辅助性t细胞的活化方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及辅助性T细胞的活化方法、用于其的组合物、细胞毒性T细胞的活化 方法、细胞毒性T细胞（CTL)的活化诱导剂、W及通过将辅助性T细胞和/或细胞毒性T细胞活化来实现的癌的治疗和/或预防用药物组合物等，所述辅助性T细胞的活化方法， 包含将WT1肤添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序，该WT1肤具有与选自 HLA-DRB1*08:02 分子、HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05 分子、 田^\-0地1*03:02分子、和田^\-0地1*04:01分子中的任意一种血1(：11类分子结合的能力。 需要说明的是，本申请对于2012年12月17日申请的日本国专利申请第2012-274494号主 张优先权，通过参照将该日本国专利申请的内容与本申请一体化。
【背景技术】
[000引WT1基因（Wilms'tumor1gene)，被鉴定为作为幼儿肾癌的威尔姆氏肿瘤的原因 基因，编码具有锋指结构的转录因子（非专利文献1和2、通过引用而包含于本说明书）。通 过此后的研究，示出在造血器官肿瘤、实体癌中作为癌基因发挥作用（非专利文献3~6、通 过引用而包含于本说明书）。
[0003] 通过使用具有编码WT1蛋白质的氨基酸序列的一部分的肤、体外刺激外周血单核 细胞，诱导肤特异性的细胞毒性T细胞（CTL)，示出该些CTL损伤内源性地表达WT1的造血 器官肿瘤、实体癌的癌细胞。C化，由于W前述肤与血1CI类分子结合而成的复合体的形式 识别，上述肤根据血1CI类的亚型不同而不同（专利文献1~4、和非专利文献7,通过引用 而包含于本说明书）。
[0004] 另一方面，为了有效地诱导C化，癌抗原特异性的辅助性T细胞的存在是重要的 (非专利文献8、通过引用而包含于本说明书）。辅助性T细胞识别抗原呈递细胞的MHCII 类分子与抗原肤的复合体而被诱导、活化。活化了的辅助性T细胞，通过产生IL-2、IL-4、 IL-5、比-6、或干扰素等细胞因子，而辅助B细胞的增殖、分化、成熟。上述辅助性T细胞由 于具有通过促进B细胞、T细胞的增殖、活化而将免疫系统活化的机能，暗示了在癌免疫疗 法中，介由MHCII类结合性的抗原肤增强辅助性T细胞的机能，增强癌疫苗的效果是有用 的（非专利文献9、通过引用而包含于本说明书）。
[0005] 近年示出了，具有编码WT1蛋白质的氨基酸序列的一部分的特定的肤（W下本说 明书中也称为WT1肤）存在与多个MHCII类分子结合、可W活化辅助性T细胞的广宿性 (promiscuous)辅助性肤（专利文献5和6、通过引用而包含于本说明书）。但是，由于MHC II类分子的种类多，验证该WT1肤对于其它的MHCII类分子是否也具有效果是极其困难 的。
[0006] 现有技术文献 专利文献 专利文献1 ;国际公开2003/106682号公报 专利文献2 ;国际公开2005/095598号公报 专利文献3 ;国际公开2007/097358号公报 专利文献4 ;国际申请PCT/JP2007/074146 专利文献5 ;国际公开2005/045027号公报 专利文献6 ;国际公开2008/105462号公报 非专利文献 非专利文献l;DanielA.Haberetal.，Cell. 1990 化n29;61 (7): 1257-69 非专利文献 2;CallKMetal.，Cell. 1990Feb9; 60 (3): 509-20 非专利文献 3 ;MenkeALetal.，IntRevCytol. 1998;181:151-212.Review 非专利文献 4;YamagamiTetal.,Blood. 1996Apr1; 87 (7): 2878-84 非专利文献 5;InoueKetal.，Blood. 1998Apr15; 9U8): 2969-76 非专利文献 6;TsuboiAetal.,LeukRes. 1999May;23 6):499-505 非专利文献 7;0kaYetal.，Immunogenetics. 2000 化b;51(2):99-107 非专利文献 8;GaoFGetal.，CancerRes. 2002Nov15; 62 (22): 6438-41 非专利文献 9;ZengG,JImmunother. 2001May;24(3):195-204。
【发明内容】
[0007] 发巧要解决的间願 因此，本发明的目的在于，提供通过使用特定的WT1肤，适用于宽范围的MHCII类分子 阳性对象而将辅助性T细胞活化的方法、将细胞毒性T细胞活化的方法、细胞毒性T细胞的 活化诱导剂W及癌的治疗/预防用药物组合物等。
[000引用于解决间願的方秦 本发明人等鉴于上述问题而进行深入研究，结果发现，具有氨基酸序列；LysArgTyr PheLysLeuSerHisLeuGinMetHisSerArgLysHis的肤与HLA-DRB1*08:02分子、 化八-01?1*13:02分子、化4-01?1*14:03分子、化4-01?1*14:05分子、化4-0地1*03:02、和 HLA-D地1*04:01分子结合，将辅助性T细胞活化和/或将细胞毒性T细胞活化，从而完成了 本发明。
[0009] 良P，本发明提供： (1) 一种方法，其为包含将WT1肤添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的工序的 辅助性T细胞的活化方法，该WT1肤具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分 子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05 分子、HLA-D地 1*03:02 分子、和HLA-D地 1*04:01 分子中的任意一种MHCII类分子结合的能力。
[0010] 似根据（1)所述的方法，其中，WT1肤具有与HLA-DRB1*08:02分子、 HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05 分子、HLA-D地 1*03:02 分子、 和HLA-D地1*04:01分子中的至少两种MHCII类分子结合的能力。
[0011] 做根据（1)或似所述的方法，其中，WT1肤还具有与选自HLA-DRB1*01:01分 子、HLA-DRB1*04:01 分子、HLA-DRB1*04:03 分子、HLA-DRB1*04:05 分子、HLA-DRB1*04:06 分子、HLA-DRB1*08:03 分子、HLA-DRB1*09:01 分子、HLA-DRB1*11:01 分子、HLA-DRB1*15:01 分子、HLA-DRB1*15:02 分子、HLA-DRB3*02:02 分子、HLA-DRB4*01:01 分子、HLA-DPB1*02:01 分子、HLA-DPB1*03:01 分子、HLA-DPB1*05:01 分子、和HLA-DPB1*09:01 分子中的任意一种 HLAII类分子结合的能力。
[001引（4)根据（1)~做中任一项所述的方法，其中，WT1肤向抗原呈递细胞的添加通 过WT1肤、编码WT1肤的多核巧酸、含有该多肤的表达载体、或含有该表达载体的细胞的添 加来进行。
[001引 城根据（1)~（4)中任一项所述的方法，其中，WT1肤为含有氨基酸序列；LysArg TyrPheLysLeuSerHisLeuGinMetHisSerArgLysHis(序列号2)的肤、其突变体 或修饰体。
[0014] (6)-种组合物，其为用于将WT1肤添加于抗原呈递细胞而将辅助性T细胞活化的 含有WT1肤的组合物，该WT1肤具有与选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、化八-03日1*14:03分子、化4-01?日1*14:05分子、化4-0地1*03:02分子、和化4-0地1*04:01分 子中的任意一种MHC II类分子结合的能力。
[00巧](7)根据（6)所述的组合物，其中，WT1肤具有与HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05 分子、HLA-D地 1*03:02 分子、 和HLA-D地1*04:01分子中的至少两种MHCII类分子结合的能力。
[0016] 做根据做或（7)所述的组合物，其中，WT1肤还具有与选自HLA-DRB1*01:01分 子、HLA-DRB1*04:01 分子、HLA-DRB1*04:03 分子、HLA-DRB1*04:05 分子、HLA-DRB1*04:06 分子、HLA-DRB1*08:03 分子、HLA-DRB1*09:01 分子、HLA-DRB1*11:01 分子、HLA-DRB1*15:01 分子、HLA-DRB1*15:02 分子、HLA-DRB3*02:02 分子、HLA-DRB4*01:01 分子、HLA-DPB1*02:01 分子、HLA-DPB1*03:01 分子、HLA-DPB1*05:01 分子、和HLA-DPB1*09:01 分子中的任意一种 HLAII类分子结合的能力。
[0017] (9)根据做~做中任一项所述的组合物，其中，WT1肤向抗原呈递细胞的添加 通过WT1肤、编码WT1肤的多核巧酸、含有该多核巧酸的表达载体、或含有该表达载体的细 胞的添加来进行。
[001引 （10)根据做~（9)中任一项所述的组合物，其中，WT1肤为含有氨基酸序列；Lys ArgTyrPheLysLeuSerHisLeuGinMetHisSerArgLysHis(序列号 2)的肤、其突 变体或修饰体。
[0019] (11) 一种抗原呈递细胞，其呈递含有WT1肤的抗原肤与MHCII类分子的复合体， 前述MHCII类分子为选自HLA-DRB1*08:02 分子、HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-D地1*03:02分子、和HLA-D地1*04:01分子中的任意一种 MHCII类分子。
[0020] (12) -种辅助性T细胞，其识别含有WT1肤的抗原肤与MHCII类分子的复合体， 前述MHCII类分子为选自HLA-DRB1*08:02 分子、HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05分子、HLA-D地1*03:02分子、和HLA-D地1*04:01分子中的任意一种 MHCII类分子。
[0021] (13) -种细胞毒性T细胞，其通过（11)所述的辅助性T细胞活化。
[0022] (14) 一种用于治疗或预防癌的药物组合物，其含有（6)~（10)中任一项所述的组 合物、（11)所述的抗原呈递细胞、（12)所述的辅助性T细胞、或（13)所述的细胞毒性T细 胞中的任意一种作为有效成分。
[0023] (15)-种药物组合物，其为含有WT1肤、编码WT1肤的多核巧酸、含有该多核巧酸 的表达载体、或含有该表达载体的细胞中的任意一种作为有效成分的用于将细胞毒性T细 胞活化的药物组合物，其用于给予具有选自HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02分子、 化八-03日1*14:03分子、化4-01?日1*14:05分子、化4-0地1*03:02分子、和化4-0地1*04:01分 子中的任意一种MHCII类分子的对象。
[0024] (16) -种抗体，其与WT1肤特异性结合，该WT1肤具有与选自HLA-DRB1*08:02分 子、化4-01?1*13:02分子、化4-01?1*14:03分子、化4-01?1*14:05分子、化4-0地1*03:02 分子、和HLA-D地1*04:01分子中的任意一种MHCII类分子结合的能力。
[0025] (17) - 种方法，其确定选自HLA-DRB1*08:02 分子、HLA-DRB1*13:02 分子、 化八-01?1*14:03分子、化4-01?1*14:05分子、化4-0地1*03:02 分子、和化4-0地1*04:01中 的任意一种MHCII类分子阳性对象中的WT1特异性辅助性T细胞的存在或量，其包含； (a)使用WT1肤刺激由前述对象获得的试样， 化）调查细胞因子或辅助性T细胞的存在或量 的工序，细胞因子或辅助性T细胞的存在或量的增大表示WT1特异性辅助性T细胞的 存在或量。
[00%]发巧的效果 根据本发明，得到通过使用WT1肤，适用于具有HLA-DRB1*08:02分子、HLA-DRB1*13:02 分子、HLA-DRB1*14:03 分子、HLA-DRB1*14:05 分子、HLA-D地 1*03:02 分子、和 HLA-D地1*04:01分子的对象而将辅助性T细胞活化的方法、用于其的组合物、将细胞毒性T 细胞活化的方法、用于其的组合物、细胞毒性T细胞的活化诱导剂、W及通过将辅助性T细 胞和细胞毒性T细胞活化实现的癌的治疗和/或预防用药物组合物等，因此能够实现具有 上述MHCII类分子的对象的体内和体外的辅助性T