一种氯霉素分子印迹聚合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分子印迹聚合物制备技术领域，具体设计一种氯霉素分子印迹聚合物 及其制备方法。
【背景技术】
[0002]近年来，世界各国越来越关注和重视食品安全卫生，动物源食品中的兽药残留问 题在食品安全问题在食品安全卫生方面占有重要地位。兽药的污染事件一般涉及面广，社 会影响大，经济损失严重。在国际贸易中已经成为发达国家对第三世界国家实施技术壁皇 的重要手段。为保护人民的生命安全与健康，打破欧美等发达国家的技术壁皇，除了加强兽 药使用管理和动物养殖方式外，研究先进的兽药残留检测技术是必由之路。
[0003] 氯霉素（chloramphenicol,CAP)是由委内瑞拉链丝菌产牛的一种抗生素。它的化 学结构中含有对硝基苯基、丙二醇与二氯乙酰胺三个部分，分子中还含有氯。它是一种白色 针状或微带黄绿色的针状、长片状结晶或结晶性粉末，味苦。在甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇中 易溶。在干燥时稳定，在弱酸性和中性溶液中较安定，煮沸也不见分解，但遇碱类易失效。 CAP作为一种光谱抗菌药应用到今天已经有五十多年了，它也是国际是第一个被禁止用于 食用性动物饲料的抗生素，它能导致人体产生严重的再生障碍性贫血和致命的"灰婴综合 症"，因此，国际上规定CAP在动物源性食品中的最大允许残留量为0。TAP和FF作为CAPs 抗生素，国外已经开始部分代替CAP应用于养殖业。CAP，TAP和FF的化学性质都很稳定，在 曾经用药的食用性动物组织中很容易产生药物残留。但是目前各国对动物源性食品中CAP 的检测低限在0. 1-0. 3yg/kg，已经达到仪器的检测极限，而对于TAP和FF的检测的灵敏度 业不够高，加上生物样品基质复杂，所需提取净化步骤多，对CAPs的测定不但昂贵，而且特 别繁琐费时。因此，目前的检测方法并不能完全达到对CAP实行严格快速监控的需要。TAP 和FF作为CAP的替代兽药，对其加快开发灵敏度高，检测限低的确证方法也迫在眉睫。
[0004] 目前生物制品或动物源性食品的前处理基本都采用非特异性固相萃取柱，由于其 选择性较低，样品提取液的成分依然十分复杂，不但对后续检测仪器的要求较高，而且对色 谱柱和检测器的损耗都较大。而如果采用能够选择性地从复杂样品中吸附烙印分子或同烙 印分子结构结构相近的某一族化合物的MIPS作为吸附材料，则可以分离复杂生物样品中 痕量的检测物，降低检测低限，提高分析方法的精密度和灵敏度。在大型精密仪器难以和发 达国家相比的情况下，提高样品前处理的水平，减少杂质干扰，不失为提高检测方法灵敏度 的一条有效途径，但是目前对于这方面的研究国内报道极少。
【发明内容】
[0005] 本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种对氯霉素高选择性 吸附的氯霉素分子印迹聚合物及其制备方法。
[0006] 本发明具体通过以下技术方案实现： 本发明氯霉素分子印迹聚合物，以氯霉素为模板分子，以甲基丙烯酸为功能单体，形成 主客体配合物，加入交联剂EDMA发生自由基共聚，最后用溶剂甲醇/乙酸混合液将聚合物 从溶剂中沉淀出来，得到氯霉素分子印迹聚合物。
[0007] 本发明所述的氯霉素分子印迹聚合物具体通过以下方法制备： 1) 准确称取CAP于适量的致孔剂中，充分振荡使其溶解，然后加入功能单体甲基丙烯 酸（MAA)，于振荡器中充分振荡使其完全反应； 2) 继续加入交联剂EDMA和引发剂偶氮二异丁腈（AIBN)，充分混匀后移入安培瓶中，使 用超声波处理5min，使不存在可见固体颗粒存在，然后充氮10~15分钟； 3) 在酒精喷灯高温下把安培瓶拉丝密封，置于恒温水浴锅中在恒定的温度下热聚合反 应完全后，制得块状聚合物； 4) 将制得的块状聚合物用甲醇洗去未反应的试剂，放置晾干，研钵磨碎，置于甲醇/乙 酸混合液中，超声洗脱，得到氯霉素分子印迹聚合物。
[0008] 进一步，所述的致孔剂为四氢呋喃，所述的CAP与甲基丙烯酸的摩尔比为1:0. 5。 [0009]进一步，所述的交联剂的加入量为CAP与交联剂的摩尔比为1:20。
[0010]进一步，所述的恒温水浴锅的温度为60°C。
[0011] 进一步，所述的甲醇/乙酸混合液中甲醇和乙酸的体积比为9:1。
[0012] 本发明的有益效果为：本发明是以甲基丙烯酸为功能单体，以EDMA为交联剂、四 氢呋喃为致孔剂、偶氮二异丁腈为引发剂，并按照特定比例及生产条件等，生产出具有非常 高的选择性和特异性的氯霉素分子印迹聚合物，有较高的稳定性、较长的使用寿命和较强 的抗恶劣环境能力。本发明成本低廉、操作简单、反应条件容易控制。
【附图说明】
[0013] 图1是索氏抽提法抽提时间与CAP总量的关系； 图2是超声波提取法提取时间对抽提总量的影响； 图3是密闭微波抽提法时间对抽提总量的影响； 图4是致孔剂对MIPs的结合能力的影响； 图5是烙印分子与功能单体的摩尔比对MIPs的结合能力的影响作用； 图6是烙印分子与交联剂的摩尔比对MIPs的结合能力的影响作用； 图7是聚合温度对MIPs的结合能力的影响作用。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据本发明 的技术实质对以下实施例所做的任何简单修改或等同变化，均落在本发明的保护范围内。
[0015] 本发明提供了一种氯霉素分子印迹聚合物，以氯霉素为模板分子，以甲基丙烯酸 为功能单体，形成主客体配合物，加入交联剂EDMA发生自由基共聚，最后用溶剂甲醇/乙酸 混合液将聚合物从溶剂中沉淀出来，得到氯霉素分子印迹聚合物。其中CAP与甲基丙烯酸 与EDMA的摩尔比为1:0. 5:20。
[0016] 具体通过以下方法制备： 准确称取一定量的CAP于适量的致孔剂中，充分振荡使其溶解，然后按照特定的摩尔 比例加如功能单体甲基丙烯酸（MAA)，于振荡器中充分振荡使其完全反应，再按适宜的摩尔 比加入交联剂EDMA和引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)，充分混匀后移入安培瓶中，使用超声波 处理5min，使不存在可见固体颗粒存在，然后充氮10~15分钟，尽可能完全赶去空气(氧 气)。在酒精喷灯高温下把安培瓶拉丝密封，然后置于恒温水浴锅中在恒定的温度下热聚合 反应完全后，制得块状聚合物。讲制得的块状聚合物用甲醇洗去为反应的试剂，放置晾干， 研钵磨碎，。
[0017] 称取相同量的聚合物粉末放入具塞锥形瓶中，加入一定量甲醇/乙酸（9:1)，放入 超声波中震荡，得到氯霉素分子印迹聚合物。
[0018] 实施例1氯霉素分子印迹聚合物中氯霉素的去除方法的研究 1)索氏抽提法 将以甲基丙烯酸（MAA)为功能单体，EDMA为交联剂，AIBN为引发剂，采用热聚合方式制 备的CAP含量为1.296g的MIPs放入索氏抽提器的抽提室中，加入150mL甲醇，调节恒温 水浴槽的温度，使得抽提室中的甲醇每45min抽空一次，每隔4小时取50uL抽提液，测定 其中CAP的含量，并计算CAP的总提取量。
[0019] 另将同样方法制备的相同重量的MIPs放入另一索氏抽提器中，以乙腈作为抽提 液，同样方法测定其中CAP的含量和计算CAP的总提取量。
[0020] 表1抽提时间与CAP总量的关系
从图1可见\以乙腈和甲醇两种有机溶剂分别作为抽提液时，抽提效果不同。以乙腈作 为抽提液时，CAP的提取速度较快，72小时左右，基本可达到CAP抽提完全；而以甲醇作为 抽提液时，CAP的提取速度相对较慢，104小时左右才可达到CAP抽提完全的目的。因此在 MIPs的制备中，对于烙印分子的提取，应根据烙印分子、功能单体及聚合条件的不同，采用 合适的溶剂作为索氏抽提液，以缩短抽提时间，获得较好的抽提效果。
[0021] 2)超声波提取法 称取1.000gMIPs颗粒于150mL具塞三角瓶中，加入50mL甲醇/乙酸（9:l，v/V)， 在超声波作用下连续萃取10次，每30min更换一次萃取液。萃取液置于50mL容量瓶中， 用甲醇/乙酸定容至刻度，精确量取0. 5mL于10mL容量瓶中并定容，测得溶液中CAP的 含量，并算出总的CAP的量。
[0022] 表2时间对抽提总量的影响
由图2可知，在超声波作用下，聚合物中的模板分子CAP很快的就被洗脱出来，在60min左右基本上就可以完全抽提出来，大大减少了抽提时间，较索氏抽提法更省时省力，有效的 节省了实验试剂，算是可取的一种有效的抽提方法。
[0023] 3 )密闭微波抽提法 将收集到得聚合物粉末称取1. 0355g小烧杯中，用甲醇/乙酸（v/v，9:1)作为溶剂， 取溶剂25mL于小烧杯中将其溶解，转入反应罐中，密闭微波的压强设置为0.9Mpa.时间 为5min，待冷却后离心过滤，将萃取液置于25mL容量瓶中，用甲醇/乙酸定容至刻度，精 确量取〇. 5mL于10mL容量瓶中并定容，测定其CAP的含量。并计算CAP的总提取量。
[0024] 表3时间对抽提总量的影响
由图3可知，在0~15min内，CAP提取总量随着时间增长而增加，当微波波处理时间超 过15min后，随着时间的延长，CAP的提取总量不再有多大变化，这表明，随着时间的延长， CAP已经基本抽提完。因此选择15min为最佳处理时间。
[0025] 比较以上3种抽提方法的抽提时间与抽提总量的关系可以发现，索氏抽取法抽取 时间太长，而