一种青黛酮的制备方法及抗肿瘤应用

文档序号:8933118阅读:1575来源:国知局
一种青黛酮的制备方法及抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用,特别涉及一种青黛酮的制备 方法及抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 青黛酮(Qingdainone)为生物碱类物质,暗紫色细针晶,CAS号97457-31-3, 分子式 C23H13N3O2,分子量 363. 38,来源于爵床科(Acanthaceae)马兰 Cusia(Nees)Brem.的莖叶。研宄表明,青黛酮具有抗肿瘤活性。对小鼠 Lewis肺癌及黑色 素瘤细胞株B16均有抑制作用。
[0003] 马兰味辛,性微寒。归肝、肾、胃、大肠经。能清热解毒,散瘀止血,利湿,消食,消 积。用于感冒发烧,咳嗽,急性咽炎,扁桃体炎,流行性腮腺炎,传染性肝炎,胃、十二指肠溃 疡,小儿疳积,肠炎,痢疾,吐血,崩漏,月经不调;外用治疮疖肿痛,乳腺炎,外伤出血;痢疾 或湿热腹泻;咽喉肿痛,痈肿疮疡;血热衄血、便血;湿热黄疸;或水肿,小便不利;饮食积 滞,脘腹胀满。
[0004] 通过文献检索,国内尚未见青黛酮用于制备抗肿瘤药物。

【发明内容】

[0005] 为满足临床需要,扩大用药品种,更好地治疗癌症,提供一种青黛酮的制备方法及 抗肿瘤应用。
[0006] 为了实现上述目的,本发明采用以下技术方案: 青黛酮的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: (1) 以马兰的茎叶为原料,切成段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下 保持3-5min后,过40目筛备用; (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后,再加入0. 3-0. 5%的纤维 素酶,在超声功率500-700W、45-60°C条件下酶解60-90min,得到酶解原料; (3) 将酶解原料投入加入闪式提取器中,加入提取溶剂,进行闪式提取,过滤得到提取 液,浓缩干燥得到粗提物; (4) 将所得粗提物用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶柱层析纯化,氯仿-甲醇溶剂系统 梯度洗脱,收集青黛酮流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶; (5) 将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶。
[0007] 所述步骤(2)中乙醇水溶液体积百分比为70-80%。
[0008] 所述步骤(2)中提取溶剂为70-85%的乙醇溶液。
[0009] 所述步骤(3)中闪式提取电压为150V,提取时间为3-5min。
[0010] 所述步骤(4)中所述高压硅胶柱层析,硅胶目数为200目,耐压35MPa,柱内径为 250_,层析柱径高比为1 :10。
[0011] 所述步骤(4)中氯仿-甲醇的体积比为1:1-1:13。
[0012] 所述制备的青黛酮,在其口服配方中添加肠吸收促进剂,包含中链脂肪酸盐、胆酸 盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
[0013] 采用本法制备青黛酮,工艺简便易操作,制备量大,产品得率高,而且低污染;添加 肠吸收促进剂,有利于提高生物利用度。
[0014] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
【具体实施方式】
[0015] 实施例1 : 青黛酮的制备 以马兰的茎叶为原料,切成Icm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条 件下保持5min后,过40目筛备用,称取lkg,按照料液比1:4 (g/ml)的比例加入80%乙醇 水溶液后,再加入〇. 5%的纤维素酶,在超声功率700W、50°C条件下酶解70min,得到酶解原 料,加入闪式提取器中,加入6L80%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间 为3min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解, 干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱 径高比为1 :1〇,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:6、1:13梯度洗脱,收集青黛酮流分,减压浓 缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶,含量为95. 8%。
[0016] 实施例2: 青黛酮的制备 以马兰的茎叶为原料,切成Icm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条 件下保持3min后,过40目筛备用,称取lkg,按照料液比1:6 (g/ml)的比例加入70%乙醇 水溶液后,再加入〇. 4%的纤维素酶,在超声功率700W、45°C条件下酶解90min,得到酶解原 料,加入闪式提取器中,加入4. 5L75%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时 间为5min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶 解,干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层 析柱径高比为1 :1〇,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱,收集青黛酮流分,减 压浓缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶,含量为94. 4%。
[0017] 实施例3: 青黛酮的制备 以马兰的茎叶为原料,切成Icm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条 件下保持5min后,过40目筛备用,称取lkg,按照料液比1:5 (g/ml)的比例加入75%乙醇 水溶液后,再加入〇. 5%的纤维素酶,在超声功率600W、55°C条件下酶解75min,得到酶解原 料,加入闪式提取器中,加入4L70%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间 为4min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解, 干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱 径高比为1 :1〇,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:5、1:12梯度洗脱,收集青黛酮流分,减压浓 缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶,含量为95. 4%。
[0018] 实施例4: 青黛酮的制备 以马兰的茎叶为原料,切成Icm左右段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条 件下保持5min后,过40目筛备用,称取lkg,按照料液比1:6 (g/ml)的比例加入75%乙醇 水溶液后,再加入〇. 3%的纤维素酶,在超声功率500W、60°C条件下酶解60min,得到酶解原 料,加入闪式提取器中,加入5L85%的乙醇溶液作为提取溶剂,提取电压为150V,提取时间 为3min,进行闪式提取2次,过滤得到提取液,提取液浓缩干燥后得到粗提物,用甲醇溶解, 干法上样至高压硅胶(硅胶目数为200目)柱层析纯化,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱 径高比为1 :1〇,氯仿-甲醇按体积比为1:1、1:7、1:13梯度洗脱,收集青黛酮流分,减压浓 缩,冷却析晶,得粗晶,粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶,含量为94. 9%。
[0019] 实施例5: 青黛酮的抗肿瘤应用 1、材料 动物:昆明种小鼠,雌雄各半性,体重20±2g,由南京中医药大学提供。
[0020] 细胞株:Sarc〇ma 180腹水型瘤株(S180),由中国科学院上海药物研宄所提供。
[0021] 2、方法 取50只小鼠,每只小鼠左腋下接种S18tl瘤液,次日随机分成5组,每组10只,分别为生 理盐水对照组(NS组)、阳性对照组、青黛酮低剂量组(2mg/kg)、中剂量组(4mg/kg)、高剂量 组(8mg/kg)。接种24h后青黛酮给药组灌胃给药,连续7,阳性对照组试验期间腹腔注射2 次,隔日给药。期间,每日观察小鼠的一般活动、皮毛、粪便等情况。最后一次给药24h后断 颈处死,称重,并计算抑瘤率。
[0022] 3、结果 本发明植物提取物对小鼠 S18tl皮下荷瘤有明显的抑制作用,抑瘤率为70. 86-76. 04%, 结果见表1。
[0023] 抑瘤率(%)=( 1-治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重)X% 表1本发明植物提取物对S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用(n=10, i ±S)
注:与阳性对照组相比,#P < 0. 01。
【主权项】
1. 一种青黛酮的制备方法,其特征在于包括以下步骤: (1) 以马兰的茎叶为原料,切成段状,放入高速组织捣碎机,在转速为18000rpm条件下 保持3-5min后,过40目筛备用; (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后,再加入0. 3-0. 5%的纤维 素酶,在超声功率500-700W、45-60°C条件下酶解60-90min,得到酶解原料; (3) 将酶解原料投入加入闪式提取器中,进行闪式提取,过滤得到提取液,浓缩干燥得 到粗提物; (4) 将所得粗提物用甲醇溶解,干法上样至高压硅胶柱层析纯化,氯仿-甲醇溶剂系统 梯度洗脱,收集青黛酮流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶; (5) 将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶。2. 如权利要求1所述的青黛酮的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中乙醇水溶液体 积百分比为70-80%。3. 如权利要求1所述的青黛酮的制备方法,其特征在于所述步骤(2)中提取溶剂为 70-85%的乙醇溶液。4. 如权利要求1所述的青黛酮的制备方法,其特征在于所述步骤(3)中闪式提取电压 为150V,提取时间为3-5min。5. 如权利要求1所述的青黛酮的制备方法,其特征在于所述步骤(4)中所述高压硅胶 柱层析,硅胶目数为200目,耐压35MPa,柱内径为250mm,层析柱径高比为1 :10。6. 如权利要求1所述的青黛酮的制备方法,其特征在于所述步骤(4)中所述氯仿-甲 醇的体积比为1:1-1:13。7. 根据权利要求1~6所述方法制备的青黛酮,在其口服配方中添加肠吸收促进剂。8. 根据权利要求7所述的青黛酮,其特征在于肠吸收促进剂包含中链脂肪酸盐、胆酸 盐、鹅去氧胆酸盐、壳聚糖及其衍生物中的一种或几种。
【专利摘要】本发明公开了一种植物提取物的制备方法及应用,尤其涉及一种青黛酮的制备方法及抗肿瘤应用。制备方法包括以下步骤:(1)以马兰的茎叶为原料,切成段状,放入高速组织捣碎机,备用;(2)原料加入乙醇水溶液后,再加入纤维素酶,得到酶解原料;(3)将酶解原料投入加入闪式提取器中,进行闪式提取,过滤,浓缩干燥得到粗提物;(4)将所得粗提物干法上样至高压硅胶柱层析纯化,收集青黛酮流分,减压浓缩,冷却析晶,得粗晶;(5)将粗晶用乙酸乙酯重结晶得到青黛酮结晶。采用本发明制备方法,工艺操作简便、得率高,污染小,适合高纯度青黛酮的生产。青黛酮具有抗肿瘤作用,在其口服配方中添加肠吸收促进剂,利于提高生物利用度。
【IPC分类】C07D487/04, A61P35/00
【公开号】CN104910160
【申请号】CN201510264601
【发明人】刘东锋, 杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司
【公开日】2015年9月16日
【申请日】2015年5月22日
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