提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体地指一种提高显齿蛇葡萄中二氢杨 梅素得率的方法。
【背景技术】
[0002] 显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata) (Hand-Mazz) W. T. wang)为葡萄科蛇葡 萄属多年生木质藤本植物，广泛分布于我国长江以南的湖南、湖北、贵州、广西、福建等地 (中国高等植物图鉴（二册）补编，科学出版社，1983)。民间多采其幼嫩茎叶加工成类茶 产品，俗称藤茶、茅岩莓茶、端午茶等。其味微甘、苦，性凉，具有清热解毒、利湿消肿、平肝 降压、活血通络的功效，泡服用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、小便淋痛等症（《全国中草药汇 编》，第3版，王国强）。目前显齿蛇葡萄在福建、广西、湖南等地方中药材标准中均有收 载。
[0003] 二氢杨梅素（dihydromyricelin，DMY)是显齿蛇葡萄中最主要的功效成分，又名 蛇葡萄素、白蔹素、福建茶素等，化学结构为3, 5, 7, 3'，4'，5' -六羟基-2, 3-双氢黄酮醇。 现代药理研究表明，二氢杨梅素在抗肿瘤、抗炎、抗氧化、解酒护肝、抗病原微生物、降血糖、 抗疲劳和调血脂等方面均表现出了良好的药理活性（中草药，2015, 04:603-609 ;中国药 理学通报，2008, 05:626-630 ;梁婷，沈阳药科大学，2007 ;王江南，南昌大学，2014 ;张志 坚，湖南师范大学，2006 ;中药药理与临床，2011，04:15-17 ;陈永畅，广西医科大学，2014 ; 中药材，2014, 06:1014-1020 ;山地农业生物学报，2012, 03:247-249)，在医药、保健行业具 有重要的应用价值，如：公开号为CN103269699A的中国发明专利公开了一种包括给予二 氢杨梅素的治疗酒精中毒、酒精使用障碍以及酒精滥用的方法；公开号CN102775455A的 中国发明专利公开了为一种治疗急慢性支气管炎的二氢杨梅素药物及其制备方法；公开 号为CN102772398A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备防治流感药物中的应 用；公开号为CN103751173A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备肝再生药物中 的应用；公开号为CN103271901A的中国发明专利公开了一种二氢杨梅素在制备抗肝癌药 物中的应用；公开号为CN1481790的中国发明专利公开了一种含有二氢杨梅素和杨梅素 的组合物在制备降血脂的药物中的用途；公开号为CN101023942的中国发明专利公开了 一种二氢杨梅素治疗心血管疾病的用途；公开号为CN103271901A的中国发明专利公开了 一种含有二氢杨梅素和杨梅素的组合物在制备降血糖的药物中的用途。另外，二氢杨梅素 作为一种天然防腐剂和免疫增强剂，在食品、畜牧、饲料等领域也有广阔的应用前景，如：公 开号为CN104542940A的中国发明专利公开了一种鲜切根茎类蔬菜的保鲜方法；公开号为 CN104585837A的中国发明专利公开了一种保护鱼油的天然复合抗氧化剂及其使用方法；[0004] 二氢杨梅素结构式见结构式1。
[0006] 目前二氢杨梅素人工合成的报道很少，申请号为201410071142. 7的中国发明专 利公开了一种天然活性产物二氢杨梅素的合成工艺，该方法以3, 4, 5-三羟基-苯丙烯酸 酰氯和间苯三酚为原料，经过一系列化学反应得到二氢杨梅素全合成产品，所用原料多为 有毒试剂，且反应步骤多，反应条件苛刻，距离环保、经济的合成路线仍有一定的差距，因此 二氢杨梅素的市场供应仍以天然提取物为主。提取原料主要来自于葡萄科蛇葡萄属植物， 如显齿蛇葡萄、大叶蛇葡萄、粵蛇葡萄等。其中显齿蛇葡萄分布最为广泛，分别收录入广西、 福建和湖南等省的地方药材标准，是二氢杨梅素最重要的提取原料。
[0007] 二氢杨梅素在显齿蛇葡萄鲜采样品中含量最高（曾维超，华中农业大学，2005 ; 易海燕，湖南中医药大学，2011)，但鲜品水分多、体积大，为便于提取，鲜品常常需要干燥、 粉碎处理。如：申请号为201010612340. 1的中国发明专利公开了一种莓茶多种提取物的 生产方法是将显齿蛇葡萄嫩茎藤叶干燥、粉碎；申请号为201010149014. 1的中国发明专利 公开了一种从藤茶中提取二氢杨梅素的方法是称取藤茶干叶，微波幅照处理后，粉碎；申请 号为201310391546. X的中国发明专利公开了一种低温下综合提取藤茶中二氢杨梅素和多 糖的方法，该方法将显齿蛇葡萄新鲜茎叶干燥粉碎后，以水为溶剂，采用超声法提取，二氢 杨梅素粗产品得率为19%~23% ;申请号为201010284838. X的中国发明专利公开了一种 从藤茶中提取二氢杨梅素、藤茶多糖和藤茶多酚的方法，该方法是将新鲜藤茶茎叶干燥、粉 碎，采用水浴浸提法提取，二氢杨梅素得率在11 %左右。但上述提取专利并未对干燥工艺进 行深入的研究，没有提及具体的干燥方式、干燥温度、干燥时间等。《中国药典》2010年版一 部中"项目与要求"项下药材产地加工及炮制规定的干燥方法中规定，烘干、晒干、阴干均可 的，用"干燥"。因此不排除上述提取原料自然阴干、晒干的可能性。光照可加速二氢杨梅素 氧化（中国新药杂志，2007, 16 (22) : 1888-1890)，显齿蛇葡萄新鲜茎叶直接晒干可能会降 低其二氢杨梅素含量；另外，低温烘干样品中二氢杨梅素的得率不高，苏素娇等将显齿蛇葡 萄药材于40°C下干燥至恒重，粉碎后采用超声提取法，经星点设计-效应面法优化，二氢杨 梅素的最大得率仅为10.80% (福建中医药大学学报，2013, 01:28-30)。
[0008] 二氢杨梅素除了从显齿蛇葡萄鲜品中提取外，也可以从显齿蛇葡萄的类茶加工产 品一藤茶中提取。藤茶是显齿蛇葡萄茎叶经摊晾、杀青、揉捻、渥堆等一系列工序制备而成 的，因加工步骤较多导致成品藤茶价格高于显齿蛇葡萄药材价格10倍以上，同时藤茶的加 工水平不一、质量参差不齐，造成从成品藤茶中提取二氢杨梅素成本较高且无法保证其得 率。申请号为201110093346. 7的中国发明专利公开了一种藤茶中二氢杨梅素的制备方法， 该方法以藤茶表面白霜的多少来挑选提取原料，但由于藤茶加工方法的不同，用白霜的多 少来衡量二氢杨梅素含量的高低是有误差的。
[0009] 从显齿蛇葡萄中提取二氢杨梅素常用的方法除了传统的浸泡、煎煮、回流提取外， 也有微波提取、超声波提取和超临界流体萃取（广东农业科学，2013, 19:90-93)。采用传统 提取方法可以节省成本，也易于工业化大生产，但普遍存在提取时间长，提取效率不高的弊 端。谢郁峰采用回流法提取二氢杨梅素时间达95min，得率只有9. 85% (中国实验方剂学 杂志，2012, 17:46-49)。微波穿透力强，能够破碎细胞壁，杨玲等发现采用微波提取，提取效 率可提高至直接热提法的1. 5倍（杨玲，华南理工大学，2005)，但微波提取不方便控制如 温度、功率等参数，从而可能影响有效成分的保护，已有试验证明微波提取温度过高时会导 致二氢杨梅素的分解（广州化工，2007, 01:21-23)。超临界流体萃取法选择性好，可在接近 室温下完成整个分离操作，能最大限度地保持活性成分，采用该方法单次萃取可达样品中 二氢杨梅素理论含量的84. 3% (沈露，天津科技大学，2006)，但该方法设备投入大、运行 成本高、规模化困难，目前多用于实验室研究，工业化生产较少使用。超声波具有增溶和细 胞破碎作用，能在低温条件下实现快速、高效的提取，适用范围广，易实现自动控制。在40°C 下超声波辅助65 %乙醇溶剂提取40min，二氢杨梅素的首次得率可达理论含量的93. 1 %， 优于常规的热提取法（食品与生物技术学报，2007, 03:20-23)。申请号为201310391546. X的中国发明专利公开了一种低温下综合提取藤茶中二氢杨梅素和多糖的方法，该方法在 60°C条件下用水超声提取20min，可以得到20%左右的二氢杨梅素粗品。
[0010] 因此，提取二氢杨梅素既要考虑到提取原料来源（显齿蛇葡萄加工品藤茶或显齿 蛇葡萄药材）的成本、质量，又要兼顾到提取方法的简便、高效。只有将两者有机的结合处 理，才能从根本上降低二氢杨梅素的生产成本，提高生产效率，促进中药资源的合理利用。
【发明内容】
[0011] 本发明针对目前显齿蛇葡萄中二氢杨梅素提取成本高、效率低的问题，提供一种 提高显齿蛇葡萄中二氢杨梅素得率的方法，该方法以未加工的显齿蛇葡萄茎叶为原料，采 用该方法提取二氢杨梅素，其效率较自然阴干、普通烘干样品高出许多，避免了二氢杨梅素 的代谢减失，并大大降低了提取成本，做到了二氢杨梅素的高效、经济提取，将对满足二氢 杨梅素的市场供应和降低二氢杨梅素的原料价格产生深远的影响，具