抗-il-33抗体及其用图
【专利说明】抗-1L-33抗体及其用途 发明领域
[0001] 本发明涉及对人IL-33具特异性的抗体、其抗原结合片段及其使用方法。
[0002] 背景
[0003] 白介素-33 (IL-33)为ST2的配体，一种与辅助蛋白IL-lRAcP(accessory protein)相关联的toll样/白介素-1受体超家族成员（就回顾文献，参见，例如Kakkar 和Lee，NatureReviews-DrugDiscovery7 (10) :827_840 (2008)，Schmitz等人，Immunity 23:479-490(2005);Liew等人，NatureReviews-Immunology10:103-110(2010); US2010/0260770;US2009/0041718)。当ST2/IL-lRAcP被IL-33 激活时，通过下游分子例 如MyD88 (髓样分化因子88)和TRAF6 (TNF受体相关因子6)触发信号传递级联，从而尤其 导致NFkB(核因子-kB)的激活。IL-33信号传递已意味着成为牵涉各种疾病和病症的因 子（Liew等人，NatureReviews-Immunology10:103-110(2010))。
[0004] 发明概述
[0005] 本发明提供结合人白介素-33("IL_33"）的抗体。本发明的抗体可尤其用于抑制 IL-33-介导的信号传递，并且用于治疗由IL-33活性和/或信号传递所造成或与其相关的 疾病和病症。
[0006] 本发明的抗体可为全长（例如，IgGl或IgG4抗体）或可仅包含抗原结合蛋白 (例如Fab、F(ab'）^scFv片段），并且可被修饰以影响功能性，例如消除残余效应子功能 (Reddy等人，2000,J.Immunol. 164 :1925-1933) 〇
[0007] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素-33结合的抗体为分离的全人单克隆抗 体。
[0008] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段抑制 或减弱IL-33-介导的信号传递。
[0009] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段阻断 IL-33和ST2的相互作用。
[0010] 在一个实施方案中，如以体外受体/配体结合测定在25°C下所测量，特异性地与 人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约10nM的IC5。值阻断IL-33和ST2的 相互作用，或阻断大于约50%的IL-33和ST2的相互作用。
[0011] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段不阻 断，或仅部分阻断IL-33和ST2的相互作用。
[0012] 在一个实施方案中，如以表面等离子体共振测定在37°C下所测量，特异性地与人 白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约InM的结合解离平衡常数（KD)结合人 IL-33〇
[0013] 在一个实施方案中，如以表面等离子体共振测定在37°C下所测量，特异性地与人 白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段以大于约8分钟的解离半衰期（tl/2)结合人 IL-33〇
[0014] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素_33结合的抗体或其抗原结合片段抑制 IL-33-介导的人嗜碱性粒细胞的脱粒作用。
[0015] 在一个实施方案中，如以体外嗜碱性粒细胞激活试验（BAT)所测量，特异性地与 人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约600pM的IC5。值抑制IL-33-介导的 人嗜碱性粒细胞的脱粒作用。
[0016] 在一个实施方案中，特异性地与人白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段抑制 IL-33-介导的IFN-y从人PBMC的产生。
[0017] 在一个实施方案中，如以体外PBMCIFN-y产生测定所测量，特异性地与人白介 素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约25nM的IC5。抑制IL-33-介导的IFN-y从 人PBMC的产生。
[0018] 在一个实施方案中，如以体外PBMCIFN-y产生测定所测量，特异性地与人白介 素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约3nM的IC5。抑制IL-33-介导的IFN-y从人 PBMC的产生。
[0019] 在一个实施方案中，如以体外PBMCIFN-y产生测定所测量，特异性地与人白介 素-33结合的抗体或其抗原结合片段以低于约0. 5nM的IC5。抑制IL-33-介导的IFN-y从 人PBMC的产生。
[0020] 在一个实施方案中，当施用于过敏原诱发的肺炎症的动物模型时，特异性地与人 白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段降低肺中CD4+T细胞、嗜酸性粒细胞和ILC2细胞 的出现频率。
[0021] 在一个实施方案中，当施用于过敏原诱发的肺炎症的动物模型时，特异性地与人 白介素-33结合的抗体或其抗原结合片段降低肺中IL-4和IL-5的量。
[0022] 在一个实施方案中，当施用于过敏原诱发的肺炎症的动物模型时，在与接受同种 型对照抗体的过敏原激发动物相比时，特异性地与人白介素-33结合的抗体或其抗原结合 片段造成IL-4的量至少4倍降低和/或IL-5的量至少5倍降低。
[0023] 本发明提供抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区（HCVR)，所述重链可变区 具有选自由下列组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、 162、178、194、210、226、242、258、274、290 和 308，或它的具有至少90%、至少95%、至少 98%或至少99%序列同一性的实质上类似序列。
[0024] 本发明还提供抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区（LCVR)的，所述轻链可 变区具有选自由下列组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:10、26、42、58、74、90、106、122、 138、154、170、186、202、218、234、250、266、282、298 和 316,或它的具有至少 90 %、至少 95%、至少98%或至少99%序列同一性的实质上类似序列。
[0025] 本发明还提供抗体或其抗原结合片段，其包含选自由下列组成的组的HCVR和 LCVR(HCVR/LCVR)序列对：SEQIDN0:2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250、 258/266、274/282、290/298 和 308/316。
[0026] 本发明还提供抗体或抗体的抗原结合片段，其包含具有选自由下列组成的组的氨 基酸序列的重链CDR3(HCDR3)结构域：SEQIDN0:8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、 168、184、200、216、232、248、264、280、296 和 314,或它的具有至少 90%，至少 95%，至少 98%或至少99%序列同一性的实质上类似序列；以及具有选自由下列组成的组的氨基酸 序列的轻链CDR3(LCDR3)结构域：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、 224、240、256、272、288、304和322，或它的具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99% 序列同一性的实质上类似序列。
[0027] 在某些实施方案中，抗体或抗体的抗原结合部分包含选自由下列组成的组的 HCDR3/LCDR3氨基酸序列对：SEQIDN0:8/16、24/32、40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、 120/128、136/144、152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、232/240、248/256、 264/272、280/288、296/304 和 314/322。
[0028] 本发明还提供抗体或其抗原结合片段，其还包含具有选自由下列组成的组的氨 基酸序列的重链CDRl(HCDRl)结构域：SEQIDN0:4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、 164、180、196、212、228、244、260、276、292 和310，或它的具有至少90%、至少95%、至少 98%或至少99%序列同一性的实质上类似序列；具有选自由下列组成的组的氨基酸序 列的重链CDR2(HCDR2)结构域：SEQIDN0:6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、 182、198、214、230、246、262、278、294 和312，或它的具有至少90%、至少95%、至少98% 或至少99 %序列同一性的实质上类似序列；具有选自由下列组成的组的氨基酸序列的 轻链CDRl(LCDRl)结构域：SEQIDN0:12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、 204、220、236、252、268、284、300和318，或它的具有至少90%、至少95%、至少98%或至 少99%序列同一性的实质上类似序列；以及具有选自由下列组成的组的氨基酸序列的轻 链CDR2(LCDR2)结构域：SEQIDN0:14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、 222、238、254、270、286、302和320，或它的具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99% 序列同一性的实质上类似序列。
[0029] 本发明的某些非限制性示例性抗体和其抗原结合片段包含HCD R1-HCDR2-HCDR3-IXDR1-IXDR2-IXDR3结构域，其分别具有选自由下列组成的组的氨 基酸序列：SEQIDN0:4-6-8-12-14-16(例如HlM9559N);20-22-24-28-30-32(例 如H1M9566N) ;36-38-40-44-46-48(例如H1M9568N) ;52-54-56-60-62-64(例如 H4H9629P) ;68-70-72-76-78-80(例如H4H9633P) ;84-86-88-92-94-96(例如H4H9640P); 100-102-104-108-110-112 (例如H4H9659P) ; 116-118-120-124-126-128 (例如H4H9660P); 132-134-136-140-142-144 (例如H4H9662P) ; 148-150-152-156-158-160 (例如H4H9663P); 164-166-168-172-174-176 (例如H4H9664P) ; 180-182-184-188-190-192 (例如H4H9665P); 196-198-200-204-206-208 (例如H4H9666P) ;212-214-216-220-222-224 (例如H4H9667P); 228-230-232-236-238-240 (例如H4H9670P) ;244-246-248-252-254-256 (例如H4H9671P); 260-262-264-268-270-272 (例如H4H9672P) ;276-278-280-284-286-288 (例如H4H9675P); 292-294-296-300-302-304 (例如H4H9676P);以及 310-312-314-318-320-322 (H1M9565N)。
[0030] 在相关的实施方案中，本发明包括特异性地与IL-33结合的抗体或抗体的抗原 结合片段，其中抗体或片段包含重链和轻链CDR结构域，所述结构域含在选自由下列组成 的组的重链和轻链可变区（HCVR/LCVR)序列内：SEQIDN0:2/10、18/26、34/42、50/58、 66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、 226/234、242/250、258/266、274/282、290/298 和 308/316。用于鉴别HCVR和LCVR氨基酸 序列内的CDR的方法和技术已为本领域所熟知并可用于鉴别文中所公开的特定HCVR和/ 或LCVR氨基酸序列内的⑶R。可用于鉴别⑶R边界的示例性常规方法包括例如Kabat定 义、Chothia定义和AbM定义。一般来说，Kabat定义以序列变异性为基础，Chothia定义以 结构环区的位置为基础，而AbM定义为Kabat方法与Chothia方法间的折衷方法。参见，例 如Kabat/'SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,NationalInstitutes ofHealth，Bethesda，Md. (1991) ;A1-Lazikani等人，J.Mol.Biol. 273 :927-948 (1997); 以及Martin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86 :9268-9272 (1989)。也可利用公开的数据 库供辨识抗体内的CDR序列。
[0031] 在另一方面中，本发明提供编码抗-IL-33抗体或其抗原结合片段的核酸。本发明 也涵盖带有本发明的核酸的重组表达载体，和已引入了这些载体的宿主细胞，以及通过在 允许产生抗体的条件下培养宿主细胞，并回收所产生的抗体来产生抗体的方法。
[0032] 在一个实施方案中，本发明提供包含HCVR的抗体或其片段，所述HCVR由选自由下 列组成的组的核酸序列所编码：SEQIDN0 :1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、161、177、 193、209、225、241、257、273、289和307,或它的具有至少90%、至少95%、至少98%或至少 99%同源性的实质上相同序列。
[0033] 本发明还提供包含LCVR的抗体或其片段，所述LCVR由选自由下列组成的组的核 酸序列所编码：SEQIDN0 :9、25、41、57、73、89、105、121、137、153、169、185、201、217、233、 249、265、281、297和315,或它的具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性的 实质上相同序列。
[0034] 本发明还提供抗体或抗体的抗原结合片段，其包含：HCDR3结构域，所述HCDR3结 构域由选自由下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :7、23、39、55、71、87、103、 119、135、151、167、183、199、215、231、247、263、279、295 和 313,或它的具有至少 90%、至少 95 %、至少98 %或至少99 %同源性的实质上相同序列；以及IXDR3结构域，所述IXDR3结 构域由选自由下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :15、31、47、63、79、95、111、 127、143、159、175、191、207、223、239、255、271、287、303 和 321，或它的具有至少 90%、至少 95%、至少98%或至少99%同源性的实质上相同序列。
[0035] 本发明还提供抗体或其抗原结合片段，其还包含：HCDR1结构域，所述HCDR1结构 域由选自由下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :3、19、35、51、67、83、99、115、 131、147、163、179、195、211、227、243、259、275、291 和 309,或它的具有至少 90 %、至少 95%、至少98%或至少99%同源性的实质上相同序列；HCDR2结构域，所述HCDR2结构域由 选自由下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :5、21、37、53、69、85、101、117、133、 149、165、181、197、213、229、245、261、277、293 和 311，或它的具有至少 90%、至少 95%、至 少98%或至少99%同源性的实质上相同序列；LCDR1结构域，所述LCDR1结构域由选自由 下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、 171、187、203、219、235、251、267、283、299 和317，或它的具有至少90%、至少95%、至少 98%或至少99%同源性的实质上相同序列；以及LCDR2结构域，所述LCDR2结构域由选自 由下列组成的组的核苷酸序列所编码：SEQIDN0 :13、29、45、61、77、93、109、125、141、157、 173、189、205、221、237、253、269、285、301和319，或它的具有至少90%、至少95%、至少 98 %或至少99%同源性的实质上相同序列。
[0036] 根据某些实施方案，抗体或其片段包含由下列核酸序列所编码的重链轻链CDR序 列和轻链CDR序列：SEQIDN0 :1 和 9(例如H1M9559N)、17 和 25(例如H1M9566N)、33 和 41 (例如H1M9568N)、49 和 57 (例如H4H9629P)、65 和 73 (例如H4H9633P)、81 和 89 (例 如H4H9640P)、97 和 105(例如H4H9659P)、113 和 121 (例如H4H9660P)、129 和 137(例 如H4H9662P)、145 和 153 (例如H4H9663P)、161 和 169 (例如H4H9664P)、177 和 185 (例 如H4H9665P)、193 和 201 (例如H4H9666P)、209 和 217 (例如H4H9667P)、225 和 233 (例 如H4H9670P)、241 和 249 (例如H4H9671P)、257 和 265 (例如H4H9672P)、273 和 281 (例如 H4H9675P)、289 和 297 (例如H4H9676P)或 307 和 315 (H1M9565N)。
[0037] 本发明包括具有修饰糖基化模式的抗-IL-33抗体。在一些应用中，移除不合需要 的糖基化位置的修饰作用，或寡糖链上缺乏岩藻糖部分存在的抗体可能为有用的，例如用 以增加抗体依赖性细胞毒性（ADCC)功能（参见Shield等人（2002)JBC277:26733)。在 其它应用中，可进行半乳糖基化的修饰作用以改变补体依赖性细胞毒性（CDC)。
[0038] 在另一方面，本发明提供药物组合物，其包含特异性地结合IL-33的重组人抗体 或其片段以及药学上可接受的载体。在相关方面中，本发明的特征为组合抗-IL-33抗体和 第二治疗剂的组合物。在一个实施方案中，第二治疗剂为有利地与抗-IL-33抗体组合的任 何试剂。可有利地与抗-IL-33抗体组合的示例性试剂包括而不限于抑制IL-33活性的其 它试剂（包括其它抗体或其抗原结合片段、肽抑制剂、小分子拮抗剂等）和/或不会直接结 合IL-33但会干扰、阻断或减弱IL-33介导的信号传递的试剂。在一个实施方案中，第二治 疗剂可选自由下列组成的组：非类固醇消炎药（NSAID)、皮质类固醇、支气管扩张剂、抗组 织胺、肾上腺素、去充血剂、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP)拮抗剂、IL-13拮抗剂、IL-4拮 抗剂、IL-4/IL-13双拮抗剂、IL-5拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-12/23双拮抗剂、IL-22拮抗剂、 IL-25拮抗剂、IL-17拮抗剂、IL-31拮抗剂、口服TOE4抑制剂和另一IL-33拮抗剂或IL-33 的不同抗体。
[0039] 在某些实施方案中，细胞因子拮抗剂可为小分子抑制剂（合成的或天然衍生），或 与细胞因子本身相互作用的蛋白（例如抗体），或细胞因子的受体，或包含细胞因子和其受 体的复合物（例如抗IL-4或IL-6的抗体，或IL-4或IL-6的受体的抗体）。涉及本发明 抗-IL-33抗体的另外的组合疗法和共配制剂公开本文中其它处。
[0040] 在另一方面，本发明提供使用本发明的抗-IL-33抗体或抗体的抗原结合部分来 抑制IL-33活性的治疗方法，其中所述治疗方法包括施用治疗有效量的包含本发明抗体或 抗体的抗原结合片段的药物组合物。所治疗的病症为通过移除、抑制或降低IL-33活性或 信号传递加来改善、缓解、抑制或预防的任何疾病或症状。本发明的抗-IL-33抗体或抗体 片段可起作用来阻断IL-33和IL-33结合搭档（例如IL-33受体组分）之间的相互作用， 或另外抑制IL-33的信号传递活性。
[0041] 在一个实施方案中，本发明提供用于治疗炎性疾病或病症或与炎性疾病或病症相 关联的至少一种症状的方法，所述方法包括向有需要的患者施用特异性地与IL-33结合的 抗体或其抗原结合片段，或包含特异性地与IL-33结合的抗体的药物组合物，其中所述炎 性疾病或病症的严重度、持续时间和/或发生频率得以减轻或减少，或与炎性疾病或病症 相关联的至少一种症状的严重度、持续时间和/或发生频率得以减轻或减少。
[0042] 在一个实施方案中，炎性疾病或症状选自由下列组成的组：哮喘、异位性皮炎、慢 性阻塞性肺疾病（C0PD)、炎性肠病、多发性硬化症、关节炎、过敏性鼻炎、嗜酸细胞性食道炎 和牛皮癣。
[0043] 在一个实施方案中，本发明提供用于治疗对过敏原显现敏感性的患者的方法，所 述方法包括向有需要的患者施用有效量的特异性地与IL-33结合的抗体或其抗原结合片 段，或包含特异性地与IL-33结合的抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其中所述患者 在施用抗体或包含抗体的组合物后，对过敏原显现降低的敏感性，或对过敏原减少的过敏 反应，或不会经历对过敏原的任何敏感或过敏（allergic)反应，或过敏性（anaphylactic) 反应。
[0044] 在一个实施方案中，本发明提供用于施用有效量的第二治疗剂，所述第二治疗剂 适用于减轻炎性疾病或病症或炎性疾病或病症的至少一种症状，或减少对过敏原的过敏反 应。如上所述，第二治疗剂可选自由下列组成的组：非类固醇消炎药（NSAID)、皮质类固醇、 支气管扩张剂、抗组织胺、肾上腺素、去充血剂、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP)拮抗剂、 IL-13拮抗剂、IL-4拮抗剂、IL-5拮抗剂、IL-6拮抗剂、IL-25拮抗剂、IL-17拮抗剂及另一 IL-33拮抗剂，或IL-33的不同抗体。
[0045] 在相关方面中，本发明提供本发明的抗IL-33抗体或其抗原结合片段，或包含 抗体或其抗原结合片段的药物组合物，其适用于治疗患者的与IL-33活性有关或由所述 IL-33活性所造成的疾病或病症。在一个实施方案中，患者的与IL-33活性有关或由所述 IL-33活性所造成的疾病或病症为炎性疾病或病症，其中所述炎性疾病或病症选自由下列 组成的组：哮喘、异位性皮炎、慢性阻塞性肺疾病（C0PD)、炎性肠病、多发性硬化症、关节 炎、过敏性鼻炎、嗜酸细胞性食道炎和牛皮癣。
[0046] 本发明还包括本发明的抗-IL-33抗体或抗体的抗原结合部分用于制造药物供治 疗患者的与IL-33活性有关或由所述IL-33活性所造成的疾病或病症的用途。在一个实施 方案中，患者的与IL-33活性有关或由所述IL-33活性所造成的疾病或病症为炎性疾病或 病症，其中所述炎性疾病或病症选自由下列组成的组：哮喘、异位性皮炎、慢性阻塞性肺疾 病（C0PD)、炎性肠病、多发性硬化症、关节炎、过敏性鼻炎、嗜酸细胞性食道炎和牛皮癣。 [0047] 根据确认详述的论述，其它的实施方案将变得显而易见。
[0048] 附