从广金钱草中提取分离二氢红花菜豆酸的方法和系统的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物化学技术领域，具体的，本发明涉及一种从广金钱草中提取分离二氢红花菜豆酸的方法和系统。
【背景技术】
[0002]广金钱草为豆科山蚂幢属植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其药用部位为干燥地上部分，主要化学成分为黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。具有清热除湿，利尿通淋之功效。用于热淋、沙淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少、黄疸尿赤、尿路结石。
[0003]二氢红花菜豆酸为白色粉末；分子式:C15H2205;分子量:282 ;图1显不其化学结构。二氢红花菜豆酸存在于广金钱草药材中，作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品，以及广金钱草及其相关药物制剂质量控制用。现有提取分离二氢红花菜豆酸的方法和系统亟待改进。
【发明内容】
[0004]本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中的问题至少之一或者提供一种商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种从广金钱草中提取分离二氢红花菜豆酸的方法和系统，利用该提取分离方法和系统得到的二氢红花菜豆酸，纯度高，有利于作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品、以及作为广金钱草及其相关药物制剂的质量控制。
[0005]依据本发明的一方面，本发明提供一种提取分离二氢红花菜豆酸的方法，该方法包括以下步骤:利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一分离部分，利用第二醇体系对所述第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，利用第三醇体系对所述第二分离部分进行第三色谱分离，以获得所述二氢红花菜豆酸。
[0006]本发明的该方法，利用多级色谱分离，包括组合利用大孔树脂纯化技术，中压制备及凝胶色谱技术，采用醇-水体系，从广金钱草提取物中分离提取二氢红花菜豆酸，该工艺操作简单，生产时间短，产品收率高，纯度高，能够获得纯度达到98%以上的二氢红花菜豆酸，获得的二氢红花菜豆酸可作为含量测定用化学对照品。该工艺步骤以及各个步骤的参数条件，是发明人综合考虑、多次调整试验大孔树脂色谱、反相中压色谱和凝胶色谱的组合及其各自的洗脱条件对广金钱草中的二氢红花菜豆酸的分离纯化效果的影响而确定下来的，该提取纯化过程不涉及毒性相对强的有机溶剂，提取分离操作过程及提取物都安全可
A+-.与巨O
[0007]图2显示本发明的一个实施例中的提取分离图1所示化合物的方法的步骤流程图。根据本发明的实施例，上述本发明一方面的二氢红花菜豆酸提取分离方法，还可以具有以下技术特征至少之一:
[0008]根据本发明的一个实施例，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括:利用浓度50-95%的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液，除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。两次浓度为50-95%乙醇回流提取获得提取物，是发明人经过多次试验摸索确定的，既能充分利用原料也能节省时间，利于规模化生产制备；去除提取液中的乙醇和/或离子，利于排除它们对后续分离纯化的干扰。
[0009]根据本发明的一个实施例，所述两次回流提取，其中一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h，另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为lh-2h，任选的为1.5h。回流时，浓度为50-95%乙醇和广金钱草的比例以及回流时间，是发明人经过多次试验检测确定的，能够使原料得到高提取。
[0010]根据本发明的一些实施例，所述第一醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为30-35%，较佳的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为30%，所述第一色谱为大孔树脂。该乙醇-水洗脱体系中乙醇的浓度是发明人结合后续色谱分离条件、多次试验检测洗脱下来的峰中的二氢红花菜豆酸比例变化，经过多次调整优化确定的。
[0011 ] 根据本发明的一些实施例，所述第二醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为10-30 %，所述第二色谱为反向色谱，较佳的，选择的反向色谱为反向中压色谱，更佳的，选择C18柱，其柱压为l-10bar，洗脱流速为5?30ml/min。该乙醇-水洗脱体系中的乙醇浓度是发明人结合第一分离部分中目标成分的比例，以及第一色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的二氢红花菜豆酸。
[0012]根据本发明的一个实施例，所述利用第二醇体系对第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，包括:利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行等度洗脱25-40min，接着换用乙醇浓度为[a，b]的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行梯度洗脱180-220min，收集以获得所述第二分离部分，其中，a的取值范围为10_15%，b的取值范围为20-30%。先利用一个浓度的乙醇-水体系等度洗脱，再进行梯度洗脱，能够提高分离提取效率；等度洗脱和梯度洗脱的乙醇浓度或浓度范围，以及洗脱时间，是发明人考虑收率、时间、回收的分离部分的复杂度、分离部分中目标成分的比例等，多次试验确定的。
[0013]如图3所示，根据本发明的另一个实施例，所述利用第二醇体系对第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，包括:利用乙醇浓度为c的乙醇-水体系对所述第一分离部分进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[c，d]的乙醇_水体系对所述第一分离部分进行梯度洗脱200min，收集获得初级第二分离部分；利用乙醇浓度为e的乙醇-水体系对所述初级第二分离部分进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[e，f]的乙醇-水体系对所述初级第二分离部分进行梯度洗脱200min，收集获得所述第二分离部分，其中，c和e的取值范围为10-15%，d和f的取值范围为20-30%，e>c，d>f。前后两次，都先利用一个浓度的乙醇-水体系等度洗脱，再进行梯度洗脱，能够提高分离提取二氢红花菜豆酸的效率；前后两次的等度洗脱和梯度洗脱的乙醇浓度或浓度范围、各自的洗脱时间、速度，是发明人结合考虑两次等度-梯度洗脱的条件、收率、时间、回收的分离部分的复杂度、分离部分中目标成分的比例等，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的二氢红花菜豆酸。在本发明的一个较佳实施例中，C = 10%, d = 30%, e =12%, f = 20%，能够使最终获得的提取纯化产物的纯度达98%以上。
[0014]根据本发明的另一个实施例，所述第三醇体系为纯甲醇，所述第三色谱为凝胶色谱。在本发明的一个实施例中，所选凝胶色谱为葡聚糖凝胶色谱Sephadex G-1Oo利于进一步提尚目标化合物的纯度。
[0015]依据本发明的另一方面，本发明提供一种提取分离二氢红花菜豆酸的系统，该系统能够用以实施上述本发明一方面或者任一实施例中的二氢红花菜豆酸提取分离方法，该系统包括:回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括，第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一分离部分，第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一分离部分进行第二色谱分离，获得第二分离部分，第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离