丹参素-亮氨酸衍生物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药领域，涉及丹参素-亮氨酸衍生物及其制备方法，以及所述衍生 物在抗血栓等相关药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 心血管系统疾病与血液流变学密切相关，其可通过血液流动性、黏度和凝滞性的 改变间接反映血管和心脏的功能。血栓是指在血液流动的过程中，血液中成分在血管或心 脏内膜表面发生析出、凝集和凝固所形成的一种半凝块状物质。现代研究表明，血栓性疾病 的发生与血管损伤、血液性质改变以及局部血流变化有关。能够影响和改善血流变的药物 在抗血栓治疗中起到了非常重要的作用。
[0003] 血液流变学有多项相关指标，如，红细胞血红蛋白含量（MCH)、平均血红蛋白浓度 (MCHC)、红细胞分布宽度（RDW)等在很大程度影响血流变某些指标改变。另外红细胞聚集 指数（RI)、红细胞变形指数（RCD)、红细胞刚性指数（IR)、全血黏度（nb)等改变均能在一 定程度上反映血液流变学的改变。其中，全血黏度（nb)是血液流变学中的综合性指数，其 能为II型糖尿病、血栓前和血栓性疾病等的诊断、治疗和预防提供重要依据，其会随着切变 率的升高而降低。全血黏度的测定有助于了解机体内血液的流动性。红细胞聚集指数（RI) 在临床上常用于诊断血栓性疾病，RI的增高常发生于红细胞膜性质结构异常性疾病中并且 会导致低切变率下血液黏度的升高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种丹参素-亮氨酸衍生物及其制备方法和用途。
[0005] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0006] -种丹参素-亮氨酸衍生物，该衍生物的结构如式I所示：
[0007]
[0008]其中，1^为11、011、0013、00)013、3116也7113扯-2-61^1或异戊烯基；1?2为11、011、0013、 0C0CH3、3-methylbut-2-enyl或异戊烯基；R3为H、CH3、Bn、0CH3、0C0CH3、BnCH2、i-Pr、t-Bu 或金刚烷基；R4为H、CH3、CH2CH3、i-Pr、t-Bu、Bn、0CH3、0C0CH3或金刚烷基。
[0009] 上述丹参素-亮氨酸衍生物的制备方法，包括以下步骤：
[0010] 1)将原料A溶解于有机溶剂中得溶液I，所述原料A为丹参素、丹参素钠或丹参素 衍生物；
[0011] 2)向溶液I中加入有机胺，然后置于冰水浴中搅拌冷却至0°C，得溶液II;
[0012] 3)向溶液II中依次加入缩合剂以及原料B得混合物，加入缩合剂与加入原料B之 间间隔10~30min(旨在使缩合剂与原料A反应生成更加活泼的中间产物），所述原料B为 亮氨酸衍生物，将混合物升至20~25°C后反应18~24小时，反应结束后旋转蒸发除去溶 剂；
[0013] 4)向旋转蒸发除去溶剂后所得剩余物中加入乙酸乙酯，然后混合均匀并抽滤，对 抽滤所得滤液中的有机相进行洗涤后用无水硫酸钠干燥，然后旋转蒸发除去溶剂得固体粗 产物，所述粗产物通过柱层析纯化得到丹参素-亮氨酸衍生物。
[0014] 所述有机溶剂选自非质子性有机溶剂，如二氯甲烷、氯仿、丙酮、四氢呋喃、甲苯 等；所述有机胺选自三级胺，如三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙基胺等；所述缩合剂选自 活泼酯类缩合剂，如DCC/DMAP、NMM/IBCF、EDCI/HOBt、EDCI/DMAP(物质的量比为 1:1 ~1:3) 等。
[0015] 所述丹参素衍生物的结构为；
[0016]
[0017] 其中，1^为11、011、0013、00)013、3116也7113扯-2-61^1或异戊烯基 ；1?2为11、011、0013、 0C0CH3、3-methylbut-2-enyl或异戊烯基；R3为H、CH3、Bn、0CH3、0C0CH3、BnCH2、i-Pr、t-Bu 或金刚烷基；
[0018] 所述亮氨酸衍生物的结构如以下结构式所示或者所述亮氨酸衍生物的结构为以 下结构式的盐的形式，所述盐的形式可以为盐酸盐或硫酸盐：
[0019]
[0020] 其中，R4为H、CH3、CH2CH3、i-Pr、t-Bu、Bn、0CH3、0C0CH3或金刚烷基。
[0021] 按物质的量比例计，所述原料A与有机胺的用量比例为1:1~1:4,原料A与缩合 剂的用量比例为1:1~1:4,原料A与原料B的用量比例为1:1~1:4。
[0022] 所述洗涤的具体步骤为：依次用饱和食盐水、质量分数5%的碳酸氢钠水溶液和 0?lmol/L的盐酸洗涤。
[0023] 所述柱层析中，按照石油醚：乙酸乙酯=10:1~1:1进行梯度洗脱，柱层析具体 条件为：
[0024] 柱层析硅胶型号是200~300目；用量为固体粗产物质量的10~60倍；
[0025]流动相：石油醚沸程为60~90°C，乙酸乙酯为分析纯；
[0026] 粗产物中加入两倍（质量比）的柱层析硅胶，搅拌均匀后装柱。
[0027] 梯度洗脱为：
[0028] 梯度I，石油醚：乙酸乙酯=10:1 (体积比），总体积（单位：毫升）为固体粗产 物质量（单位：克）的5~20倍；
[0029] 梯度II，石油醚：乙酸乙酯=7:1 (体积比），总体积（单位：毫升）为固体粗产 物质量（单位：克）的8~20倍；
[0030] 梯度III，石油醚：乙酸乙酯=1:1 (体积比），总体积（单位：毫升）为固体粗产 物质量（单位：克）的5~10倍；
[0031] 每试管收集5mL，GF254鉴定同一色谱峰后，收集、合并，-0. 08MPa，45°C旋转蒸发 除去溶剂。
[0032] 所述总体积对固体粗产物质量的倍数因丹参素-亮氨酸衍生物的官能团不同而 不同。
[0033] 所述制备方法还包括以下步骤：所述R1以及R2为羟基时，在步骤1)前，对R1以及 R2进行保护，并且在步骤4)后进行脱保护。所用的保护基，如苄基、硅醚基、烷氧基等均可， 以消除活泼氢可能产生的副反应。
[0034] 上述丹参素-亮氨酸衍生物在制备抗血栓药物中的用途。
[0035] 上述丹参素-亮氨酸衍生物在制备改善脑循环的药物中的用途。
[0036] 上述丹参素-亮氨酸衍生物在制备用于预防和治疗心血管疾病的药物中的用途。
[0037] 本发明的有益效果体现在：本发明所述丹参素-亮氨酸衍生物制备方法简单，原 料易得，产物容易分离纯化，产率高，且所述丹参素-亮氨酸衍生物具有显著的改善血液流 变学的生物活性，可作为药物活性成分制备抗血栓、改善脑循环以及防治心血管疾病的药 物。
【具体实施方式】
[0038] 下面结合实施例对本发明作详细说明。
[0039] 本发明所述丹参素-亮氨酸衍生物合成是以丹参素（丹参素在自然界中不稳定， 故把其做成钠盐，即丹参素钠）或丹参素衍生物和亮氨酸衍生物通过缩合反应（例如EDC1/ DMAP/Et3N)得到。该丹参素-亮氨酸衍生物的结构如式I所示：
[0040]
[0041] 其中，1^为11、011、0013、00)013、3116也7113扯-2-61^1或异戊烯基 ；1?2为11、011、0013、 0C0CH3、3-methylbut-2-enyl或异戊烯基；R3为H、CH3、Bn、0CH3、0C0CH3、BnCH2、i-Pr、t-Bu 或金刚烷基；R4为H、CH3、CH2CH3、i-Pr、t-Bu、Bn、0CH3、0C0CH3或金刚烷基。
[0042] 本发明采用大鼠急性血瘀模型，并测定红细胞聚集指数（RI)和全血黏度（nb)两 项指标的变化，评价所述丹参素-亮氨酸衍生物对血液流变学的影响，进而评价其在抗血 栓以及相关药物中的应用。
[0043] 实例1丹参素-亮氨酸甲酯（简称D1，如式II所示）的合成
[0044]
[0045] 1)称取丹参素钠110mg(0.05mmol)加入lOmL圆底烧瓶中，向圆底烧瓶中滴加2mL DCM(二氯甲烷），将丹参素钠溶解；
[0046] 2)向圆底烧瓶中再加入280yL(约0. 2mmol)三乙胺，冰水浴下搅拌冷却至0°C;
[0047] 3)向圆底烧瓶中再加入EDCI(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸 盐）143mg(0. 075mmol)和DMAP(4_ 二甲胺基吡啶）91. 5mg(0. 075mmol)，lOmin后向圆底烧 瓶中再加入L-亮氨酸甲酯盐酸盐72. 5mg(0. 05mmol)，温度升至室温（25°C)反应20小时；
[0048] 4)反应结束后减压抽干（-0. 08MPa，45°C)溶剂，加入8mL乙酸乙酯摇勾，抽滤，滤 液中上层的有机相依次用饱和食盐水、质量分数5%的碳酸氢钠水溶液和0.lmol/L的盐酸 洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽干（_〇.〇8MPa，45°C)溶剂得淡黄色固体粗产物，柱层析（所 述总体积对固体粗产物质量的倍数：梯度I为10倍，梯度II为15倍，梯度III为5倍）后 得丹参素-亮氨酸甲酯（81. 2mg，产率47. 9% )。结构鉴定数据如下：LC-MS:326. 3(M+1+)。 'HNMR(400MHz,d-DMSO) 8 ： 8. 11 (s, 1H,), 6. 54-6. 60 (m, 3H), 3. 88-3. 98 (m, 3H), 3. 85-4. 04 ( m, 1H), 3. 60-3. 63 (m, 1H,), 2. 90-2. 97 (m, 2H), 2. 05-2. 12 (m, 2H,), 1. 94-1. 99 (m, 1H), 0. 84-0.91(m，6H)〇
[0049] 实例2丹参素-亮氨酸乙酯（简称D2,如式III所示）的合成
[0050]
[0051] 1)称取丹参素钠110mg(0. 05_〇1)加入10mL圆底烧瓶中，向圆底烧瓶中滴加2mL DCM，将丹参素钠溶解；
[0052] 2)向圆底烧瓶中再加入280yL(约0. 2mmol)三乙胺，冰水浴下搅拌冷却至0°C;
[0053]3)向圆底烧瓶中再加入EDCI143mg(0. 075mmol)和DMAP91.5mg(0. 075mmol)， lOmin后向圆底烧瓶中再加入L-异亮氨酸乙酯盐酸盐79.5mg(0. 05mmol)，温度升至室温反 应24小时；
[0054] 4)反应结束后减压抽干（_0? 08MPa，45°C)溶剂，加入10mL乙酸乙酯摇匀，抽滤， 滤液中上层的有机相依次用饱和食盐水、质量分数5%的碳酸氢钠水溶液和0.lmol/L的盐 酸洗涤，无水硫酸钠干燥，减压抽干（_〇.〇8MPa，45°C)溶剂得淡黄色固体粗产物，柱层析 (所述总体积对固体粗产物质量的倍数：梯度I为5倍，梯度II为15倍，梯度III为10倍） 后得丹参素-亮氨酸乙酯（91mg，产率51%)。结构鉴定数据如下：LC-MS:340. 3(M+1+)。 'HNMR(400MHz,d-DMS0) 8 ： 8. 14 (s, 1H,), 6. 54-6. 60 (m, 3H), 4. 14-4. 28 (m, 2H), 3. 84-4. 02 ( m, 1H), 3. 60-3. 63 (m, 1H), 2. 92-2. 99 (m, 2H), 2. 06-2. 14 (m, 2H), 1. 92-1. 96 (m, 1H), 1. 31-1. 36 (m, 3H)，0? 86-0. 95 (m, 6H)。
[0055] 实例3 2-羟基-3- (4-羟基-3, 5-二（3-甲基丁 -2-烯）苯基）丙酸-亮氨酸乙 酯（简称D3,如式IV所示）的合成
[0056]
[0057] 1)称取原料2_羟基_3_(4_羟基_3,5_二（3_甲基丁 _2_稀）苯基）丙酸（结 构式如下）160mg(0.05mmol)加入10mL圆底烧瓶中，向圆底烧瓶中滴加3mLDCM，将原料溶 解；
[0058]
[0059] 2)向圆底烧瓶中再加入280yL(约0. 2mmol)三乙胺，冰水浴下搅拌冷却至0°C;
[0060] 3)向圆底烧瓶中再加入EDCI143mg(0. 075mmol)和DMAP91.5mg(0. 075mmol)， lOmin后向圆底烧瓶中再加入L-异亮氨酸乙酯盐酸盐79.5mg(0. 05mmol)，温度升至室温反 应24小时；
[0061] 4)反应结束后减压抽干（-0. 08MPa，45°C)溶剂，加入10mL乙酸乙酯摇勾，抽滤， 滤液中上层的