青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物在抗白血病药物中的应用及制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物及其制备方法，以及在制备抗白血病 药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 青蒿素是一种从菊科蒿属植物青蒿中分离提取的具有过氧桥键的倍半萜内酯类 天然产物，目前其在世界范围类作为主要的抗疟疾药物使用（Chem. Soc. Rev. 2010，39， 435.)。此外，研宄还发现青蒿素还具有其他方面的活性，如抗肿瘤和抗病毒等（Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001，11，5 ;Bioorg. Med. Chem. 2013，21，3702)。与此同时，为了 改善青蒿素溶解度等方面的性质，多种青蒿素衍生物被研宄人员合成出来，其中青蒿琥酯 作为一个典型的代表性药物，主要用于治疗恶性疱原虫（八111：；[111；[01'013.48611丨80161]1〇1：1161·· 2010，54，3730.)。并且，通过人体试验研宄证实，青蒿琥酯是一种安全性较强的药物，不 良反应较少（Am J Trop Med Hyg, 1999，60，547)。研宄还发现，青蒿琥醋也具有一定的 抗肿瘤活性，并且活性强于青蒿素。青蒿琥酯的抗肿瘤机制主要有：诱导凋亡、阻滞细胞周 期、抗血管新生等（J. Cell Physiol. 2012，227，3778 ;Int. Immunopharmacol. 2011， 11，2039 ;Biochem. Pharmacol. 2004，68，2359)。除了体外抗抗增殖活性，青蒿瑭醋有 一定的体内抗肿瘤活性，同时还具有与其它抗肿瘤药物协同抗肿瘤的作用。
[0003] 此外，鬼白毒素作为一种重要的木质素类天然产物，其主要药理活性包括抗肿瘤 和抗病毒等，但是由于其毒副作用较大，限制了鬼白毒素作为抗肿瘤药物在临床上使用（J Ethnopharmacol. 2013，149，24)。为此，人们对鬼臼毒素进行了大量的结构修饰和改造 工作，得到了大量的鬼白毒素衍生物，其中依托泊苷和替尼泊苷已作为抗肿瘤药物在临床 上广泛使用，主要用于白血病、肺癌和乳腺癌等多种肿瘤的治疗（Med. Res. Rev. 2014， 35，1.)。鬼臼毒素发挥抗肿瘤作用的主要机制为抑制微管蛋白和拓扑异构酶II的活性， 此外还有诱导凋亡和阻滞细胞周期等（Eur. J. Med. Chem. 2012，49，48)。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物及其制备方法，以及在制备抗 白血病药物中的应用，本发明青蒿琥酯与鬼白毒素偶联物对人白血病细胞K562和人白血 病阿霉素耐药株K562/Adr均有不同程度的抗增殖作用。
[0005] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是： 一种式（I)所示的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物：
一种式（I)所示的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物的制备方法，所述的制备方法为：将式 (II)所示青蒿琥酯和式（III)所示鬼臼毒素溶于有机溶剂中，在1-乙基-(3-二甲氨基丙 基）碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶的催化下进行搅拌反应，制得式（I)所示的青蒿琥 酯与鬼臼毒素偶联物。
[0006] 本发明青蒿琥酯与鬼白毒素偶联物的制备方法，其中所述的有机溶剂可以为 N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷，优选为N，N-二甲基甲酰胺。
[0007] 本发明青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物的制备方法，其中所述的青蒿琥酯与鬼臼毒素 的投料物质的量之比为优选为1:1 ;搅拌反应温度为25~50°C，优选为25°C。
[0008] 本发明的青蒿琥酯与鬼臼毒素的偶联物可在制备抗白血病药物中应用。
[0009] 本发明的有益之处在于：本发明提供了一种新颖的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物， 且该偶联物具有抗白血病细胞活性，能够用于制备抗白血病药物，本发明青蒿琥酯与鬼臼 毒素偶联物对对人白血病细胞K562和人白血病阿霉素耐药株K562/Adr具有不同程度的抗 增殖作用（详见实施例3)。
【具体实施方式】
[0010] 下面通过具体实施例对本发明进行进一步的描述，但本发明的保护并不限于此。
[0011] 实施例1 :青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物的制备（1) 在IOmL梨形瓶中加入青蒿瑭醋（0. 25mmol)、鬼臼毒素（0. 25mmol)和4-二甲氨基吡啶 (0. 3mmol)，再加入N, N-二甲基甲酰胺（4mL)溶解，冰水浴冷却下加入1-乙基-(3-二甲氨 基丙基）碳二亚胺盐酸盐（0. 5mmol)，25°C下搅拌反应6小时，反应液倾入水中，搅拌、抽滤、 水洗、真空干燥，所得粗品经柱层析(洗脱剂为体积比1:2的乙酸乙酯与石油醚混合液)得到 式（I)所示的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物，产率为60%。
[0012] MP :139-141 °C ；IR (KBr) 3622, 2938, 1779, 1588, 11485, 1456, 1420, 1376，1331, 1240，1127，1037，927 cnT1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.80 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.98 (dd, J = 5. 5, 1.3 Hz, 2H), 5.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.59 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.38-4.41 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 6H), 2.72-2.94 (m, 5H), 2.60-2.70 (m, 1H), 2.51-5.58 (m, 1H), 2.93-2.41 (m, 1H), 1.99-2.05 (m, 1H), 1.81-1.92 (m, 1H), 1.69-1.79 (m, 2H), 1.62-1.64 (m, 1H), 1.23-1.49 (m, 7H), 0.99-1.05 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 7. I Hz, 3H) ;13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 173.69，172.62，171.04，152.62，148. 12，147.62， 137.14, 134.82, 132.25, 128.22, 109.63, 108.10, 107.09, 104.45, 101.55, 92.39, 91.50, 80.05, 73.92, 71.35, 60.71, 56.15, 51.53, 45.58, 45.19, 43.76, 38.57, 37.24, 36.19, 34.04, 31.82, 29.12, 29.01, 25.87, 24.57, 21.97, 20.16, 12. 02；HRMS calcd for C41H48NaO15 [M+Na]+ 803.2885, found 803.2889. 实施例2 :青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物的制备（2) 在IOmL梨形瓶中加入青蒿瑭醋（0. 25mmol)、鬼臼毒素（0. 5mmol)和4-二甲氨基R比啶 (0. 3mmol)，再加入二氯甲烷（4mL)溶解，冰水浴冷却下加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基） 碳二亚胺盐酸盐（〇. 5mmo 1 )，30 °C下搅拌反应4小时，反应液倾入水中，搅拌、抽滤、水洗、真 空干燥，所得粗品经柱层析(洗脱剂为体积比1:2的乙酸乙酯与石油醚混合液）得到式（I) 所示的青蒿琥酯与鬼白毒素偶联物，产率为50%。
[0013] 实施例3 :式（I)所示偶联物对人白血病细胞的增殖抑制活性 CCK-8染色法： 将细胞接种于96孔板中，在CO2培养箱中培养24小时后，加入浓度梯度的含药培养基， 同时设立阴性对照组和阳性对照组和溶媒组，继续培养72小时后取出培养板，加入10微升 CCK-8溶液，培养3小时后，在酶标仪上选择450nm出测吸光度值（0D值)，计算各组别抑制 率，抑制率（%) = [(阴性对照组OD值一实验组OD值）/阴性对照组OD值]X 100%。利用 SPSS17. 0软件计算出半数抑制浓度（IC5Q)。
[0014] 本试验按照CCK-8方法，以青蒿琥酯和鬼臼毒素为阳性对照，进行了式（I)所示偶 联物对人白细胞细胞K562和人白细胞阿霉素耐药株K562/Adr的增殖抑制活性测试，结果 如表1所示： 表1
由表1可知，偶联物（I)对人白细胞细胞K562和人白细胞阿霉素耐药株K562/Adr均 有一定程度的抑制活性，对K562和K562/Adr的抑制活性显著强于青蒿琥酯，但弱于鬼臼毒 素。虽然偶联物（I)的抑制活性低于鬼臼毒素，但偶联物（I)的耐药显著低于鬼臼毒素，说 明偶联物具有一定逆转K562/Adr多药耐药的作用。整体而言，如式（I)所示的青蒿琥酯与 鬼臼毒素偶联物对K562和K562/Adr均有较强的抗增殖效果，可将其用于制备抗白血病药 物。
【主权项】
1. 一种青富班醋与鬼白毒素偶联物，其特征在于；如化学结构式（I)所示，该偶联物应 用在制备抗白血病药物中：2. -种青富班醋与鬼白毒素偶联物的制备方法，其特征在于：将青富班醋和鬼白毒素 溶于有机溶剂中，在1-己基-3-二甲氨基丙基碳二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基化晚的催化 下进行揽拌反应，制得式（I)所示的青富班醋与鬼白毒素偶联物。3. 如权利要求2所述的青富班醋与鬼白毒素偶联物的制备方法，其特征在于；所述的 有机溶剂为N，N-二甲基甲酯胺或二氯甲烧。4. 如权利要求2所述的青富班醋与鬼白毒素偶联物的制备方法，其特征在于；所述的 青富班醋与鬼白毒素的投料物质的量之比为1:1~10。5. 如权利要求2所述的青富班醋与鬼白毒素偶联物的制备方法，其特征在于；所述的 揽拌反应温度为25~50°C。
【专利摘要】本发明公开了一种式（I）所示的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物应用在抗白血病药物及制备方法，其制备方法：以青蒿琥酯和鬼臼毒素为原料，经酯化反应制得式（I）所示的青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物；本发明青蒿琥酯-鬼臼毒素偶联物可在制备抗白血病药物中应用。该偶联物具有抗白血病细胞活性，能够用于制备抗白血病药物，本发明青蒿琥酯与鬼臼毒素偶联物对人白血病细胞K562和人白血病阿霉素耐药株K562/Adr具有不同程度的抗增殖作用。
【IPC分类】C07D519/00, A61K31/365, A61P35/02
【公开号】CN104926841
【申请号】CN201510371672
【发明人】张磊, 王京
【申请人】遵义医学院
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月30日