一种改进的9k固体培养基制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种改进的9k固体培养基制备方法。
【背景技术】
[0002] 氧化亚铁硫杆菌是最重要的脱硫微生物之一，以氧化二价铁、元素硫以及还原态 硫化物等获得能量，同时实现脱硫，有非常重要的应用价值。9k固体培养基是氧化亚铁硫杆 菌分离、培养和保存最常用的培养基。但在该培养基的原制备方法中，盐溶液（A液）和琼 脂溶液（B液）分别湿热灭菌，温度降至60°C左右时将A、B液混合均匀，由于琼脂溶液的存 在，两者混合均匀并不易进行，需要一定的控制力度，力度不足会导致A、B液混合不均匀， 影响培养基的凝固时间、质量和强度，致使细菌划线、涂布等操作失败；而力度过大又会使 培养基溶液出现泡沫，形成固体培养基后影响菌落生长。此外，培养基溶液混合必须在足够 短的时间内完成，以避免琼脂凝固影响混匀过程。因此，现有9k固体培养基制备方法存在 明显不足，严重影响氧化亚铁硫杆菌的分离和培养效率，故有必要对现有9k固体培养基的 制备方法进行改进。
【发明内容】
[0003] 本发明旨在改进9k固体培养基的制备方法，提高9k固体培养基的质量，以解决9k 固体培养基制备不易操作和培养基质量不稳定的问题。
[0004] 本发明的技术方案为：改进的9k固体培养基配方由A、B两部分组成，A:(NH4)2S04 3. 0g，KH2P04 0? 5g，KC1 0?lg，MgS04 ?H20 0? 5g，Ca(N03)2 ? 2H20 0?Olg，琼脂 18. 0g，溶于 900mL蒸馏水，混合均匀，用NaOH溶液调节pH至7. 0;B:FeS04 ? 7H20 44. 2g溶于lOOmL蒸 馏水。将A溶液于121°C湿热灭菌15min，B过滤除菌，待A冷却至60°C左右在无菌条件下 加入3mL无菌稀硫酸溶液（体积分数5. 5% )，然后将A、B混合，用灭菌玻璃棒轻轻搅拌使 其混合均匀，倒入培养皿，凝固后即可得到质量较好、pH为2. 0的9k固体培养基。
[0005] 本发明取得的技术进步是：
[0006] 1、本发明在湿热灭菌前将琼脂与盐溶液直接混合，经过灭菌过程两种溶液混合极 为均匀，避免了两者分别灭菌再混合时力度不易控制的问题。此外，本发明将用于调节培养 基pH的稀H2S04溶液与A、B液混合均勾，要比原方法中将琼脂溶液与A、C液混合均匀要容 易进行得多。因此，改进后的方法大大提高了 9k固体培养基的制备成功率（100% )，而原 制备方法的成功率仅为75 %，且伴有培养基质量不高的问题。
[0007] 2、本发明的9k固体培养基质量、弹性和承力强度明显高于原制备方法，非常适用 于微生物划线、涂布等操作，不必担心固体培养基被划破的问题。
[0008] 3、本发明的9k固体培养基更有助于氧化亚铁硫杆菌的生长和菌落的形成，菌落 形成时间比原方法缩短33. 3%。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1 :按照改进后的方法制备培养基，高质量9k固体培养基的成功率为 100%，培养基弹性、承力强度都较好，且平板中鲜有泡沫出现；
[0010] 按照原方法制备9k固体培养基
[0011] A： (NH4)2S04 3. 0g,KH2P04 0. 5g,KC1 0.lg,MgS04 ?H20 0. 5g,Ca(N03)2 ? 2H20 〇. 〇lg，溶于650mL蒸馏水，用1:1硫酸溶液调节pH至2. 0 ;
[0012] B:琼脂18. 0g，溶于250mL蒸馏水，用1:1硫酸溶液调节pH至7. 0 ;
[0013] C:FeS04 ? 7H20 44. 2g，溶于 100mL蒸馏水。
[0014] 将A、B液分别121°C15min高压蒸汽灭菌，C过滤除菌，待A和B液冷却至60°C左 右与C液共同混合均匀，倒入培养皿，获得固体培养基的成功率为75%，且常遇到固体培养 基有泡沫、承力强度较低的问题，导致划线、涂布操作失败。
[0015] 实施例2:将本发明的9k固体培养基和原方法制备的固体培养基分别切成面积 lcmXlcm、2cmX2cm、3cmX3cm，厚度为2mm的立方体，用重力法分别测定受力值，平行测定 6次，受力均值见表1。
[0016] 表1两种方法配制的9k固体培养基受力均值比较
[0017]
[0018] 实施例3 :将分离出的氧化亚铁硫杆菌菌液取适量均匀涂布在本发明的9k固体培 养基平板上，置于30°C恒温培养箱中进行培养，10d左右长出肉眼可见菌落。
[0019] 将同样的氧化亚铁硫杆菌菌液取适量均匀涂布在原方法制备的9k固体培养基平 板上，置于30°C恒温培养箱中进行培养，15d左右长出肉眼可见菌落。可见，从菌落形成时 间来看，本发明的9k培养基比原方法缩短了 33. 3 %。
【主权项】
1.本发明的技术方案为：改进后的9k固体培养基配方由A、B两部分组成，A: (NH4) 2S043. Og，KH2PO4O. 5g，KCl 0? lg，MgSO4 ? H2O 0? 5g，Ca(NO3)2 ? 2H20 0? Olg，琼月旨 18. Og， 溶于900mL蒸馏水，混合均匀，用NaOH溶液调节pH至7. 0 ;B :FeS04.7H20 44. 2g溶于IOOmL 蒸馏水。将A溶液于121°C湿热灭菌15min，B过滤除菌，待A冷却至60°C左右在无菌条件 下加入3mL无菌稀硫酸溶液（体积分数5. 5 % )，然后将A、B混合，用灭菌玻璃棒轻轻搅拌 使其混合均匀，倒入培养皿，凝固后即可得到质量较好、PH为2. 0的9k固体培养基。
【专利摘要】本发明旨在改进9k固体培养基的制备方法，提高9k固体培养基的质量，以解决9k固体培养基制备不易操作和培养基质量不稳定的问题。本发明的技术方案为：改进后的9k固体培养基配方由A、B两部分组成，A：(NH4)2SO4？3.0g，KH2PO4？0.5g，KCl？0.1g，MgSO4·H2O？0.5g，Ca(NO3)2·2H2O0.01g，琼脂18.0g，溶于900mL蒸馏水，混合均匀，用NaOH溶液调节pH至7.0；B：FeSO4·7H2O？44.2g溶于100mL蒸馏水。将A溶液于121℃湿热灭菌15min，B过滤除菌，待A冷却至60℃左右在无菌条件下加入3mL无菌稀硫酸溶液(体积分数5.5％)，然后将A、B混合，用灭菌玻璃棒轻轻搅拌使其混合均匀，倒入培养皿，凝固后即可得到质量较好、pH为2.0的9k固体培养基。
【IPC分类】C12N1/20
【公开号】CN105112346
【申请号】CN201510671854
【发明人】王曙光, 徐哲, 罗鹏程
【申请人】北京化工大学
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年10月15日