一种从天然产物中提取分离牡荆素木糖苷的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及从天然产物中提取分离牡荆素木糖苷的方法，特别是一种从木菠萝叶 中提取分离牡荆素木糖苷的方法。
【背景技术】
[0002] 牡荆素木糖苷或牡荆素木糖甙，其英文名称为vitexin-2" -O-xyloside或者 vitexin-2-O-xyloside，分子式 C26H28O14，分子量：564,结构式如下：
[0003]
[0004] 木菠萝（Artocarpus heterophyllus lam)为桑科木菠萝属植物，其果实又称菠萝 蜜、树菠萝、蜜冬瓜、牛肚子果等，为世界著名热带水果，原产于热带亚洲，在热带潮湿地区 广泛栽培，引入我国已有1000多年历史。木菠萝的果肉性平、味甘微酸、无毒，有生津、止渴 解烦、醒酒、益气、助消化之功效。《本草纲目》中记载："菠萝蜜生交趾南番诸国。内肉层叠 如桔，食之味至甜美如蜜，瓢韦，甘香微酸，止渴解烦，醒酒益气，令人悦泽，核中仁，补中益 气，令人不饥轻健。"木菠萝是集水果、木本粮食及珍贵用材于一体的热带树种。目前国内外 对木菠萝叶的研宄文献较少，从目前已有的化学成分文献报道中可知，木菠萝叶中的化学 成分主要为黄酮类化合物、多糖类化合物和多酚类化合物等。
[0005] 牡荆素木糖苷在植物中分布并不广泛，目前对其各方面的研宄文献都很少，在已 有的文献报道中可知，牡荆素木糖苷具有一定的药理活性，其具有抗癌和抗氧化的药理作 用。虽然有文献报道木菠萝叶中含有黄酮类化合物，但是到目前为止，没有任何文献报道木 菠萝叶中含有牡荆素木糖苷，也没有任何文献报道过从木菠萝叶中提取分离高纯度牡荆素 木糖苷的制备方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种能源消耗小，牡荆素木糖苷得率在70%以上，纯度达 90%以上，产量大，易于实现工业化的牡荆素木糖苷提取工艺。
[0007] 本发明的目的采用如下技术方案实现：
[0008] (1)乙醇提取：将木菠萝叶粉碎后用30~50%的乙醇提取，料液比为I : 10~ 1 : 15,提取方法可以有以下几种：回流提取法、超声提取法和微波提取法，提取次数为2~ 3次，提取时间每次为30~60分钟，合并提取液，回收乙醇，并将提取液浓缩至料液比为 1 : 0.5~1 : 0.8,静置12~24小时，过滤，得到浓缩液。
[0009] (2)大孔吸附树脂柱层析：上述浓缩液通过8~10倍体积的大孔吸附树脂进行饱 和吸附，先后用纯水和不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，将含有牡荆素木糖苷的洗脱液减压 浓缩，得到含牡荆素木糖苷粗品的浸膏。
[0010] (3)制备高效液相色谱分离纯化：将上述含牡荆素木糖苷粗品的浸膏用3~5倍 量体积的纯水溶解，用制备高效液相色谱进行分离纯化，将含有牡荆素木糖苷的洗脱液减 压浓缩，得牡荆素木糖苷。
[0011] 上述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂的型号为D101、 AB-8、HZ-806、HPD-100、HPD-400 和 X-5。
[0012] 上述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂柱层析的洗脱过程 为：先用4~5倍量柱体积的纯水洗脱去掉大分子量的水溶性杂质，再用4~5倍量柱体积 的10~20%乙醇洗脱去掉分子量较小的极性杂质，最后用4~5倍量柱体积30~60%乙 醇洗脱得到牡荆素木糖苷粗品。
[0013] 上述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述制备高效液相色谱的色谱条件 为：色谱柱为全制备或者半制备ODS色谱柱，流动相为15~30%乙腈或者20~40%甲醇， 紫外检测波长为270nm或者330nm。
[0014] 本发明的有益效果
[0015] 和现有技术相比，本发明有如下有益效果：
[0016] 1、本发明方法的提取效率较好，经高效液相色谱法检测，对木菠萝叶中所含牡荆 素木糖苷的提取得率达70%以上。
[0017] 2、本发明制备的牡荆素木糖苷纯度较高，经高效液相色谱法检测，牡荆素木糖苷 的含量可达到90%以上。
[0018] 3、本发明的原料为木菠萝叶，木菠萝树在中国广西、广东和海南等南方省份分布 很广，其叶子一般是被视为农作物废弃物而遗弃掉，既造成极大的浪费，同时也对环境造成 不良影响，本发明提供了木菠萝叶废物利用的新用途。
[0019] 4、本发明分离的牡荆素木糖苷为首次在木菠萝叶中分离得到，该化合物具有一定 抗癌和抗氧化的药理活性，本发明为充分利用牡荆素木糖苷的药用价值提供了高纯度牡荆 素木糖苷的制备方法。
[0020] 5、目前没有任何文献报道过从天然产物中制备牡荆素木糖苷的方法，本发明具有 溶剂安全、工艺简单、成本较低，适用于工业生产的特点。
【具体实施方式】
[0021] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0022] 实施例1
[0023] 取Ikg木菠萝叶（经高效液相色谱法检测，此批木菠萝叶中牡荆素木糖苷的含量 为2. 5mg/g，Ikg木菠萝叶总共含有2. 5g的牡荆素木糖苷），粉碎成粗粉，加入15L浓度为 30 %的乙醇回流提取60分钟，过滤，药渣加入IOL浓度为30 %的乙醇回流提取30分钟，过 滤，合并两次提取液，减压回收乙醇，并将提取液浓缩至〇. 5L，提取液室温静置12小时，过 滤，得到浓缩液。浓缩液通过柱体积5L的DlOl大孔吸附树脂柱进行饱和吸附，先后用20L 纯水和20L 10%的乙醇洗脱除杂，接着用20L 30%的乙醇溶液洗脱牡荆素木糖苷，将30% 乙醇洗脱液减压回收乙醇至干燥，所得浸膏用3倍量体积的超纯水超声溶解，溶液用微孔 滤膜过滤，滤液用高效液相色谱法进行进一步分离纯化，色谱条件为：制备高效液相色谱仪 (LC-8A，日本岛津公司），半制备ODS色谱柱（10 X 250mm，5 μ m，美国菲罗门公司），进样量为 lmL，流动相为18%的乙腈，流速为5mL/min，检测波长为270nm。收集含有牡荆素木糖苷的 洗脱液减压浓缩，得到I. 95g含量为93. 2%的牡荆素木糖苷（提取得率为78. 0% )。
[0024] 提取得率的计算公式如下：
[0025]
[0026] 实施例2
[0027] 取Ikg木菠萝叶（经高效液相色谱法检测，此批木菠萝叶中牡荆素木糖苷的含量 为2. 5mg/g，Ikg木菠萝叶总共含有2. 5g的牡荆素木糖苷），粉碎成粗粉，加入15L浓度为 50 %的乙醇超声提取60分钟，过滤，药渣加入IOL浓度为50 %的乙醇超声提取30分钟，过 滤，合并两次提取液，减压回收乙醇，并将提取液浓缩至〇. 8L，提取液室温静置24小时，过 滤，得到浓缩液。浓缩液通过柱体积6. 5L的X-5大孔吸附树脂柱进行饱和吸附，先后用30L 纯水和30L 20%的乙醇洗脱除杂，接着用30L 50%的乙醇溶液洗脱牡荆素木糖苷，将50% 乙醇洗脱液减压回收乙醇至干燥，所得浸膏用5倍量体积的超纯水超声溶解，溶液用微孔 滤膜过滤，滤液用高效液相色谱法进行进一步分离纯化，色谱条件为：制备高效液相色谱仪 (LC-8A，日本岛津公司），半制备ODS色谱柱（20 X 250mm，5 μ m，日本岛津公司），进样量为 5mL，流动相为25%的甲醇，流速为10mL/min，检测波长为330nm。收集含有牡荆素木糖苷的 洗脱液减压浓缩，得到2. 03g含量为95. 1 %的牡荆素木糖苷（提取得率为81. 2% )。
[0028] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 一种从天然产物中提取分离牡荆素木糖苷的方法，包括以下几个步骤： (1) 乙醇提取：将木菠萝叶粉碎后用30~50%的乙醇提取，料液比为I : 10~1 : 15， 提取方法可以有以下几种：回流提取法、超声提取法和微波提取法，提取次数为2~3次，提 取时间每次为30~60分钟，合并提取液，回收乙醇，并将提取液浓缩至料液比为1 : 0. 5~ 1 : 0.8,静置12~24小时，过滤，得到浓缩液； (2) 大孔吸附树脂柱层析：上述浓缩液通过8~10倍体积的大孔吸附树脂进行饱和吸 附，先后用纯水和不同浓度的乙醇溶液进行洗脱，将含有牡荆素木糖苷的洗脱液减压浓缩， 得到含牡荆素木糖苷粗品的浸膏； (3) 制备高效液相色谱分离纯化：将上述含牡荆素木糖苷粗品的浸膏用3~5倍量体 积的纯水溶解，用制备高效液相色谱进行分离纯化，将含有牡荆素木糖苷的洗脱液减压浓 缩，得到牡荆素木糖苷。2. 根据权利要求1所述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂的型 号为 DlOl、AB-8、HZ-806、HPD-100、HPD-400 和 X-5。3. 根据权利要求1所述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述大孔吸附树脂柱层 析的洗脱过程为：先用4~5倍量柱体积的纯水洗脱去掉大分子量的水溶性杂质，再用4~ 5倍量柱体积的10~20%乙醇洗脱去掉分子量较小的极性杂质，最后用4~5倍量柱体积 30~60 %乙醇洗脱得到牡荆素木糖苷粗品。4. 根据权利要求1所述牡荆素木糖苷的制备方法，其特征在于所述制备高效液相色谱 的色谱条件为：色谱柱为全制备或者半制备ODS色谱柱，流动相为15~30%乙腈或者20~ 40%甲醇，紫外检测波长为270nm或者330nm。
【专利摘要】本发明涉及一种提取效率高，易于实现工业化的分离提纯牡荆素木糖苷的方法。工艺步骤包括：乙醇提取、大孔吸附树脂柱层析、制备高效液相色谱分离纯化。本发明制备的牡荆素木糖苷纯度达到90％以上，制备方法具有安全、简单、成本较低，适用于工业生产的特点。
【IPC分类】C07H1/08, C07H17/04
【公开号】CN104974202
【申请号】CN201510359678
【发明人】潘小姣, 邓家刚, 韦海红, 李耀华, 梁臣艳, 梁洁
【申请人】广西中医药大学
【公开日】2015年10月14日
【申请日】2015年6月26日