一株抑制黄曲霉毒素的深海阿氏芽孢杆菌的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及深海微生物技术与真菌毒素生物防控技术领域，具体的说是一株抑制黄曲霉毒素的深海阿氏芽孢杆菌。
【背景技术】
[0002]近年来，大洋深海等极端环境的微生物资源及其开发利用成为世界瞩目与竞争的焦点，深海微生物由于生活环境的极端多样，具备了极强的自卫能力和环境适应能力，有着极其重要的理论与应用价值，在农业、医药、食品、工业、环保、国防等领域有着广泛的应用前景。
[0003]国内外已有为数不多的单位开展了深海微生物在生物防治领域的研究，但主要集中在对非产毒真菌的生物防治，对产毒真菌的生物防治研究开展的很少，除了本专利申请单位和申请者外，尚未见到国内外其它单位和作者从事深海微生物防控产毒真菌的研究报道，而产毒真菌的危害比非产毒真菌更加严重，不仅影响了作物生长，降低了产量，更重要的是产生能严重危害人类和动物健康的真菌毒素，如黄曲霉毒素，具有强毒性、致癌性、致畸性、免疫抑制性等，因此，产毒真菌的防控刻不容缓，是一个亟待解决的重大课题。
[0004]有效防控黄曲霉毒素等产毒真菌污染饲料和粮食的首选方法是抑毒，即抑制黄曲霉毒素等产毒真菌在饲料和粮食中的生长与毒素的产生，而不是除毒，即清除已经产生的黄曲霉毒素，因为除毒不仅成本大，效果也不理想，难以根除，并且一些清除毒素的物理和化学条件会导致饲料和粮食营养的损失。
【发明内容】
[0005]本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，本发明解决上述技术问题采用的技术方案是:一株抑制黄曲霉毒素的深海阿氏芽孢杆菌，其特征包括如下步骤:
(1)本发明所说的深海阿氏芽孢杆菌为阿氏芽孢杆菌ZL4菌株(BacillusaryabhattaiZL4 A并已于2015年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC N0.10661 ；
(2)本发明所说的ZL4菌株分离自南大西洋2796米水深的浅黄色钙质软泥沉积物，通过以下方法分离获得:新鲜的浅黄色钙质软泥经10倍系列稀释后，取100微升不同稀释度的稀释液涂布于改良PDA培养基，28度下恒温培养，及时挑取单菌落，并经进一步划线纯化，获得纯菌种ZL4菌株；
(3)本发明所说的ZL4菌株经16SrRNA基因分子鉴定为阿氏芽孢杆菌的一个新菌株，菌体呈杆状，可产生芽孢，革兰氏染色阳性；
(4)将本发明的深海阿氏芽孢杆菌ZL4菌株接种于适宜的发酵培养基中，在20-36°C温度下，振荡培养4-12天，即可得到含有高效活性物质的发酵液，可100%抑制黄曲霉毒素的合成。
[0006](5)本发明的ZL4菌株的发酵液中的活性物质具有良好的生物安全性，对大肠杆菌、产气杆菌等肠道菌群无抑制作用，对单细胞真菌酿酒酵母也没有抑制作用；
(6)本发明的深海阿氏芽孢杆菌ZL4菌株及其发酵液可应用于饲料、粮食、大田作物等的黄曲霉毒素污染的有效防控。
【具体实施方式】
[0007]下面结合实施例对本发明做进一步说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
[0008]实施例1:深海阿氏芽孢杆菌ZL4菌株的液体发酵
将新鲜的ZL4菌株的液体种子，按1%接种量接种到M培养基中，该培养基含有0.5%乙酸钠、0.05%蛋白胨、0.05%酵母膏、0.05%牛肉膏、0.05%葡萄糖、0.05%蔗糖、0.05%可溶性淀粉、0.005%柠檬酸三钠、0.005%苹果酸、0.005%酒石酸钾钠、0.1%硝酸铵、0.02%氯化铵，在25-30度、100-160转/分钟下培养4_8天，结束发酵，对发酵液进行离心，获得的无细胞上清液即是含有高效抑制黄曲霉毒素的活性物质的发酵液，能100%抑制黄曲霉毒素的产生，可直接用于防控黄曲霉毒素的污染，或者加工成干粉用于防控黄曲霉毒素的污染。
[0009]实施例2:深海阿氏芽孢杆菌ZL4菌株的发酵液抑制肠道菌群的活性
事先制作含有大肠杆菌或产气杆菌的营养平板，在平板中央和四周分别插入牛津杯，将实施例1获得的无细胞发酵上清液150微升，加入到牛津杯中，在4度低温下放置24小时后，将平板放入37度恒温培养箱中培养2-3天，检测牛津杯周围是否有抑菌圈的产生，结果显示在牛津杯周围没有抑菌圈产生，这表明深海阿氏芽孢杆菌ZL4菌株的发酵液对肠道菌群没有抑制作用，具有良好的生物安全性。
【主权项】
1.一株分离自南大西洋2796米水深的浅黄色钙质软泥沉积物的深海菌株，为阿氏芽抱杆菌ZL4菌株(Bacillus aryabhattai ZL4),已于2015年3月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC N0.10661。
【专利摘要】本发明提供一株可抑制黄曲霉毒素合成的深海细菌，为阿氏芽孢杆菌ZL4菌株<i>（</i><i>Bacillus？aryabhattai？</i>ZL4<i>）</i>，分离自南大西洋2796米水深的浅黄色钙质软泥沉积物，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC？No.10661。将菌株在筛选出的培养基中发酵，获得的发酵上清液可完全抑制黄曲霉毒素的合成，不会产生任何有毒中间产物，具有从毒素合成途径的源头抑制黄曲霉毒素产生的能力，但对肠道菌群和单细胞真菌酿酒酵母则无抑制作用。本发明的阿氏芽孢杆菌ZL4菌株及其发酵产物可用于饲料、粮食、大田作物等的黄曲霉毒素污染的有效防控。CGMCC No.1066120150324
【IPC分类】C12N1/20, C12R1/07
【公开号】CN105039197
【申请号】CN201510296912
【发明人】闫培生, 孙晓磊, 王凯, 邵宗泽, 苏聪, 史翠娟
【申请人】哈尔滨工业大学（威海）, 中国大洋矿产资源研究开发协会
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年6月3日