下述由式II化 合物制备式ΠΙ化合物的反应中的终点控制的应用，
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[0046] 本发明中，取代基Boc-为本领域常规所知的叔丁氧羰基。
[0047] 其中，所述的应用较佳地包括下述步骤：将如式I所示的拉科酰胺类似物标准品 溶液和所述反应的反应液分别进行高效液相色谱检测，根据如式I所示的拉科酰胺类似物 标准品色谱图的保留时间确定反应液中相关物质的峰，并根据峰面积计算反应液中式I化 合物的含量，从而最终实现反应终点的控制。
[0048] 其中，所述的高效液相色谱的条件优选如下：流动相A为0. 005~0. 02mol/L磷酸 二氢钾溶液，pH值为2. 8~3. 2,流动相B为乙腈，以流动相A :流动相B按体积比为（55~ 65) : (45~35)进行洗脱，柱温为20~30°C，检测波长为210nm，流速为I. 0~2. OmL/min， 进样量15~25 μ L，如式I所示的拉科酰胺类似物