一种人树突状细胞成熟和功能的特异性生物标志物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术和医学领域。具体而言，本发明涉及一种长链非编码RNA-- Inc-DC作为人树突状细胞的鉴别、成熟状态和/或功能确定的新型特异性生物标志物中的 用途和应用方法。
【背景技术】
[0002] 哺乳动物基因组可转录多种长非编码RNA(long noncoding RNA，IncRNA)，而其中 仅鉴定出少数IncRNA的功能。虽然已报道某些IncRNA在某些过程和疾病中起到重要作用， 但关于IncRNA与免疫系统之间的研究并不多，更没有任何涉及IncRNA与树突状细胞之间 关系的研究报道。
[0003] 树突状细胞（dendritic cells，DC)是免疫系统中重要的抗原递呈细胞，它在机体 抗肿瘤、抗感染、移植排斥及自身免疫性疾病的预防与治疗中发挥着重要作用。树突状细胞 的成熟和功能状态决定着免疫应答的走向和强度，许多临床疾病都是由于树突状细胞的发 育和功能异常导致的。
[0004] 过去的研究已证实多种转录因子、细胞因子、受体等（如HL 1、STAT3、Flt3/ Flt3L)在树突状细胞的分化发育中发挥着重要作用，也确定了很多与树突状细胞功能相关 的蛋白分子（如⑶80/86、⑶83、⑶11c、⑶1、⑶40、MHC/HLA)。然而，这些分子均是蛋白质 的编码基因，且并非由树突状细胞特异性表达。因此，若要确定树突状细胞的分类及其功能 成熟状态，则需要联合检查数个标志物，如联合检测到CD80 +CD1 Ic+MHC,才能确定其为常规 树突状细胞并确定其功能成熟状态。
[0005] 为方便临床和科研应用，本领域中迫切需要研究和开发出针对树突状细胞（尤其 是常规树突状细胞）的鉴别、成熟和功能的特异性表达生物标志物。
【发明内容】
[0006] 本发明的主要目的之一在于提供一种鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态和/ 或其功能的生物标志物--Inc-DC及其杂交或同源序列。本发明的另一目的在于提供检 测Inc-DC及其杂交或同源序列的试剂在制备鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态和/ 或其功能的试剂盒中的应用。本发明的另一目的在于提供一种鉴别常规树突状细胞和/或 其成熟状态和/或其功能的方法和试剂盒。
[0007] 在本发明的第一方面中，提供了选自下组的序列或其表达产物作为鉴别常规树突 状细胞和/或其成熟状态和/或其功能的生物标志物的应用：
[0008] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0009] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0010] (C)与（a)或（b)中序列具有90%以上，优选95%以上，更优选98%以上，更优选 99%以上序列相同性的序列；和
[0011] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列。
[0012] 在本发明的第一方面中，提供了检测选自下组的序列或其表达产物的试剂在制备 鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态和/或其功能的试剂盒中的应用：
[0013] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO: 2 所示的序列；
[0014] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0015] (c)与（a)或（b)中序列具有90%以上，优选95%以上，更优选98%以上，更优选 99%以上序列相同性的序列；和
[0016] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列。
[0017] 在本发明的一些实施方式中，所述序列是SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2所示的序 列或SEQ ID NO: 16所示的同源序列。
[0018] 在本发明的一些实施方式中，所述常规树突状细胞来源于哺乳动物，优选人、大 鼠、小鼠、犬、猴、猩猩、猪、马、牛或羊，更优选人。
[0019] 在本发明的一些实施方式中，所述成熟状态选自：细胞表面共刺激分子的表达 ⑶80/86、⑶40,抗原递呈分子HLA的表达，免疫活化细胞因子IL-12的产生；所述功能选自： 激活初始T细胞应答、启动免疫应答、调控免疫应答、维持免疫应答、摄取抗原、加工处理抗 原和递呈抗原。
[0020] 在本发明的一些实施方式中，所述成熟状态为选自下组中的一种或多种：与未接 触所述序列或其表达产物、或其促效剂的对照树突状细胞或前体细胞相比，成熟树突状细 胞表面表达的功能分子（如抗原递呈分子HLA-DR、共刺激分子⑶80和⑶40)增加、IL-12 分泌提高、使树突状细胞活化⑶4 +T细胞的能力提高（如T细胞分泌的IFN- γ和IL-2增 加）、和/或使树突状细胞促进T细胞增殖的能力提高。
[0021] 在本发明的一些实施方式中，若待鉴别细胞中所述序列或其表达产物的水平高于 非常规树突状细胞，则表明该待鉴别细胞是常规树突状细胞；若待鉴别细胞中所述序列或 其表达产物的水平较处理前升高，则表明所述待鉴别细胞是正向成熟常规树突状细胞转 化，且表明所述处理能诱导向成熟常规树突状细胞的转化、和/或所述常规树突状细胞更 能激活初始T细胞应答和/或促进免疫应答；若待鉴别细胞为常规树突状细胞，且处理后 所述序列或其表达产物的水平升高，则表明该常规树突状细胞正向成熟常规树突状细胞转 化，且表明所述处理能诱导向成熟常规树突状细胞的转化；若待鉴别细胞为常规树突状细 胞，且处理后所述序列或其表达产物的水平升高，则表明该常规树突状细胞与未接触所述 序列或其表达产物、或其促效剂的对照树突状细胞或前体细胞相比，其细胞表面表达的功 能分子（如抗原递呈分子HLA-DR、共刺激分子⑶80和⑶40)增加、IL-12分泌提高、使树突 状细胞活化CD4 +T细胞的能力提高（如T细胞分泌的IFN- γ和IL-2增加）、和/或使树突 状细胞促进T细胞增殖的能力提高。
[0022] 在一些实例中，所述序列或其表达产物的水平高于非常规树突状细胞或较处理前 提高，则表明所述待鉴别细胞具有或正趋于具有选自下组的一种或多种功能：激活初始型 T细胞、启动免疫应答、调控免疫应答、维持免疫应答、摄取抗原、加工处理抗原和递呈抗原。
[0023] 在一些实例中，所述序列或其表达产物的水平用于免疫功能判断、免疫治疗方案 选择和/或预后评估。
[0024] 在一些实例中，所述非常规树突状细胞为选自下组中的一种或多种：外周血单 核细胞、浆细胞样树突状细胞、单核来源巨噬细胞、中性粒细胞、酸性粒细胞、CD4+T细胞、 CD8+T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。
[0025] 在一些实例中，所述鉴别通过选自下组中的一种或多种方法进行：qRT-PCR、RNA 印迹法、原位杂交、生物芯片技术、流式细胞术、二代测序RNA-seq，优选qRT-PCR。
[0026] 在本发明的一些实施方式中，所述试剂为选自下组中的一种或多种：针对所述序 列或其表达产物的探针或引物。
[0027] 在一些实例中，所述引物是qRT-PCR检测用的定量引物，优选SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:4所示的引物。
[0028] 在一些实例中，所述试剂盒还包含：其它鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态 的试剂，例如 PU. 1、STAT3、Flt3/Flt3L、CD80/86、CD83、CDllc、CD1、CD40、MHC/HLA 检测试 剂。
[0029] 在本发明的第三方面中，提供了一种试剂盒，其包含：
[0030] i)检测选自下组的序列或其表达产物水平的试剂：
[0031] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0032] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0033] (c)与（a)或（b)中序列具有90 %以上，优选95 %以上，更优选98 %以上，更优选 99%以上序列相同性的序列；和
[0034] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列；
[0035] ii)容纳所述试剂的容器。
[0036] 在一些实例中，所述试剂盒用于鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态。
[0037] 在一些实例中，所述鉴别通过选自下组中的一种或多种方法进行：qRT-PCR、RNA 印迹法、原位杂交、生物芯片技术、流式细胞术、二代测序RNA-seq，优选qRT-PCR。
[0038] 在一些实例中，所述试剂为选自下组中的一种或多种：针对所述序列或其表达产 物的探针或引物、或其它以此序列为指示的检测方法。
[0039] 在一些实例中，所述引物是qRT-PCR检测用的定量引物，优选SEQ ID N0:3和SEQ ID N0:4所示的引物。
[0040] 在一些实例中，所述试剂盒还包含：其它鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态 和 / 或其功能的试剂，例如 PU. l、STAT3、Flt3/Flt3L、CD80/86、CD83、CDllc、CDl、CD40、MHC/ HLA检测试剂。
[0041] 在本发明的第四方面中，提供了一种鉴别常规树突状细胞和/或其成熟状态和/ 或其功能的方法、或鉴别能诱导产生常规树突状细胞或使其成熟的试剂或体系的方法，所 述方法包括检测待鉴别细胞中选自下组的序列或其表达产物的水平的步骤：
[0042] (a) SEQ ID NO: 1 或 SEQ ID NO:2 所示的序列；
[0043] (b)在严格条件下与（a)限定的序列杂交的序列；
[0044] (c)与（a)或（b)中序列具有90 %以上，优选95 %以上，更优选98 %以上，更优选 99%以上序列相同性的序列；和
[0045] (d) (a)或（b)中序列在非人哺乳动物中的同源序列；
[0046] 在本发明的一些实施方式中，所述方法还包括：
[0047] 将待鉴别细胞中所述序列或其表达产物的水平与非常规树突状细胞中所述序列 或其表达产物的水平比较，或将处理前的待鉴别细胞中所述序列或其表达产物的水平与不 同时间段或处理阶段的待鉴别细胞中的所述序列或其表达产物水平比较；
[0048] 其中，若待鉴别细胞中所述序列或其表达产物的水平高于非常规树突状细胞，则 表明该所测细胞是常规树突状细胞；
[0049] 若待鉴别细胞中所述序列或