一种银耳发酵提取物的制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种银耳发酵提取物的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 银耳，又名白木耳、雪耳，营养丰富，食味鲜美，不但是营养价值很高食用菌，也是 药用价值较高药用菌，是世界公认保健品。银耳内含有碳水化合物、蛋白质、多糖、维生素和 多种氨基酸等，是滋补强壮、扶正固本的良药。我国银耳资源丰富，为开发应用银耳提供有 利条件。随着银耳栽培业迅速发展及应用范围拓宽，对银耳营养成分及在医疗保健作用方 面研究也逐步深入。对银耳活性物质的提取工艺也不断完善，但是提取方法主要以浸提法 为主。
[0003] 银耳提取物在美容护肤中的应用已经有了很多，银耳对于皮肤的功效主要是抗衰 老、保湿补水等方面。但由于银耳提取物的成本限制，在护肤品中的添加量很低，仅为〇. 2 %~2 %，因此在护肤品中能起到的作用微乎其微，而主要依靠其它成分的原料起主导作 用，使得这种产品的生产成本比较高，效果并不尽然，没有充分发挥银耳提取液所起到的作 用。究其原因，除了制作工艺复杂、生产成本的因素外，主要是还没有对银耳发酵物提取液 在护理人体肌肤上所产生的作用和机理具有充分的认识。
[0004] 发酵技术在护肤品中应用已有大量报道，最著名的例子就是SKII的神仙水，专利 成分Pitera(覆膜酵母菌发酵产物滤液），利用一种特殊的天然酵母"Saccharomycopsis" 发酵后提炼出的成分，含有健康皮肤不可或缺的氨基酸、矿物质、有机酸、无机酸等自然成 分。即使是SKII的神仙水，专利成分Pitera在产品中也只是作为一种功效性成分加入其 中，产品中还含有其它大量化学成分。化妆品中一般添加的化学成分有：硅油、增稠剂、pH 调节剂、乳化剂、香精、抗氧化剂、色素等，这些成分对皮肤并没有实际功效，反而会增加潜 在的皮肤刺激性。
[0005] 目前较为常用的提取方法为热水浸提法、酸提取法、碱提取法、酶提取法，而使用 微生物发酵法提取银耳活性物还未见报道。微生物法又可称为发酵法，是以细菌、霉菌等微 生物为体系对外源底物进行结构修饰的化学反应，微生物转化不需要添加其它的催化剂， 只需先培养出大量的微生物菌种，然后加入底物进行能实现的反应，所以微生物法比化学 试剂的反应法更专一、更有效；反应条件温和，微生物发酵一般都是在常温和pH为7左右的 条件下进行催化反应，不需要高温、高压等苛刻的条件；设备的运行操作也比较简单、安全， 产生的公害较少，一般不会造成环境污染，后处理也相对简单；筛选不同的菌种与优化反应 条件可提高转化率，对同一底物进行微生物转化的菌种可能有多种，通过筛选选出最佳菌 种，可以保证较高的转化率。当今国内外许多研究者采用生物法生产多糖，即微生物法、酶 法、植物细胞组织培养等多种生物转化法结合，已经呈现出明显优势。因为绝大多数的发酵 过程所需条件非常温和，而且反应产物单纯和能耗少，是一个与环境友善的绿色化学过程。 随着基因工程、细胞工程、酶工程技术的不断发展和完善，微生物发酵技术有了突飞猛进的 发展，在天然活性物质的研究开发中发挥着越来越重要的作用。
[0006] 现有的银耳活性物提取最常采用的是水提法：银耳干品粉碎后加去离子水，调pH 后搅拌浸提一段时间，离心后取上清液浓缩，最后使用乙醇沉淀，干燥后粉碎得到产物。但 是该方法在提取过程中引入有机物，不仅破坏环境，且在应用的过程中存在潜在的安全隐 患。
【发明内容】
[0007] 本发明的一个目的是提供一种银耳发酵提取物的制备方法。
[0008] 本发明提供的银耳发酵提取物的制备方法包括如下步骤：用菌种或其培养液或其 悬浮液发酵培养银耳，得到发酵产物，即为银耳发酵提取物；
[0009]所述菌种为如下至少一种：鲁氏结合酵母Zygosaccharomycesrouxii、巴氏 酵母Saccharomycespastorianus、酿酒酵母Saccharomycescerevisiae、葡萄酒酵母 Saccharomycesellipsoideus、木醋杆菌Acetobacterxylinus、德氏乳杆菌保加利亚亚 种Lactobacillusdelbrueckiibulgaricus、嗜热链球菌Streptococcusthermophilus、 两歧双歧杆菌Bifidobacteriumbifidum、乳酸乳球菌LactococusIactis和奠肠球菌 Enterococcusfaecalis。
[0010] 上述方法中，所述菌种培养液中的菌种总量和银耳的配比为IO6-IO9CFU:5-10g。
[0011] 上述方法中，所述菌种培养液为如下1)-3)中任一种：
[0012] 1)含有酿酒酵母和嗜热链球菌的培养液；
[0013] 2)含有德氏乳杆菌和鲁氏结合酵母的培养液；
[0014] 3)含有两歧双歧杆菌和乳酸乳球菌的培养液。
[0015] 上述方法中，所述酿酒酵母和所述嗜热链球菌的菌落形成单位比为1 :1 ;
[0016] 所述德氏乳杆菌和所述鲁氏结合酵母的菌落形成单位比为1 :1 ;
[0017] 所述两歧双歧杆菌和所述乳酸乳球菌的菌落形成单位比为1 :1。
[0018] 上述方法中，所述发酵培养的时间为24-72h;所述发酵培养的温度35-45°C;所述 菌种培养液的PH值为6. 5-7. 5。
[0019] 上述方法中，所述方法中在得到发酵产物后还包括如下步骤：将所述发酵液离心， 取上清液，为银耳发酵提取物。
[0020] 本发明的另一个目的是提供上述方法制备得到的银耳发酵提取物。
[0021] 本发明的最后一个目的是提供一种用于保湿的产品。
[0022] 本发明提供的用于保湿的产品的活性成分为上述银耳发酵提取物。
[0023] 上述产品中，所述产品为化妆品，具体为面膜或精华液或爽肤水。
[0024] 上述方法或上述银耳发酵提取物或上述产品在提高皮肤含水量中的应用也属于 本发明的保护范围。
[0025] 上述方法或上述银耳发酵提取物或上述产品在制备提高皮肤含水量的产品中的 应用也属于本发明的保护范围。
[0026] 上述方法或上述银耳发酵提取物或上述产品在皮肤保湿中的应用也属于本发明 的保护范围。
[0027] 上述方法或上述银耳发酵提取物或上述产品在制备具有皮肤保湿功能的产品中 的应用也属于本发明的保护范围。
[0028] 上述方法或上述银耳发酵提取物或上述产品在作为化妆品中的应用也属于本发 明的保护范围。
[0029] 上述应用中，所述化妆品具体为面膜或精华液或爽肤水。
[0030] 本发明提供了一种银耳发酵物的提取方法，该方法选择更加合适的菌种，使产品 更加天然，且不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化的简化了生产步 骤，使该发酵技术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。通 过实验证明：本发明制备的银耳发酵提取物不含任何化学成分，可以直接作为面膜或精华 液或爽肤水的成品使用，比现有市面上的其他产品更加天然，不会给肌肤造成任何负作用； 而且比普通提取方法获得更小的成分，更易让皮肤充分吸收。
【附图说明】
[0031] 图1为实施例1的实验组1得到的银耳发酵提取物的保湿补水检测结果。
[0032] 图2为实施例2的实验组2得到的银耳发酵提取物的保湿补水检测结果。
[0033] 图3为实施例3的实验组3得到的银耳发酵提取物的保湿补水检测结果。
[0034] 图4为实施例1的实验组1得到的银耳发酵提取物的活性多肽分子量分布HPLC 图谱。
【具体实施方式】
[0035] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0036] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0037] 下述实施例中的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，pH值为7. 0。
[0038] 下述实施例中的YTO培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：酵母提取物1% (质量分数），胰蛋白胨2% (质量分数），葡萄糖2% (质 量分数），PH值为7. 0。
[0039] 下述实施例中的银耳是中国同仁堂有限责任公司的产品，下述实施例中的银耳粉 是将银耳粉碎成粉得到的。
[0040] 下述实施例中的酿酒酵母Saccharomycescerevisiae的ATCC编号为26603,公众 可从北京工商大学获得，也可从ATCC获得。
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