细菌纤维素及生产该细菌纤维素的细菌的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及细菌纤维素及生产该细菌纤维素的细菌，尤其设及在液体中分散性优 异的细菌纤维素及生产该细菌纤维素的细菌。
【背景技术】
[000引细菌纤维素通常由宽度为约50nm的微细纤维（纳米纤维）构成，具有高机械强 度、生物适合性、生物降解性等特性，因此作为能够用于各种产业领域的材料而受到关注。 细菌纤维素通常通过对醋酸菌等细菌进行静置培养而在培养基表面W包含凝胶状物质的 膜（W下称为"凝胶状膜"。）的形式而获得，但该凝胶状膜在作为材料应用时缺乏成形性、 与其它物质的混合性，此外由于生产效率低而使成本变高，因此存在作为实用材料的应用 性匿乏该样的问题。
[0003] 对于该样的问题，期待一种非凝胶状膜、作为材料的应用性优异的、分散在液体中 的细菌纤维素。例如，非专利文献1中公开了一种通过对木醋杆菌sucrofermentans亚种 (Ace忧acterx}dinumsubsp.sucrofermentans)进行通气揽拌培养而获得的细菌纤维素， 此外，非专利文献2中公开了一种在添加了駿甲基纤维素（CMC)的培养基中对木葡糖酸醋 杆菌（Gluconacetobacterx^inum)JCM10150株进行旋转振荡培养而获得的细菌纤维素。 现有技术文献非专利文献
[0004] 非专利文献1:吉永等、化学和生物、Vol. 35、No. 11、第7~14页、1997年
[0005]非专利文献2:S. Warashina等、纤维素学会第17次大会2010cellulose R&D讲演 要旨集、第98页、2010年
【发明内容】
[0006] 发明要解决的课题
[0007] 但是，从并非使用添加了具有细菌纤维素的分散性提高效果的CMC的培养基而生 产、W及在水中分散为"小的粒状或纤维状"（同一文献；第9页右栏）的记载可知，非专利 文献1所述的细菌纤维素在水中的分散性并不高。因此，在用于实用化的成形性、与其它物 质的混合性方面并不充分。此外，非专利文献2所述的细菌纤维素在向CMC培养基的添加 量为0. 5%、1%、2%时，任一情况下，含有该细菌纤维素的水均是下部的白浊性高于上部、 观察到沉淀，并且纤维素粒子为能够目视辨认的程度的大小（同一文献；Fig. 1)，因此在水 中的分散性不高。因此，在实用化中所必须的成形性、与其它物质的混合性方面并不充分。 [000引因此，非专利文献1及非专利文献2任一文献中所述的细菌纤维素作为材料的成 形性、与其它材料的混合性均不充分，在材料的生产效率方面也缺乏实用性。
[0009] 本发明是为了解决该样的问题而做出的发明，其目的在于提供一种在液体中的分 散性高、实用化中的成形性和与其它材料的混合性均良好、作为实用材料的应用性优异的 细菌纤维素及生产该细菌纤维素的细菌。用于解决课题的手段
[0010] 本发明人进行了深入研究，结果发现，如下获得的细菌纤维素在水中具有高分散 性，由此完成了下述各发明；所述细菌纤维素通过将作为新的菌株的SIID9587株（保藏号N口EBP-01495) (W下，有时称为"肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）"。）在含 CMC的培养基中揽拌培养而获得，所述SIID9587株W由植物油制造生物柴油燃料时产生的 含甘油的副产物炬ioDiesel化elBy-pro化ct;BDF-B、废甘油）、试剂甘油或糖蜜为碳源 的中间葡糖醋杆菌。
[0011] (1)本发明的细菌纤维素具有如下物性；含有终浓度为0.让〇. 006% (w/w)的细 菌纤维素的水的波长500nm的光透过率为35%W上。
[001引 似本发明的细菌纤维素进而具有如下物性；在下述U~vD的条件下进行的凝 胶渗透色谱的色谱图的峰顶（^一夕hッ文）的保留体积为2. 5mLW上且小于3.OmL。
[0013]i)柱；填充有粒径为9ym的甲基丙締酸醋聚合物的内径为6. 0mm及长度为15cm 的柱、U)保护柱；内径为4. 6mm、长度为3. 5cm、iU)柱温度；35°C、iv)送液速度；0. 07血/ 分钟、V)洗脱液；40~42% (w/w)四了基氨氧化磯水溶液、Vi)洗脱液中的细菌纤维素的 终浓度；〇. 2% (w/w)。
[0014] (3)本发明的细菌纤维素，优选将抓F-B同化而生产。
[0015] (4)本发明的细菌纤维素，优选将选自砂糖、制造砂糖时产生的含有庶糖的副产物 及它们的水解物、W及异构化糖中的1或2种W上同化而生产。
[0016] (5)本发明的细菌纤维素是将制造砂糖时产生的含有庶糖的副产物同化而生产的 情况下，前述副产物优选为糖蜜。
[0017] (6)本发明的细菌纤维素也可W利用中间葡糖醋杆菌佑luconacetobacter intermedius)而生产。
[001引 （7)本发明的细菌纤维素也可W利用中间葡糖醋杆菌SIID9587株（肥D0-01株） (保藏号NITEBP-01495)而生产。
[0019] 做本发明的细菌的特征在于，生产前述（1)~妨中任一项所述的细菌纤维素。
[0020] (9)本发明的细菌也可W是生产前述（1)~巧）中任一项所述的细菌纤维素的中 间葡糖醋杆菌SIID9587株（肥D0-01株）（保藏号NITEBP-01495)。
[0021] 发明的效果
[0022] 根据本发明的细菌纤维素，可W获得几乎均一分散在水等液体中的细菌纤维素， 该细菌纤维素由于成形性、与其它物质的混合性优异，因此可W有助于最终制品的品质、生 产效率的提高或生产成本的降低。此外，根据本发明，可W获得无需利用混合器进行微细化 等工序而通过温和条件下的精制即可几乎均一地分散在液体中的细菌纤维素，可W获得具 有较大的平均分子量的细菌纤维素。进而，根据本发明，通过利用BDF-B、糖蜜等制造砂糖时 产生的含有庶糖的副产物作为碳源，有助于资源的有效利用且可W实现细菌纤维素的低价 格化。此外，根据本发明还使用中间葡糖醋杆菌或中间葡糖醋杆菌SIID9587株（肥D0-01 株）进行生产，由此可W高效率地获得大量的细菌纤维素。
【附图说明】
[002引图1是表示分离将抓F-B同化而生产细菌纤维素的细菌的步骤的图。图中，细菌 纤维素简记为BC。
[0024] 图2-1是示出SIID9587株和中间葡糖醋杆菌T巧株的16SrDNA碱基序列的一致 点及不同点的图。图中，碱基序列的一致点用*标记来表示，不同点用方框围住来表示。此 夕F，图中，G.intermedins表示中间葡糖醋杆菌町'2株。
[0025] 图2-2为示出SIID9587株和中间葡糖醋杆菌T巧株的16SrDNA碱基序列的一致 点及不同点的图。图中，碱基序列的一致点用*标记来表示，不同点用方框围住来表示。此 夕F，图中，G.intermedins表示中间葡糖醋杆菌町'2株。
[0026] 图3是示出SIID9587株的细菌学性状的图。
[0027] 图4是示出对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行静置培养而获得 的细菌纤维素（上段图）、W及将抓F-B及试剂甘油作为碳源进行通气揽拌培养而获得的生 产物（中段图及下段图）的IR谱图的图。
[0028] 图5是示出分别包含对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行通气揽 拌培养及进行静置培养而获得的细菌纤维素（左图及中央图）、W及来自纸浆的细菌纤维 素纳米纤维（右图）的水的外观的图。
[0029] 图6是示出含有分别将糖蜜及试剂甘油作为碳源对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌 SIID9587株）进行通气揽拌培养而获得的细菌纤维素的水的波长500nm的光透过率W及细 菌纤维素的生产量炬C生产量）及生产速度炬C生产速度）的图。
[0030] 图7是示出含有对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）、W及作为 已知的细菌纤维素生产菌的汉森葡糖醋杆菌佑.hansenii)ATCC23769株、木葡糖醋杆 菌（G.x}dinus)ATCC53582株、木葡糖醋杆菌ATCC700178炬PR2001)株、木葡糖醋杆菌 JCM10150株、中间葡糖醋杆菌DSM11804株及木葡糖醋杆菌KCCM40274株进行通气揽拌培养 而获得的细菌纤维素的水的波长500nm的光透过率、W及BC生产量、BC生产速度及BC生 产速度的比率的图。
[003U 图8是示出将抓F-B作为碳源对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行 旋转培养的而获得的细菌纤维素（样品B)、来自纸浆的纤维素纳米纤维（来自纸浆的CNF液）及普鲁兰多糖的凝胶渗透色谱的色谱图的图。
[0032] 图9是示出对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行通气揽拌培养（揽 拌培养BC液）及静置培养（混合器处理静置培养BC液）而获得的细菌纤维素的纤维宽度 及利用透射型电子显微镜获得的观察图像的图。
[003引 图10为示出对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行通气揽拌培养而 获得的细菌纤维素（揽拌培养BC液）及来自纸浆的纤维素纳米纤维（来自纸浆的CNF液） 的利用透射型电子显微镜获得的观察图像的图。
[0034] 图11为示出对肥D0-01株（中间葡糖醋杆菌SIID9587株）进行通气揽拌培养而 获得的细菌纤维素（揽拌培养BC液）及来自纸浆的纤维素纳米纤维（来自纸浆的CNF液） 的利用偏光显微镜获得的观察图