苯丙烯酰化1，5-二芳基-1，2，4-三氮唑衍生物、其制备方法及医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学领域，具体涉及一类新的苯丙烯酰化1，5-二芳基-1，2,4-三 氮唑衍生物及其制备方法。本发明还公开了含有所述化合物的药用组合物和所述化合物在 治疗肿瘤以及通过抑制环氧合酶-2 (C0X-2)及5-脂氧化酶（5-L0X)活性来治疗其它疾病 或病症中的应用。
【背景技术】
[0002] 19世纪中叶德国病理学家Rudolf Vichow发现恶性肿瘤组织中有白细胞浸润， 首次提出肿瘤可能源自慢性炎症的观点。流行病学研究发现，慢性炎症患者更易继发各 种肿瘤，高达15%的肿瘤发生、发展与感染引起的炎症有关（Curr Urol R印，2008,9(3): 243-249;Redox R印，2002,7(6) :357-368)。慢性炎症涉及肿瘤形成的多个步骤，包括细 胞转化、促进、存活、增殖、侵袭、转移和血管生成等（Nature，2005,435 (7043) :752-753 ; Nature,2002,420(6917)：86〇-867)〇
[0003] C0X和L0X是参与花生四烯酸（AA)级联代谢的重要酶，与炎症物质的产生密切 相关。研究表明，C0X-2和5-L0X在多种人类肿瘤中共表达而且过度表达（Clin Cancer Res，2005，ll(5) :2089-2096;Biomed Pharmacother，2011，65(7) :486-490)，其代谢 AA 所 生成的类花生酸也在肿瘤的发生、发展中具有重要作用（Nat Rev Cancer，2010,10(3): 181-193)。多种C0X-2抑制剂和5-L0X抑制剂在肿瘤治疗与预防中发挥出了一定的作 用（Int J Cancer，2008,122(6) : 1384-1390 ;Cancer Lett，2009,276(1) :47_52;Cancer Lett，2010, 291 (2) : 167-176)，引起了人们的广泛关注。
[0004] AA的各代谢途径之间存在一定的平衡关系，阻断其中一条代谢途径，会代偿性地 使另一条代谢途径的产物增加，从而导致副作用。应用C0X-2/5-L0X双重抑制剂可同时对 C0X-2和5-L0X进行阻断，在发挥协同抗肿瘤作用的同时避免这种副作用。
[0005] 咖啡酸（CA)是一种具有苯丙烯酰结构的非竞争性5-L0X抑制剂，可选择性地抑制 5-L0X(Biochim Biophys Acta，1984,792(l) :92-97)，从而减少 LTs 的合成，发挥出较强的 抗炎活性和一定的抗肿瘤活性（Carcinogenesis，2007, 28(8) : 1780-1787)，而且其衍生物 如CAPE等也具有包括抗肿瘤在内的多种生物活性，可抑制多种肿瘤细胞生长、分化、增殖， 促进肿瘤细胞凋亡，降低抗肿瘤药物的不良反应，防止和逆转化学物致癌作用等（Childs Nerv Syst,2008,24(9)：987-994；Phytomedicine, 2012,19(5)：436-443 ；Indian J Exp Biol，2012,50(3) :187-194)。
[0006]
[0007] 咖啡酸（CA)
[0008] 本课题组曾根据上市的C0X-2选择性抑制剂celecoxib的结构，利用生物电子等 排原理，设计了一类新型的1，2,4-三氮唑类化合物，其具有较好的C0X-2抑制活性及抗炎 活性（Arch Pharm(Weinheim)，2010, 343 (9) :500-508)。然而，该类化合物对 5-L0X 没有明 显抑制作用且不具有抗肿瘤活性。
[0009]
[0010] 本发明提供了一类结构新颖的苯丙烯酰化1，5_二芳基_1，2,4_三氮唑衍生物。这 类化合物具有良好的C0X-2/5-L0X双重抑制活性及抗肿瘤活性，有望成为肿瘤治疗的药物 之一。
【发明内容】
[0011] 本发明的一个目的是提供由通式（I)表示的一类苯丙烯酰化1，5_二芳基_1，2， 4-三氮唑类化合物，其几何异构体以及其药学上可接受的盐。
[0012] 本发明的另一个目的是提供上述通式（I)所示苯丙烯酰化1，5_二芳基_1，2， 4-三氮唑类化合物的制备方法。
[0013] 本发明的另一个目的是提供包含一种或多种选自上述通式（I)所示苯丙烯酰化 1，5_二芳基_1，2,4_三氮唑类化合物、其几何异构体及其药学上可接受的盐的药物组合 物。
[0014] 本发明的再一个目的是提供上述通式（I)化合物在制备治疗或预防与环氧合 酶-2 (C0X-2)及5-脂氧合酶（5-L0X)相关的疾病的药物中的应用，特别是在制备治疗或预 防肿瘤药物中的应用。
[0015] 本发明优选的哺乳动物患者是人类，但是本发明也可以用于治疗其它哺乳动物。
[0016] 基于上述目的，本发明涉及如通式（I)所示的苯丙烯酰化1，5_二芳基_1，2,4_三 氮唑类化合物，以及其药学上可接受的盐及溶剂合物。
[0017]
[0018] 其中：
[0019] R1代表氢，氟，氯，溴，碘，硝基，烷基，羟基，氰基，（(；~(：4)烷基氧基，氨 基，三氟甲基；
[0020] R2代表甲磺酰基，氨磺酰基；
[0021] X 代表 CH2、NH、0 或 S ;
[0022] R3代表C广C i。直链或支链的烷烃、C 3~C 6的环烷烃；
[0023] Y 代表 CH2、NH 或 0 ;
[0024] R4代表氢、羟基、甲氧基、乙氧基、乙酰氧基、氯乙酰氧基、苄基；
[0025] R5代表氢、羟基、甲氧基、乙氧基、乙酰氧基、氯乙酰氧基、苄基。
[0026] 所述的通式（I)的化合物，优选自：
[0027] R1代表氢，氟，氯，溴，甲基，乙基，甲氧基，乙氧基，三氟甲基；
[0028] R2代表甲磺酰基，氨磺酰基；
[0029] X 代表 0 或 S ;
[0030] R3代表（CH2)2、（CH 2)3、（CH2)4;
[0031] Y 代表 NH 或 0;
[0032] R4代表氢、羟基、甲氧基、乙酰氧基、苄基；
[0033] R5代表氢、羟基、甲氧基、乙酰氧基、苄基。
[0034] 所述的通式（I)的化合物，进一步优选自：
[0035] R1代表氢，氟，溴，甲基，三氟甲基；
[0036] R2代表甲磺酰基，氨磺酰基；
[0037] X 代表 S ;
[0038] R3代表（CH2)2、（CH 2)3;
[0039] Y 代表 NH 或 0 ;
[0040] R4代表氢、羟基、甲氧基、乙酰氧基；
[0041] R5代表氢、羟基、甲氧基、乙酰氧基。
[0042] 具体来讲，通式（I)中所述的化合物优选自下列化合物：
[0043] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2-[l-(4-溴苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（I!)
[0044] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2-[l-(4-氟苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（1 2)
[0045] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2-[1-(4-甲基苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（1 3)
[0046] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-3-[l-(4-溴苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l， 2,4-三唑_3_基]硫代丙胺（14)
[0047] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-3-[l-(4-氟苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l， 2,4-三唑_3_基]硫代丙胺（15)
[0048] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2-[1- (4-溴苯基）-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（16)
[0049] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2-[1-(4-氟苯基）-5-(4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（1 7)
[0050] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-2- [1-苯基-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（18)
[0051 ] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-3-[1- (4-溴苯基）-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑_3_基]硫代丙胺（I9)
[0052] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-3-[1-(4-甲基苯基）-5-(4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙胺（1 10)
[0053] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酰-3- [1-苯基-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙胺（In)
[0054] (E) -3- (3,4-二羟基苯基）丙烯酰-2- [1- (4-溴苯基）-5- (4-氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙胺（112)
[0055] (E)-3_(3,4-二羟基苯基）丙烯酰-3-[1-(4_氟苯基）-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙胺（1 13)
[0056] (E)-3_(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4_溴苯基）-5-(4_(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（II!)
[0057] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-氟苯基）-5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（11 2)
[0058] (E)-3_(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1_苯基_5-(4-(甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（11 3)
[0059] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-三氟甲基苯基）-5-(4-(甲磺酰 基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（11 4)
[0060] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-3-[l-(4-溴苯基）-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（11 5)
[0061] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-3-[l-(4-氟苯基）-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（11 6)
[0062] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-3-[1-苯基-5-(4-甲磺酰基苯基）-lH_l， 2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（II 7)
[0063] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-溴苯基）-5-(4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（II S)
[0064] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-氟苯基）-5-(4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（11 9)
[0065] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-2- [1-苯基-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（1110)
[0066] (E)-3-(3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-3-[1-(4-氟苯基）-5-(4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（II n)
[0067] (E) -3- (3,4-二乙酰氧基苯基）丙烯酸-3- [1-苯基-5- (4-(氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（1112)
[0068] (E)-3-(3,4-二羟基苯基）丙烯酸-2-[l-苯基-5-(4-甲磺酰基苯基）-lH-l，2， 4-三唑-3-基]硫代乙酯（II 13)
[0069] (E)-3-(3,4-二羟基苯基）丙烯酸-3-[1-(4-溴苯基）-5-(4-甲磺酰基苯 基）-lH-l， 2,4-三唑_3_基]硫代丙酯（1114)
[0070] (E)-3_(3,4-二羟基苯基）丙烯酸-3-[1-(4_氟苯基）-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代丙酯（11 15)
[0071] (E)-3-(3,4-二羟基苯基）丙烯酸-2-[1-苯基-5-(4-氨磺酰基苯基）-lH-l，2， 4-三唑-3-基]硫代乙酯（II 16)
[0072] (E)-3-(3,4-二羟基苯基）丙烯酸-3-[1-苯基-5-(4-氨磺酰基苯基）-lH_l，2， 4-三唑-3-基]硫代丙酯（II 17)
[0073] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-溴苯基）-5-(4-甲磺酰 基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（IIID
[0074] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-氟苯基）-5-(4-甲磺酰 基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 2)
[0075] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-甲基苯基）-5-(4-甲磺 酰基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 3)
[0076] (E)-3_(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1_苯基-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 4)
[0077] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-三氟甲基苯基）-5-(4-甲 磺酰基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 5)
[0078] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-溴苯基）-5-(4-氨磺酰 基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 6)
[0079] (E)-3_(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[1_苯基-5-(4_氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 7)
[0080] (E)-3_(3-甲氧基-4-羟基苯基）丙烯酸-2-[1_苯基-5-(4_甲磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（III S)
[0081] (E)-3-(3-甲氧基-4-羟基苯基）丙烯酸-2-[1-(4-三氟甲基苯基）-5-(4-甲磺 酰基苯基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 9)
[0082] (E)-3-(3-甲氧基-4-乙酰氧基苯基）丙烯酸-2-[l-苯基-5-(4-氨磺酰基苯 基）-lH-l，2,4-三唑-3-基]硫代乙酯（111 10)
[0083] 出)-3-苯丙烯酸-3-[1-苯基-5-(4-氨磺酰基苯基）-111-1，2,4-三唑-3-基]硫 代丙酯（II)
[0084] (E) -3-苯丙烯酸-2-[1- (4-溴苯基）-5- (4-氨磺酰基苯基）-1H-1，2,4-三 唑-3-基]硫代乙酯（IV2)
[0085] 所述"药学上可接受的盐"为通式（I)化合物所形成的钠盐，钾盐，钙盐等；或者通 式（I)化合物与赖氨酸、精氨酸，鸟氨酸形成酯后再与盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷 酸形成对应的无机盐或与甲酸、乙酸、苦味酸、甲磺酸和乙磺酸形成对应的有机酸盐；或者 通式（I)化合物与草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨 酸或谷氨酸形成酯后再与无机碱形成的钠盐、钾盐、钙盐、铝盐或铵盐。
[0086] 本发明还提供了通式（I)化合物的制备方法，本发明所用原料及试剂如无特殊说 明，均为商业购买。
[0087] 本发明的另一个目的是提供上述通式（I)所示苯丙烯酰化1，5_二芳基_1，2， 4-三氮唑类化合物、其几何异构体、其混合物、其药学上可接受的盐、结晶水合物或溶剂合 物的制备方法，其制备方法按如下方法之一进行：
[0088] 方法 A :
[0089]
[0090] 所述方法A包括如下步骤：
[0091] a)化合物Ia与不同链长的溴代羧酸乙酯在碱性条件下在非质子性溶剂中经 烃化反应生成化合物I b，其中所用溶剂为乙腈、二氯甲烷、丙酮或四氢呋喃，反应温度为 40_60°C，反应时间为3-5小时；所述碱可以为无机碱或有机碱，所述有机碱可为如，三乙 胺、二异丙基乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺或4-二甲胺基吡啶等，所述无机碱可为如，碳酸 钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾等；
[0092] 具体地，将化合物Ia与等当量的碱悬浮于适当溶剂中，加热至35-40°C，在此温度 下搅拌半小时后，加入1. 5当量的溴代羧酸酯，升温，继续反应3-5小时。冷却至室温，抽滤， 滤液减压浓缩至干，柱层析纯化得化合物Ib。
[0093] b)化合物Ib被还原试剂还原为I。，其中，所述还原试剂为四氢铝锂、硼氢化钠、硼 烷或乙。
[0094] 具体地，将化合物Ib溶于无水四氢呋喃中，于室温下30分钟内分批加入还原试 剂，反应温度60-70°C，反应时间2-6小时。反应文成后加入稀氢氧化钠溶液淬灭，继而用乙 酸乙酯萃取，柱层析纯化得化合物I。。
[0095] c)化合物I。与对甲苯磺酰氯在碱存在下发生磺酰化反应生成化合物I d;所述碱 可以为无机碱或有机碱，所述有机碱可为如，三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N，N_二甲基苯胺 或4-二甲胺基吡啶等，优选三乙胺、吡啶或二异丙基乙胺，所述无机碱可为如，碳酸钾、碳 酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾等；反应所用溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙 醚或甲苯等。
[0096] 具体地，将化合物I。溶于适当溶剂中并加入有机碱/无机碱，冷却至0°C，加入过 量的甲磺酰氯，升至室温，继续反应4-9小时，反应完成后二氯甲烷萃取，柱层析纯化得化 合物I d。
[0097] d)化合物Id在极性非质子性溶剂中与叠氮化钠反应得叠氮基化合物所述极性 非质予性溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，丙酮或1，3-二甲基-2-咪唑啉酮等。
[0098] 具体地，将化合物Id溶于N，N-二甲基甲酰胺，向其中加入3当量的叠氮化钠，反 应温度60-KKTC，反应时间为2-5小时。结束反应后，冷却至室温，乙酸乙酯萃取，柱层析纯 化得化合物L。
[0099] e)化合物Ie与三苯基膦反应经Staudinger反应还原为伯胺化合物I f;溶液为四 氢呋喃，甲醇或乙醇等，优选为四氢呋喃；反应时间7-10小时。
[0100] 具体地，将化合物与适量四氢呋喃置于反应瓶中，向其中加入大大过量的三苯 基膦，室温反应过夜，结束反应后，二氯甲烷萃取，柱层析纯化得化合物I f。
[0101] f)化合物Ig与乙酰化试剂在碱的存在下发生反应生成化合物I h;其中，所述乙酰 化试剂为醋酸酐或者乙酰氯；所述碱可为无机碱或有机碱，所述有机碱可为如，三乙胺、二 异丙基乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺或4-二甲胺基吡啶等，优选三乙胺、4-二甲胺基吡啶或 二异丙基乙胺，所述无机碱可为如，碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化 钾等；反应所用溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙醚或甲苯等，优选为二氯甲烷；反应温度为 40-90。。。
[0102] 具体地，将化合物Ig悬浮于二氯甲烷中，加入少量4-二甲胺基吡啶，加热，5min后 向其中滴加3当量的乙酰化试剂及碱，继续加热反应3-6小时，反应结束后，加入少量水淬 灭，然后分别用1N盐酸，水及饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥二氯甲烷层，滤液减压浓缩 至干，柱层析纯化得化合物I h。
[0103] g)将羧酸、与氯化剂反应得到酰氯11;其中，所述的氯化试剂为三氯氧磷、三氯化 磷、五氯化磷、二氯亚砜或草酰氯等，优选为二氯亚砜或草酰氯。
[0104] 具体地，将化合物、溶于二氯亚砜中，滴加1滴N，N-二甲基甲酰胺催化，反应温 度50-80°C，反应时间3-5小时，减压浓缩得化合物L。
[0105] h)化合物If与I i在碱存在下发生酰胺化反应生成化合物I 所述碱可以为无机 碱或有机碱，所述有机碱可为如，三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺或4-二甲 胺基吡啶等，优选三乙胺、吡啶或二异丙基乙胺，所述无机碱可为如，碳酸钾、碳酸钠、碳酸 氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾等；反应所用溶剂为二氯甲烷、四氢呋喃、乙醚或甲苯 等，优选为二氯甲烷，反应时间4-10小时。
[0106] 具体地，将化合物If溶于适量溶剂中，向其中加入2当量的化合物I p TLC监测反 应，反应结束后柱层析纯化得化合物马。
[0107] i)化合物^与甲醇钠在甲醇或乙醇中反应，脱除乙酰基得化合物I k。
[0108] 具体地，将化合物^溶于适当溶剂中，室温下向其中滴加含有30%甲醇钠的醇溶 液，反应时间15-30min。二氯甲烷萃取，柱层析纯化，得化合物I k。
[0109] j)非必要地，当化合物1,或I滞有保护基团需要脱除，化合物I ,或I k经脱保护 反应而去除保护基。
[0110] 具体地，将化合物^或I ^容于三氟乙酸中，冰浴冷却，滴加2滴苯甲醚，缓慢升至 室温，柱层析纯化（二氯甲烷：甲醇=150 : 1)，得到脱除保护基的化合物。
[0111] 方法 B:
[0112]
[0113] 所述方法B包括如下步骤：
[0114] k)化合物^与二溴代烷烃在碱存在下发生烃化反应生成化合物I 1;所述碱可以 为无机碱或有机碱，所述有机碱可为如，三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺或 4_二甲胺基吡啶等，优选三乙胺、吡啶或二异丙基乙胺，