一种二萜类化合物及其制备方法与应用

文档序号:9410003阅读:686来源:国知局
一种二萜类化合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物有效成分提取技术领域,具体涉及一种二萜类化合物及其制备方 法与应用。
【背景技术】
[0002] 目前对急慢性炎症的治疗主要以抗生素、激素类药物为主,这些药物的治疗虽然 能收到良好的效果,但因耐药菌株的不断增加,有越来越多的病例尽管用抗生素治疗,病情 却得不到有效控制,而且抗生素在临床应用中产生副作用的病例是屡见不鲜。部分炎症疾 病系病毒感染所致,抗生素基本无效。近年来,中外研究人员逐渐将目光投向资源丰富、纯 天然的中草药、民族药,希望从中寻找新的抗炎药物。目前从中草药、民族药中发现了白芥 子苷、阿魏酸、升麻苷、槲皮苷、苦参生物碱、大黄素、鱼腥草素、南蛇藤素等一系列天然抗炎 药物。这些天然药物表现出的良好抗炎活性日益证明从天然产物中筛选抗炎药物是一个很 有前景的方向。
[0003]黑果土当归(ArabiaHand. -Mazz)系五加科(Araliaceae)橡木属 植物,民间以其根入药,入脾、胃二经。该植物有补中益气、托毒外出、消炎的功效,用于淋巴 腺炎、慢性化脓性骨髓炎和疖痈等症。该属植物化学成分主要含二萜、三萜皂苷、香豆素、黄 酮、木脂素及留醇。目前对黑果土当归植物化学成分以及药理活性的研究报道较少。本发 明试图对黑果土当归中具有抗炎作用的化合物做深入研究,以期发现其中的抗炎活性天然 产物,为筛选高效、低毒的抗炎药物提供依据。

【发明内容】

[0004] 本发明的第一目的是提供一种二萜类化合物;第二目的在于提供所述二萜类化合 物的制备方法;第三目的在于提供所述二萜类化合物的应用。
[0005] 本发明的第一目的是这样实现的,所述的二萜类化合物是以黑果土当归根为 原料,经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的,该化合物 分子式为C2QH3Q03,命名为14-氧-对映-8 (9),15-海松二稀酸(14-oxo-ent-pimara -8 (9),15-diene_19-〇icacid),具有下述结构式:
[0006] 本发明的第二目的是这样实现的,是以黑果土当归根为原料,经浸膏提取、有机溶 剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得,具体为: A、 浸膏提取:将黑果土当归根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒,加入黑果 土当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次,每 次l~3h,合并提取液,提取液过滤,减压浓缩提取液至比重为1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有机溶剂萃取:浸霄a中加入重量比2~4倍量的水,依次用与水等体积的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶剂进行萃取,每种溶剂萃取4~6次,蒸去溶剂分别得到石油醚萃取物b、 乙酸乙酯萃取物c和正丁醇萃取物d; C、 硅胶柱层析: 1) 将石油醚萃取物b上硅胶柱,装柱硅胶为100~200目,用量为萃取物b重量6~8倍 量;用体积比为25:1~0:1的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂梯度洗脱,收集梯度洗脱液、浓缩, 经TLC监测,合并相同的部分; 2) 将1)中以5:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液e上硅 胶柱,装柱硅胶为200~300目,用量为洗脱液e体积6~8倍量;用体积比15:1~0:1的石油 醚-乙酸乙酯有机溶剂梯度洗脱、浓缩,经TLC检测,合并相同的部分; D、 高效液相色谱分离:将C步骤2)中以2:1配比的石油醚-乙酸乙酯有机溶剂 进行洗脱得到的洗脱液采用半制备高效液相色谱仪分离纯化,即得所述的二萜类化合 物 14-氧-对映-8 (9),15-海松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara-8 (9),15-diene_19-〇ic acid) 〇
[0007] 本发明二萜类化合物是首次被分离出来的,通过核磁共振和其他波谱技术测定方 法确定为二萜类化合物,并表征其具体结构为:
化合物 14-氧-对映-8(9),15-海松二稀酸(14-〇x〇-ent_pimara -8(9),15-diene-19-〇icacid),为白色无定型粉末(溶剂为氯仿),|(x1d2'L3-14.8(c 0.15,CHC13);IR(KBr)谱在 3347,1710,1688,1645cm1 有吸收,表明分子中存在羧 基、羟基和双键。HRESI-MS(附图1)显示其准分子离子峰m/z317. 2128 [M-H] (calcd. 317. 2116),结合NMR谱确定其分子式为C2(]H3(]03,不饱和度为6。4NMR(附图2,数据归属 见表1)显示分子中有3个甲基单峰,分别为1.29 (3H,s),1.16 (3H,s)及0.99 (3H,s)),有 1个单取代双键信号6.04 (1H,17.6,10.8Hz,H-15),5.07 (1H,4 /= 10.8Hz,H-16a),4.98 (1H,4 /= 17.6Hz,H-16b));13CNMR(附图 3, 数据归属见表1)显示分子中有20个碳,其中有7个季碳(含2个羰基碳和2个烯碳),2 个次甲基(含1个烯碳),8个亚甲基(含1个烯碳),及3个甲基。结合HSQC相关谱(附 图4),并对比文献数据可证实,该化合物与已知化合物7-〇x〇-13-epi-pimara-8, 15-dien -18-oicacid结构相似,区别在于分子中的酮羰基203.5)连接在分子中的14位, 而不是7位。进一步经HMBC相关(附图5)、COSY相关(附图6)和ROESY(附图7)及与 文南犬(ChangL.C.,SongL.L. ,ParkE.J. ,LuyengiL. ,LeeK.J. ,FarnsworthN.R., PezzutoJ.M. ,KinghornD.BioactiveconstituentsofThujaoccidentails.Journal ofNaturalProducts. 2000,63(9): 1235-1238.)对比证实,使化合物的结构最终得到 确认,化合物具有下述结构式:
通过SCIFINDER数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。
[0008] 表1 本发明化合物的 1H-和13c-nmr(CDC13)数据
本发明的第三目的是这样实现的,所述的二萜类化合物在制备预防和/或治疗炎症药 物中的应用。
[0009] 本发明所述的二萜类化合物进行了体外抗炎活性测试,实验结果显示出良好的抑 制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW264. 7)产生一氧化氮(N0)的作用,可为医用工业 提供有应用价值的新化合物或先导化合物。
[0010] 本发明的优点: 1、本发明中的二萜类化合物对LPS诱导RAW264. 7细胞产生N0有显著的抑制作用,提 示其具有良好的抗炎活性,可以作为抗炎活性成分或先导化合物。
[0011] 2、本发明中的二萜类化合物可为天然存在的有机化合物,原料来源广泛,并且化 合物制备操作流程简单,所获得的化合物纯度高,随后的工业化生产易实现。
【附图说明】
[0012] 图1是本发明化合物高分辨质谱(HRESI-MS); 图2是本发明化合物的核磁共振氢谱(:HNMR); 图3是本发明化合物的核磁共振碳谱(13CNMR); 图4是本发明化合物的HSQC相关谱; 图5是本发明化合物的HMBC相关谱; 图6是本发明化合物的COSY相关谱; 图7是本发明化合物的R0ESY相关谱。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明,但不以任何方式对本发明加以 限制,基于本发明教导所作的任何变换或改进,均落入本发明的保护范围。
[0014] 本发明所述的二萜类化合物,是以黑果土当归根为原料,经浸膏提取、有机溶剂萃 取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的,该化合物分子式为C2(]H3(]03,命名为14-氧-对 映-8(9),15-海松二稀酸(14-〇叉〇-6]11:-卩;[1]1&抑-8(9),15-(116116-19-〇;[0&(^(1),具有下述 结构式:
[0015] 本发明所述的二萜类化合物的制备方法,是以黑果土当归根为原料,经浸膏提取、 有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得,具体为: A、 浸膏提取:将黑果土当归根晾干粉碎得到0. 05~0. 15cm粒径大小的颗粒,加入黑果 土当归根重量比4~8倍的体积百分浓度80~95%乙醇溶液于65~74°C下回流提取3~5次,每 次l~3h,合并提取液,提取液过滤,减压浓缩提取液至比重为1. 1~1. 3得到浸膏a; B、 有机溶剂萃取:浸霄a中加入重量比2~4倍量的水,依次用与水等体积的石油醚、乙 酸乙酯和正丁醇溶剂进行萃取,每种溶剂萃取4~6次,蒸去溶剂分别得到石
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