一种熊果酸-阿司匹林偶联物及其在制备预防肿瘤转移中药物的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种熊果酸-阿司匹林偶联物及其应用，具体说是一种熊果酸-阿司 匹林偶联物及其在制备预防和治疗肿瘤转移药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤是严重危害人类健康的重大疾病之一，肿瘤患者死亡原因大多为恶性肿 瘤晚期转移所致。肿瘤转移（Cancermetastasis)是指肿瘤细胞从原发瘤游离，向周围组 织浸润、侵袭进入循环系统并随之在体内转移，并且与内皮细胞粘附浸润形成转移瘤等过 程。肿瘤转移是肿瘤难以治愈和复发的主要原因之一，也是导致肿瘤患者死亡的关键因素。 临床诊断结果显示，约60%以上的初诊肿瘤患者已经发生转移，其5年生存率不到20%。目 前，只有极少数的肿瘤转移患者能够通过手术进行有效治疗，而其他临床治疗方式效果非 常有限。因此，肿瘤转移的防治面临着非常严峻的挑战，如何阻断肿瘤的浸润转移是提高肿 瘤治疗水平及治愈肿瘤的关键。
[0003]目前临床使用抗肿瘤药物绝大数为化疗药物，这些药物能作用在肿瘤细胞生长繁 殖的不同环节上，抑制或杀死肿瘤细胞。化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时，又杀伤正常组织 的细胞，尤其是杀伤人体中生长发育旺盛的血液、淋巴组织细胞等，而这些细胞与组织是人 体重要的免疫防御系统，破坏了人体的免疫系统，癌症就可能迅速发展，造成严重后果。化 疗药物大多缺乏选择性，体内分布广泛，易引发毒副作用，导致患者不能耐受，降低药物疗 效。因此，近年来人们一直致力于新型抗肿瘤药物的研究，其中有效抑制肿瘤细胞转移的药 物是一个新的药物开发方向。
[0004] 熊果酸（UrsolicAcid，简称UA)，又名乌索酸、是一种天然来源a-香树脂醇型五 环三萜类化合物。据不完全统计，在自然界中的34科108种植物中都能够分离得到UA，其 主要分布在女贞子、山楂、车前草、连翘等药用的植物中。UA具有广泛的药理学活性，如抗 癌、保肝、抗炎、抗病毒、抗氧化等。如今，UA正以其显著高效低毒的特点及多样化的抗癌作 用机制日益受到人们重视。另一方面，UA具有较好的保肝抗炎功效，并可增强机体免疫功 能。从而能够克服常规化疗药物毒性大、安全系数低的局限，在治疗的同时副作用小、毒性 低。近年来国内外对UA的抗肿瘤研究日趋深入，并发现其在肿瘤预防、治疗以及防止晚期 复发转移等方面有着独特的优势及潜在的应用前景。
[0005] 阿司匹林（Aspirin，简称ASP)作为解热镇痛消炎药，预防肿瘤转移药的效果已 得到充分证明，炎症对于肿瘤的生长、转移都有明显的促进作用，同时会降低人的自身免疫 力。某些炎症因子还会促进血管生成，阿司匹林则可以通过降低炎症反应而抑制肿瘤转移。 同时其还可以抑制C0X-2酶的活性，而C0X-2酶具有促进血管生成，使肿瘤细胞凋亡和增 殖的平衡被打破，促进肿瘤细胞对基底膜的侵袭和浸润，并同时降低患者的免疫力。在新发 表的《柳叶刀》文章中再次提及了肿瘤转移和血小板的关系，并表明血小板在肿瘤细胞处的 凝聚会使血液中循环肿瘤细胞避免被机体的免疫细胞消灭，同时诱导肿瘤细胞变得更具侵 袭性。阿司匹林具有抑制血小板聚集的作用，对于抑制肿瘤转移也有一定的疗效。因此阿 司匹林作为传统的C0X-2酶的抑制剂和抗血小板聚集药物能够有效的降低其活性而达到 良好的预防肿瘤转移的效果。
【发明内容】
[0006] 针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种具有预防肿 瘤转移活性的化合物，通过将具有抗肿瘤转移作用的临床应用药物阿司匹林与高效低毒的 抗肿瘤天然产物熊果酸进行共价偶联，考察其联合增效作用，可望获得较为安全可靠的抑 制肿瘤细胞转移的新型防治肿瘤转移候选药物。
[0007] 本发明涉及一种如式（I)所示的熊果酸-阿司匹林偶联物(之后简写为ASP-UA)及 其在制备预防和治疗肿瘤转移药物中的应用。
[0008]
[0009] 该偶联物的制备方法如下： 室温下，将乙酰水杨酸(阿司匹林)溶于干燥的二氯甲烷，加入草酰氯，搅拌l〇h，减压蒸 除气体和溶剂。重新加入二氯甲烷，溶液通过恒压漏斗向溶有熊果酸和DMAP的吡啶：二氯 甲烷（lv/lv)混合溶液中滴加，滴加完成后继续搅拌8-10h。反应完全后，减压蒸除二氯甲 烷。向反应瓶中加入水析出产物，抽滤，并用水洗滤饼至中性，真空干燥，柱层析得该偶联 物。
[0010] 上述熊果酸-阿司匹林偶联物在抗肿瘤转移的应用中，所述肿瘤包括但不限于乳 腺癌。
[0011] 上述应用中，该偶联物在预防肿瘤转移药物中的含量大于等于50%。
[0012] 上述应用中，该偶联物可与药学上可接受的载体共同制成各种剂型：散剂、片剂、 颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、粉针、乳剂、脂质体、混悬剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂、气溶胶、粉雾 剂、洗剂、搽剂、软膏剂、硬膏剂、糊剂、贴剂、栓剂、滴剂或滴丸剂，在治疗上也可通过各种给 药方式实现：口服给药、注射给药、呼吸道给药、皮肤给药、粘膜给药、腔道给药等。
[0013] 本发明的有益效果： (1) .偶联物在低浓度范围内对肿瘤细胞毒性较小，是一种潜在的高效低毒的抗肿瘤 转移药； (2) .偶联物能抑制肿瘤细胞与细胞外基质的粘附； (3) .偶联物能抑制肿瘤细胞的运动迀移能力； (4) .偶联物能抑制肿瘤细胞的侵袭能力； (5) .偶联物能抑制肿瘤细胞表面粘附分子的表达； (6) .偶联物能防治乳腺癌发生肺部转移。
【附图说明】
[0014] 图1偶联物ASP-UA的红外表征图谱； 图2药物对乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用； 图3药物干预乳腺癌细胞MCF-7与FN细胞基质胶的粘附能力； 图4药物对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响； 图5A和图5B药物对乳腺癌细胞MCF-7表面粘附因子CD44表达的影响； 图6药物抑制小鼠4T1乳腺癌的实验性肺转移。
【具体实施方式】
[0015] 为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0016] 实施例1 室温下，0.5g乙酰水杨酸(阿司匹林)溶于20mL干燥的二氯甲烷，加入2mL草酰氯， 磁力搅拌l〇h，减压蒸除气体和溶剂。重新向反应瓶中加入20mL二氯甲烷，通过恒压漏斗 向溶有1. 27g熊果酸和0.leqDMAP的20mLlv/lv吡啶：二氯甲烷混合溶液中滴加，滴加 完成后继续搅拌8-10h。反应完全后，减压蒸除二氯甲烷。向反应瓶中加入100mL水析出 产物，抽滤，用500mL水洗滤饼至中性，真空干燥，柱层析得ASP-UA. 性状：白色粉末；产率：70. 51% ;产物表征数据如下：1HNMR(500MHz,⑶C13) 8 10.52 (s, 1H), 7.93 (dd,J= 8.0, 1.6 Hz, 1H), 7.55 - 7.50 (m, 1H), 7.01 (t, J= 6. 5Hz, 1H), 6.94 (t,J= 7.6Hz, 1H), 5.37 - 5.22 (m, 1H), 4.59 - 4.44 (m, 1H), 2.33 (d,J= 4. 3Hz, 1H), 2.29 (s, 1H), 2.22 (d,J= 11. 3Hz, 1H), 2.03 (dd,J= 13.4, 4.3Hz, 1H), 1.91 (ddd,J= 18.0, 11.2, 4.0 Hz, 3H), 1.80 -1.61 (m, 6H), 1.50 (ddd, J= 20.6, 12.6, 5.9Hz, 4H), 1.43 - 1.30 (m, 4H), 1.17 - 1.06 (m, 5H), 1.03 (dd,J= 10.4, 7.4Hz, 1H), 1.00 - 0.94 (m, 6H), 0.86 (ddd,J= 27.8, 20.2, 13. 5Hz, 13H). HRMS:理论值：641. 3813m/z实际值：641. 3820m/zDiff:_1. 21ppm红外表征结果见图1。
[0017] 实施例2 将处于对数生长期的小鼠乳腺癌细胞MCF-7消化后，细胞密度调整为1X105个/mL，接 种于96孔板，每孔100W，置37°C，5%C02培养箱中培养24h;移去旧的培养基，加入受 试药物用培养基将受试药物存储液稀释，设定不同的浓度，每孔100W，另设空白对照组，每 组设5个复孔。药物作用24h后，吸弃含药培养基，于每孔中加入无血.无酚红1640培养基 1001^1，再加入〇. 5mg/mlMTT的溶液100W，继续孵育4h后，终止培养；小心吸弃96孔 板孔内上清液，每孔加入lOOWDSM0,振荡lOmin