人copb2基因的用途及其相关药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，更具体地涉及人C0PB2基因的用途及其相关药物。
【背景技术】
[0002] 核糖核酸干扰（RNA interference, RNAi)现象是指当与内源性mRNA编码区某 段序列同源的双链RNA (dsRNA)导入细胞后，该mRNA发生特异性降解，而导致该基因 表达的沉默。研究表明，长度为21-23nt的双链RNA能够在转录和转录后水平特异性 的引起 RNAi (Tuschl T, Zamore PD,Sharp PA, Bartel DP. RNAi:double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at2Ito23nucleotide intervals. Cell2000;101:25-33.)。肿瘤是威胁人类健康的主要疾病。肿瘤患者虽经化疗、放疗和综 合治疗，但五年生存率仍很低，如能对肿瘤发病和进展有关的基因进行干预，将能为肿瘤的 治疗开辟新途径。近年来，RNAi已成为肿瘤的基因治疗的有效策略。利用RNAi技术可以 抑制原癌基因、突变的抑癌基因、细胞周期相关基因、抗凋亡相关基因等的表达来抑制肿瘤 的发生和发展（Uprichard, Susan L. The therapeutic potential of RNA interference. FEBS Letters2005;579:5996-6007. )〇
[0003] C0PB2 (coatomer protein complex, subunit beta2)是一种衣被蛋白复合体，亚 基β2(β原初），是一种蛋白转运蛋白，主要分布在内质网、高尔基堆叠、膜、COPI膜泡衣 被，参与细胞内蛋白运输、内质网商尔基I旲泡介导运输、退行I旲泡介导运输，商尔基内质 网、内商尔基I旲泡介导运输等。
[0004] 有研究发现，C0PB2在多种肿瘤组织呈现高表达。Erdogan等人发现在肺 腺癌中，C0PB2基因呈现高表达，在肺癌侵袭过程中发挥了一定的作用，Meta-分析 发现在乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌和胰腺癌以及脑胶瘤的样本中与PKCiota的表达有 密切的关系。（Erdogan E, Klee EW, Thompson EA, Fields AP.，Meta-analysis of oncogenic protein kinase Ciota signaling in lung adenocarcinoma. Clin Cancer Res. 2009Marl;15(5) :1527-33)。Sudo等人发现，在间皮瘤细胞中，敲减Copb2基因的表 达后，能明显抑制细胞增殖，有一定的抗凋亡作用。（Sudo H, Tsuji AB, Sugyo A, Kohda M, Sogawa C, Yoshida C, Harada YN, Hino 0, Saga T. Knockdown of COPA, identified by loss-〇f-function screen, induces apoptosis and suppresses tumor growth in mesothelioma mouse model. Genomics. 2010Apr;95(4) :210-6.)，基于以上研究，推测其可 能与肿瘤的发生发展有一定的联系。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于公开与人 COPB2 (coatomer protein complex, subunit beta2) 基因相关的治疗方法及药物，以RNA干扰（RNAi)为手段研究C0PB2基因在肿瘤细胞的存活 和凋亡过程中的作用。
[0006] 本发明第一方面，以RNA干扰为手段，研究了 C0PB2基因在肿瘤发生和发展中的作 用，公开了一种抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿 瘤细胞施用一种能够特异性抑制C0PB2基因的转录或翻译，或能够特异性抑制eIF5B蛋白 的表达或活性的分子，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化和/或存活。
[0007] 所述肿瘤细胞选自其生长与C0PB2蛋白的表达或活性相关的肿瘤细胞。较优的， 所述肿瘤细胞选自肺癌、结肠癌之任一。
[0008] 所述抑制或降低肿瘤细胞生长、增殖、分化和/或存活的方法中，所述分子的施用 量为足够降低C0PB2基因的转录或翻译，或者足够降低C0PB2蛋白的表达或活性的剂量。进 一步的，所述C0PB2基因的表达至少被降低50%、80%、90%、95%或99%。
[0009] 所述分子可选自但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、 多肽、蛋白或干扰慢病毒。
[0010] 所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶 ΠΙ制备的小干扰RNA (esiRNA)或者短发夹RNA (shRNA)。
[0011] 所述双链RNA、核酶、esiRNA或者ShRNA含有C0PB2基因的启动子序列或C0PB2基 因的信息序列。
[0012] 进一步的，所述双链RNA为小干扰RNA(SiRNA)。所述小干扰RNA包含第一链和第 二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与C0PB2 基因中15-27个连续的核苷酸序列基本相同。所述小分子干扰RNA能特异性结合靶序列所 编码的mRNA片段，并特异性沉默人C0PB2基因的表达。
[0013] 进一步的，所述小干扰RNA的第一链序列与C0PB2基因中的靶序列基本相同。较 优的，所述C0PB2基因中的靶序列含有SEQ ID NO: 1-10中之任一序列。
[0014] 所述C0PB2基因中的靶序列即为所述小分子干扰RNA特异性沉默C0PB2基因表达 时，与所述的小分子干扰RNA互补结合的mRNA片段所对应的C0PB2基因中的片段。
[0015] 较佳的，所述C0PB2基因来源于人。
[0016] 本发明第一方面还公开了一种分离的人C0PB2基因在制备或筛选肿瘤治疗药物， 或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。
[0017] 进一步的，所述肿瘤选自肺癌或结肠癌之任一。
[0018] 所述将分离的C0PB2基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其 一，将C0PB2基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物或制 剂 ;其二，将C0PB2基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药 物或制剂。
[0019] 所述将C0PB2基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治 疗药物或制剂具体是指：将C0PB2基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药 物或制剂，从而能降低肿瘤细胞内C0PB2基因的表达水平。
[0020] 所述将C0PB2基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治 疗药物或制剂具体是指：C0PB2基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑 制或促进人C0PB2基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如本发明所述的C0PB2基因小 分子干扰RNA (SiRNA)即是以人C0PB2基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤 细胞增殖作用的药物。除此之外，诸如抗体药物，小分子药物等也可将C0PB2基因及其蛋白 作为作用对象。
[0021] 所述将C0PB2基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将C0PB2基因表达产物作为一项 肿瘤诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。
[0022] 所述肿瘤治疗药物为能够特异性抑制C0PB2基因的转录或翻译，或能够特异性抑 制C0PB2蛋白的表达或活性的分子，从而降低肿瘤细胞中C0PB2基因的表达水平，达到抑制 肿瘤细胞的增殖、生长、分化和/或存活的目的。
[0023] 所述通过分离的C0PB2基因制备或筛选获得的肿瘤治疗药物或者肿瘤诊断药物 包括但不限于：核酸分子、碳水化合物、脂类、小分子化学药、抗体药、多肽、蛋白或干扰慢病 毒。
[0024] 所述核酸包括但不限于：反义寡核苷酸、双链RNA (dsRNA)、核酶、核糖核酸内切酶 ΠΙ制备的小干扰RNA (esiRNA)或者短发夹RNA (shRNA)。
[0025] 所述肿瘤治疗药物的施用量为足够降低人C0PB2基因的转录或翻译，或者足够降 低人C0PB2蛋白的表达或活性的剂量。以使人C0PB2基因的表达至少被降低50%、80%、90%、 95% 或 99%。
[0026] 采用前述肿瘤治疗药物治疗肿瘤的方法，主要是通过降低人C0PB2基因的表达水 平抑制肿瘤细胞的增殖来达到治疗的目的。具体的，治疗时，将能有效降低人C0PB2基因表 达水平的物质给药于患者。
[0027] 本发明第二方面公开了一种降低肿瘤细胞中C0PB2基因表达的分离的核酸分子， 所述核酸分子包含：
[0028] a)双链RNA，所述双链RNA中含有能够在严紧条件下与C0PB2基因杂交的核苷酸 序列；或者
[0029] b) shRNA，所述shRNA中含有能够在严紧条件下与C0PB2基因杂交的核苷酸序列。
[0030] 进一步的，所述双链RNA包含第一链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共 同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列与C0PB2基因中15-27个连续的核苷酸序列基 本相同