一株深褐芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域中一株深褐芽孢杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 由植物病原真菌引起的植物真菌病害对农业的增产增收造成了巨大威胁，长期以 来，选择抗病品种和施用化学农药成为防治真菌病害的首选。农药作为农业的重要生产资 料，对于食品的安全生产影响重大，化学农药是作物病害防治中最重要的植保投入品，其在 病害防治方面发挥了巨大作用。但是，化学农药的长期大量使用不仅导致了药物残留引起 的食品安全隐患，还对环境和生态平衡构成了巨大的压力。与化学农药相比，生物农药具有 持效期长、低毒、对人畜和天敌安全等特点，其有效成分属于天然产物，环境兼容性好，有利 于农业的可持续发展，是一类理想的植保替代产品。因此，研宄和应用生物农药是农产品安 全生产的关键环节和国际农业高技术领域竞争的焦点之一；大力发展生防产品是冲破绿色 堡皇的要求，是促进农业可持续发展的要求，是人们的健康意识和环保意识不断提高的要 求，也是农药产业发展的必然趋势。
[0003] 芽孢杆菌（Bacillus spp.)在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境， 具有显著的抗菌活性和极强的抗逆能力，且其生长快，营养简单。芽孢杆菌能产生耐热、抗 逆的芽孢，其芽孢具有抗逆性强、利于保藏的特点，又能忍受极端的外部环境而长期存活， 可以制成粉剂、可湿性粉剂等各种剂型，与化学农药混用也不会失活，而且批量生产工艺简 单，成本也较低，施用方便，储存期长，因此有利于生防菌剂的生产、剂型加工及在环境中的 存活、定殖与繁殖，是一种理想的生防微生物。
[0004] 由于几丁质普遍存在于真菌细胞壁，几丁质酶可以通过降解真菌细胞壁从而达到 抑制或杀死病原真菌的目的。几丁质酶不仅对病原真菌细胞壁具有直接破坏作用，而且几 丁质酶的产生还会与抑菌物质产生协同增效作用。同时几丁质酶的编码基因还可为转基因 抗病植物或构建高效生防工程菌株提供基因资源。因此，具几丁质酶活性的生防微生物在 植物病害生物防治中具有很大的开发及利用价值。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是如何抑制多种病原真菌和细菌。
[0006] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了一株深褐芽孢杆菌。
[0007] 本发明所提供的深褐芽孢杆菌是深褐芽孢杆菌（Baci I Ius atrophaeus) JZB120050,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No. 10919。该菌种已于2015年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生 物中心（简称CGMCC)。
[0008] 本发明的深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 为短 杆状，直或近直，菌体单个或成对排列；有芽孢，椭圆形，在菌体中部、偏端或顶端；在液体 培养基中生长良好，为好氧菌；在LB固体培养基上生长迅速，培养三天后培养基逐渐变黑； 菌落表面干燥不透明，边缘不整齐。
[0009] 所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 的生理生 化特征为革兰氏染色阳性，过氧化氢酶试验、接触酶试验、吲哚试验、明胶液化试验、柠檬酸 盐利用试验和淀粉水解试验均为阳性结果，苯丙氨酸脱氨酶试验、硫化氢产生试验、氧化酶 试验、硝酸盐还原试验、V-P试验和M-R试验均为阴性结果。
[0010] 所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 能够利用 糊精、吐温40、吐温80、N-乙酰基-D-半乳糖、N-乙酰基-D-葡萄糖、熊果苷、D-纤维二糖、 D-果糖、a -D-葡萄糖、D-甘露糖、3-甲基-D-乳糖、α -甲基-D-葡萄糖苷、β -甲基-D-葡 萄糖苷、6-0-D-吡喃葡萄糖酰-D-呋喃果糖、D-洛酮糖、D-核糖、水杨苷、蔗糖、D-海藻糖、 D-木糖、L-苹果酸、丙酮酸甲酯、丙酮酸、L-天冬酰胺酸、2, 3-丁二醇、丙三醇、腺苷、肌苷、 胸苷、尿苷、5' -单磷酸胸苷、D-L- α -磷酸甘油等作为碳源；不能利用α -环糊精、淀粉、菊 糖、甘露聚糖、L-树胶醛糖、D-阿拉伯糖、L-海藻糖、D-半乳糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖 酸、m-肌醇、a -D-乳糖、乳果糖、D-松三糖、D-蜜二糖、α -甲基-D-半乳糖、β -甲基-D-半 乳糖、α -甲基-D-甘露糖、D-棉籽糖、L-鼠李糖、景天庚酮聚糖、D-山梨醇、水苏糖、木糖 醇、醋酸、α -羟基丁酸、P-羟基苯乙酸、α -酮戊酸、乳酰胺、D-乳酸甲醋、L-乳酸、D-苹 果酸、琥珀酸甲酯、丙酸、琥珀酰胺酸、琥珀酸、酰基-L-乳酰胺谷氨、L-丙氨酸氨、D-丙氨 酸、L-丙氨酰甘氨酸、甘氨酰-L-谷氨酸、L-焦谷氨酸、L-丝氨酸、丁二胺、5' -单磷酸腺苷、 5' -单磷酸尿苷、6-磷酸-D-果糖、1-磷酸-a -D-葡萄糖、6-磷酸-D-葡萄糖等作为碳源， 而可疑利用?_ -环糊精、苦杏仁苷、龙胆二糖、麦芽糖、麦芽三糖、D-甘露醇、D-塔格糖、松 二糖、γ -羟基丁酸、L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-丝氨酸等作为碳源。
[0011] 所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919产嗜铁素、 几丁质酶、纤维素酶、蛋白酶和淀粉酶，不产磷酸酯酶，尤其是具有强的产嗜铁素、几丁质 酶、纤维素酶和蛋白酶的能力，这是生防菌的关键性生防指标。
[0012] 为解决上述技术问题，本发明还提供了所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 或所述深褐芽抱杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物的下述任一种用途：
[0013] 1、病原菌抑制剂，它的活性成分是所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 或所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物；
[0014] 2、病害抑制剂，它的活性成分是所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 或所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物；
[0015] 3、所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 或所述 深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物在抑制病原菌 中的应用；
[0016] 4、所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 或所述 深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物在制备病原菌 抑制剂中的应用；
[0017] 5、所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus) JZB120050CGMCC No. 10919 或所述 深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物在抑制病害中 的应用；
[0018] 6、所述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 或所述 深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物在制备病害抑 制剂中的应用。
[0019] 上述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 或所述深 褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物的任一种用途中， 所述病原菌为下述至少一种：
[0020] A、植物灰霉病菌；
[0021] B、植物枯萎病菌；
[0022] C、植物赤霉病菌；
[0023] D、植物纹枯病菌；
[0024] E、植物全蚀病菌；
[0025] F、植物根腐病菌；
[0026] G、植物褐腐病菌；
[0027] H、植物炭疽病菌；
[0028] I、植物轮纹病菌；
[0029] J、植物或蘑菇细菌性病菌。
[0030] 其中，所述植物灰霉病菌可为番前灰霉病菌（如灰葡萄孢[Botrytis cinerea Per. ex Fr.])或草莓灰霉病菌（如Botrytis cinerea Persoon);所述植物枯萎病 菌可为甘蓝枯萎病菌（如尖孢镰刀菌粘团专化型[Fusarium oxysporum Schl. f.sp. conglutinans (Wollenw.) Snyder&Hansen])、西瓜枯萎病菌（如 Fusarium oxysporum f.sp.niveum)或棉花枯萎病菌（如尖孢镰刀菌萎蔫专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. vasinfectum(Atk)Snyder&Hansen]);所述植物根腐病菌可为豌豆镰孢根腐病菌 (如前镰孢豌豆专化型[Fusarium solani f. sp. pisi])或百合根腐病菌（如尖孢镰孢 病菌[Fusarium oxysporum Schlecht.]);所述植物赤霉病菌可为小麦赤霉病菌[如禾 谷镰刀菌（Fusarium graminearum Schwabe)];所述植物纹枯病菌可为小麦纹枯病菌 (如Rhizoctonia cerealis);所述植物全蚀病菌可为小麦全蚀病菌[Gaeumannomyces graminis(Sacc. )ArX&01ivier var.tritici J. Walker];所述植物褐腐病菌可为桃褐腐病 菌[如链核盘菌（Monilinia fructicola(wint. )Rehm)];所述植物炭疽病菌可为葡萄炭疽 病菌[如胶孢炭疽菌[Colletotrichum gloeosporioides Penz. e t Sacc.)];所述植物轮 纹病菌可为苹果轮纹病菌[如 Botryosphaeria dothidea (Moug.) Ces. et de Not·];所述 植物细菌性病菌可为黄瓜角斑病菌（Pseudomonas syringae pv. Iachrymans)、前子青枯病 菌（如Ralstonia solanacearum)或大白菜黑腐病菌-野油菜黄单胞杆菌野油菜致病变种 (Xanthomonas campestris pv.campestris(Pam.)Dowson];所述蘑葫细菌性病菌可为平葫 褐斑病菌[如托拉斯假单胞杆菌（Pseudomonas tolaasii Paine)]。
[0031] 上述深褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919 或所述深 褐芽孢杆菌（Bacillus atrophaeus)JZB120050CGMCC No. 10919的代谢物的任一种用途中， 所述病害为下述至少一种：
[0032] a、植物灰霉病；
[0033] b、植物枯萎病；
[0034] c、植物赤霉病；
[0035] d、植物纹枯病；
[0036] e、植物全蚀病；
[0037] f、植物根腐病；
[0038] g、植物褐腐病；
[0039] h、植物炭疽病；
[0040] i、植物轮纹病；
[0041] j、植物或蘑菇细菌性病。
[0042] 其中，所述植物灰霉病可为番前灰霉病或草莓灰霉病；所述植物枯萎病可为甘蓝 枯萎病、西瓜枯萎病或棉花枯萎病；所述植物根腐病可为豌豆根腐病或百合根腐病；所述 植物赤霉病可为小麦赤霉病；所述植物纹枯病可为小麦纹枯病；所述植物全蚀病可为小麦 全蚀病；所述植物褐腐病可为桃褐腐病；所述植物炭疽病可为葡萄炭疽病；所述植物轮纹 病可为苹果轮纹病；所述植物细菌性病可为黄瓜角斑病、茄子青枯病或大白菜黑腐病；所 述蘑菇细菌性病可为平菇褐斑病。
[0043] 其中，所述番前灰霉病可由番前灰霉病菌-灰葡萄孢（Botrytis cinerea Per. ex Fr.)引起，所述草莓灰霉病可由草莓灰霉病菌（Botrytis cinerea Persoon)引起， 所述甘蓝枯萎病可由甘蓝枯萎病菌-尖孢镰刀菌粘团专化型[Fusarium oxysporum Schl. f. sp. conglutinans (Wollenw.) Snyder&Hansen]引起，所述西瓜枯萎病可由西瓜 枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.niveum)引起，所述棉花枯萎病可由棉花枯萎 病菌-尖抱镜刀菌萎蔫专化型[Fusarium oxysporum Schl. f.sp.vasinfectum (Atk) Snyder&Hansen]引起，所述豌豆根腐病可由豌豆镰孢根腐病菌-茄镰孢豌豆专化型 (Fusarium solani f.sp.pisi)引起，所述百合根腐病可由百合根腐病菌-尖孢镰孢病菌 (Fusarium oxysporum Schlecht.)引起，所述小麦赤霉病可由小麦赤霉病菌-禾谷镰刀菌 (Fusarium graminearum Schwabe)引起，所述小麦纹枯病可由小麦纹枯病菌（Rhizoctonia cerealis)引起，所述小麦全蚀病可由小麦全蚀病菌（Gaeumannomyces gr