一种对波纹杂毛虫幼虫具有致病力的白僵菌菌株及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于害虫生物防治领域，涉及一种白僵菌菌株及其应用，具体地说是涉及 一株对波纹杂毛虫幼虫具有致病力的球孢白僵菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 波纹杂毛虫rat/aas(Walker)，属鳞翅目、枯叶蛾科、杂毛虫属，是 多种针阔叶林木、果数的重要食叶害虫，其寄主范围较广，除主要危害马尾松外，还危害包 括杉木、油茶、山苍子、板栗、杨梅等在内的数十种针阔叶树，在局部地区爆发成灾，大发生 时可将寄主植物的叶片(针叶）取食殆尽，被害的林分似火烧，造成极大的经济损失。
[0003]目前生产上波纹杂毛虫的防治主要是采用化学防治的手段，但长期使用化学药剂 会大量杀死害虫天敌和林中有益生物，也会使害虫产生抗药性，同时带来环境污染等问题。 寻求高效、环保、无公害的生物防治途径是目前生产上的迫切需求。
[0004] 白僵菌是一种应用最为广泛的虫生真菌，其具有致病力强、能在林间形成流行病、 不污染环境、易于规模化生产等优点，使得白僵菌在农林害虫的防治中得到了大量应用，是 林业害虫防治中使用量最大的微生物杀虫剂。白僵菌存在一定的寄主专化性，有研究证明 不同地理、寄主来源的菌株对靶标害虫的致病力差异十分显著，不同菌株对靶标害虫的致 死中时（LT5。）可相差数倍，甚至数十倍，因此，针对不同害虫筛选出致病力强的菌株是利用 白僵菌生物防治害虫的基础而又十分必要的工作。因此，本发明提供了一株对波纹杂毛虫 具有高致病力的白僵菌菌株，并进行了林间应用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一株对波纹杂毛虫幼虫具有致病力的白僵菌菌株及其应用。
[0006] 一株白僵菌，命名为球抱白僵菌（ifeawKeriaAassiana)FJBb201202,已于2015 年3月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（ChinaGeneral MicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路 1 号院3号；保藏编号：CGMCCNo. 10641。
[0007]球抱白僵菌（ifeai/KeriaAassiana)FJBb201202 具有以下特征： 该菌株从福建省光泽县司前乡黄坊村油茶林中采集的波纹杂毛虫幼虫僵虫体上分离 得到，在PPDA培养基上25± 1 °C下生长5天，菌落直径17mm，15天达60mm。菌落白色至 乳白色，初为疏茸状或棉絮状，后期形成乳粉状的孢子层，孢子层厚且均匀，中心凸起。菌 丝分枝，有格，无色光滑，有时成簇生长；产孢细胞(瓶梗）浓密簇生于短而膨大的柄细胞 上，瓶形，产孢细胞上部"之"字形，顶端变细长。分生孢子为近球形，单细胞，透明，光滑， 1. 8-2. 8X2-2. 7ym。最佳生长温度为 24~28°C。
[0008] 本发明所要解决的另一个技术问题是提供用于防治波纹杂毛虫幼虫的菌剂。
[0009] 本发明所提供的菌剂具体为孢子悬浮液或粉剂。其中孢子悬浮液的浓度为107孢 子/ml，粉剂孢子含量为120~180X10s孢子/g菌剂。
[0010] 本发明所提供的菌剂的有效成分是上述球孢白僵菌（及?ai/Keriabassiana) FJBb201202的分生孢子。
[0011] 本发明所提供的菌剂中的分生孢子来源于以上述球孢白僵菌（ifeaymria )FJBb201202菌株为菌种经固体发酵培养得到。球孢白僵菌（ifeai/Keria)FJBb201202菌株经液体发酵后接种于以麦麸和谷壳组成的固体培养基上固体发 酵8~10天后，发酵产物产孢量为120~180X10s孢子/克粉剂。
[0012] 本发明所提供的或所述的菌剂可用于防治波纹杂毛虫幼虫。
[0013] 本发明提供的球孢白僵菌（ifeai/Keria FJBb201202具有如下有益效 果： 生产形状好，产孢能力强，同时对波纹杂毛虫幼虫的致病力强，采用浓度为1〇7孢子/ ml的孢子悬浮液浸渍法接种致死中时（LT5。)为5. 83天，感染率为90. 0%。使用该菌株为菌 种，经液体发酵后，接种于以麦麸和谷壳组成的固体培养基上固体发酵8~10天，产孢量可 达120~180X10s孢子/g粉剂。使用固体发酵产物配制成107孢子/ml孢子悬浮液林间喷 雾后15天防治效果可达90%以上。使用固体发酵产物(粉剂）制成的粉炮林间防治15天 后，防治效果可达85%以上。使用该菌株的菌剂防治能显著降低波纹杂毛虫幼虫林间种群 数量。同时该菌株能在林间中长期宿存，具有较强的二次侵染能力，适合在波纹杂毛虫发生 林分中应用。
[0014] 菌种名称：球孢白僵菌 笔1了学名..Beauveria bassiana(Bals. )Vuill 菌株编号：FJBb201202 保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 保藏机构简称：CGMCC 地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 保藏日期：2015年3月19日 保藏中心登记入册编号：CGMCCNo. 10641。
【附图说明】
[0015] 图1为波纹杂毛虫幼虫及其被球孢白僵菌（ifeai/Keria)FJBb201202 感染状。
[0016] 图2为FJBb201202菌株在PPDA培养基上25±1°C下培养15天的菌落形态图。
【具体实施方式】
[0017] 以下结合具体实施例，对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，这些实施例用于 理解而不是限制本发明的范围。
[0018] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0019] 下述实施例中所用的试剂、材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0020] 下述实施例中的PPDA培养基是指蛋白胨马铃薯葡萄糖琼脂培养基的英文缩写， 其具体配方为每l〇〇〇ml水中含有马铃薯200g(切块煮熟后过滤，取滤液)，葡萄糖20g，蛋 白胨l〇g，琼脂20g。
[0021] 实施例1 球抱白僵菌（及1ai/KeriaAawiaa^FJBbSCmC^的鉴定 形态学鉴定 将分离纯化的白僵菌菌株在直径为90mm的平板PPDA培养基上于25 ± 1°C条件下培养， 4-5天后挑取白色菌丝制片在显微镜下观察菌株的菌丝和分生孢子梗形态；10-12天后挑 取成熟分生孢子制片观察分生孢子的形态与大小。15天左右观察记录菌落形态特征。该菌 株菌落白色至乳白色，初为疏茸状或棉絮状，后期形成乳粉状的孢子层，孢子层厚且均匀， 中心凸起。菌丝分枝，有格，无色光滑，有时成簇生长；产孢细胞(瓶梗）浓密簇生于短而膨 大的柄细胞上，瓶形，产孢细胞上部"之"字形，顶端变细长。分生孢子为近球形，单细胞，透 明，光滑，1.8-2. 8X2-2. 7ym。
[0022] 球抱白僵菌（ifeawKeriaAassiana)FJBb201202 已于 2015 年 3 月 19 日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，登记入册编号为CGMCC No.10641。
[0023] 实施例2 球抱白僵菌（及1ai/Keria 的生物学特性 用点滴法将球孢白僵菌（你ayKeria 菌株FJBb201202接种于PPDA平板培 养基中央，置于25 土 1°C培养箱中培养，用十字交叉法每天测量1次菌落直径，每处理设3个 重复，共观察15天。同时记录开始产孢时间，第15天(产孢基本结束）用直径为1. 5cm的 打孔器，于菌落中心至边缘1/2处打取小菌碟，取出菌碟置于含30mL的0. 3%。吐温-80无 菌水的锥形瓶内，振荡使孢子充分分散并适当稀释，血球计数板测定孢子浓度并换算成单 位面积的产孢量。每个平板打3个孔进行孢子含量测定，取其平均值作为1个重复的孢子 数。各菌株重复测定3次。同时测定白僵菌BbMaA-01菌株作为对照，白僵菌BbMaA-01菌 株(球孢白僵菌和金龟子绿僵菌不同菌株对黑足角胸叶甲成虫的致病力评价.昆虫学报， 2011年第11期.）为福建省林科院森保所保存菌株，为公知菌株。
[0024] 表1 球抱白僵菌（ifeai/KeriaAassiana)菌株FJBb201202生物学特性
由表1可见，球抱白僵菌（ifeai/KeriaAassiana)菌株FJBb201202菌落生长较快，5天 菌落直径为17mm，15天菌落直径达60mm，生长3天后菌落上开始出现白色孢子，产孢量为 1. 86X10s孢子/cm2。而作为对照的球孢白僵菌BbMaA-01菌株，生长速度较FJBb201202菌 株慢，且产孢量也低，只有球孢白僵菌FJBb201202菌株产孢量的59%。
[0025] 实施例3 球孢白僵菌dsi/KeriaAassiafla)FJBb201202对波纹杂毛虫幼虫的致病力测定 从PPDA平板上刮取一定量球孢白僵菌（ifeai/KeriaAassiaag)FJBb201202孢子置于 灭菌的0. 3%。吐温-80溶液中，配制成107孢子/mL的孢子悬浮液(该悬浮液即为球孢白僵 菌FJBb201202菌剂）；将健康的3龄波纹杂毛虫幼虫在孢悬液中浸渍10s，然后重新放入养 虫盒内，以新鲜松针喂食，接种30头波纹杂毛虫幼虫，重复3次；以浸渍0. 3%。吐温-80无 菌水溶液处理作为对照。处理后将养虫盒放置于黑暗的25±1°C恒温培养箱中，每天观察 记载波纹杂毛虫幼虫死亡情况，死虫保湿培养观察菌丝生长及产孢情况(虫尸上长出肉眼 可见的菌丝及孢子)，并挑片在显微镜下观察是否为白僵菌感染致死，统计死亡率及感染率 (僵虫率)。
[0026] 表2波纹杂毛虫幼虫接种白僵菌不同菌株后累计死亡率
采用1〇7孢子/