一种氨基酸序列及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种氨基酸序列，尤其涉及一种用于检测巨细胞病毒的氨基酸序列、 以及所述氨基酸序列的应用。
【背景技术】
[0002] 人巨细胞病毒（humancytomegalovirus，HCMV)属于孢瘆病毒科，是人类疱瘆病毒 组中最大的一种病毒，可引起人类巨细胞病毒感染。HCMV在人群中普遍易感，成人对HCMV 的感染率高达90%以上，通常无明显症状，潜伏在宿主细胞中，为隐性感染，而在免疫功能 低下或缺陷时，如妊娠、多次输血、移植受者（HCMV病毒感染也是器官移植失败的主要原因 之一）、艾滋病患者等，常呈激发感染（显性感染），病毒可侵袭多个器官和系统，引起严重 疾病，严重者可致死亡。因此，早期监测HCMV潜伏、激活感染状态，对于免疫功能低下患者 至关重要。
[0003] 然而由于HCMV病毒在人体内感染的普遍存在，通常潜伏在宿主细胞中不引起明 显症状，给HCMV激活感染的诊断带来很大困难。目前HCMV感染诊断方法主要有：
[0004] 1)分尚培养
[0005] 用临床标本进行体外分离培养，是目前诊断HCMV感染最可靠的方法，被认为是检 测HCMV感染状态的金标准。该方法将检测标本（血液、尿液、唾液、腹水、脐血、脑脊液、气 管灌洗液等）接种于成纤维细胞，出现细胞病变即为阳性。但是由于HCMV病毒体外增殖缓 慢，初次分离至少需一个月才能使检测细胞出现病变，实验周期长、易污染，且无法与其他 病毒感染区分、对于经药物治疗后的标本病毒分离常为阴性结果，因而临床应用受限，现主 要应用于科研。
[0006] 2)病毒抗原学检测
[0007] 目前主要应用的是pp65抗原血症检测法，当HCMV激活感染时，PP65抗原于6~ 24小时内表达于外周血淋巴细胞、单核细胞、多形核白细胞和血管内皮细胞中，是HCMV活 动性感染的早期诊断诊断标志物，但是由于存在假阳性、假阴性结果，该方法目前还存在争 议。
[0008] 3)血清学检测抗体
[0009]特异性抗体检测主要是检测HCMV感染后刺激机体产生的抗巨细胞病毒IgM和IgG抗体。抗HCMVIgG抗体多份血清检测可用于HCMV临床诊断，血清IgG抗体阳性转化表明 是原发感染，而连续监测IgG滴度急剧升高表明存在HCMV活动性感染，但是HCMV成人感染 率极高，IgG大多数人为阳性，检测意义不大；血清抗HCMV特异性IgM抗体检测，因其抗体 存在时间短，诊出阳性率较低，另外Bendiksen等人研究发现，IgM水平与病毒复制无关，因 此IgM也不能潜伏、激发感染诊断的良好指标。
[0010] 4)核酸杂交、原位杂交检测
[0011] 目前对于HCMV的测序已经完成，大大促进了核酸杂交技术在HCMV诊断中的应用。 采用该方法能直接在感染组织中发现包涵体，较传统的免疫组织化学方法更为灵敏、特异。 但是由于方法学上的特殊性，完成全过程受诸多因素的影响，包括：标本处理时间，固定剂 的选择，单克隆抗体细胞株的特异性等，另外该方法对镜检人员技术要求较高，方法上难以 实现高通量检测，抗污染能力不强，成本过高，目前难以普及。
[0012] 5)PCR方法
[0013] PCR方法检测HCMV，灵敏度为0. 15fg，敏感度和特异度较高，可以实现对病毒检测 的量化，在检测病毒活动性、评价抗病毒疗效等方面具有重要的意义。
[0014] 从目前PCR检测结果来看，单用一对PCR引物可引起假阴性，主要原因可能是临床 标本中HCMV病毒株的不同、或者病毒基因组中极小变异、以及病毒拷贝数太低所致。此外， 引物设计序列针对HCMV同一基因的不同部位，PCR结果也有明显差异，方法还需标准化，目 前市场上还没有商品化的HCMV的PCR诊断试剂盒。
【发明内容】
[0015] 本发明设计合成了一种氨基酸序列，可用于测定病人外周血中具有保护性CMV特 异CD8+T细胞数量的临床界限，监测评估机体内感染的CMV再激活及致病的可能。
[0016] 应当理解的是，本发明下文中，氨基酸序列与多肽或多肽序列具有相同的含义。
[0017] 本发明的第一个方面提供了一种氨基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQIDNo. 1 所示序列。
[0018] SEQIDNo.I：LysMetMetTyrMetCysTyrArgAsnIle〇
[0019] 下文中，SEQIDNo.I也可以简写为：KMMYMCYRNI。
[0020] 本发明上述内容中，所述氨基酸序列优选为SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚体中 的任意一种或几种。
[0021] 其中，所述多聚体优选地可以是二聚体、三聚体、四聚体或更多聚体。
[0022] 本发明第二个方面是提供一种氨基酸序列在制备检测巨细胞病毒试剂中的应用， 所述氨基酸序列包括SEQIDNo. 1所示序列。
[0023] 本发明上述内容中，所述氨基酸序列优选为SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚体中 的任意一种或几种。
[0024] 其中，所述多聚体优选地可以是二聚体、三聚体、四聚体或更多聚体。
[0025] 本发明第三个方面是提供一种检测巨细胞病毒的试剂盒，所述试剂盒包括一种氨 基酸序列，所述氨基酸序列包括SEQIDNo. 1所示序列。
[0026] 本发明上述内容中，所述氨基酸序列优选为SEQIDNo. 1所示序列、及其多聚体中 的任意一种或几种。
[0027] 其中，所述多聚体优选地可以是二聚体、三聚体、四聚体或更多聚体。
[0028] 在本发明第三个方面的一种优选实施例中，所述试剂盒还可以包括荧光标记。
[0029] 其中，所述荧光标记可以是荧光素、放射性核素、酶、化学发光物质、金属颗粒中的 任意一种或几种。
[0030] 所述荧光素的例子包括FITC、RB200、TRITC中的任意一种或几种。
[0031] 所述放射性核素的例子包括3H、14C、32P、125I、131I中的任意一种或几种。
[0032] 所述酶的例子包括HRP、AP中的任意一种或几种。
[0033] 更优选地，所述荧光标记为荧光素。
[0034] 在本发明第三个方面的一种优选实施例中，所述试剂盒还可以包括HLA基因表位 多肽、及其多聚体中的任意一种或几种。
[0035] 在本发明第三个方面的一种优选实施例中，