酶裂解法生产7-氨基头孢烷酸结晶母液中有效成分的综合回收方法_2

文档序号:9446519阅读:来源:国知局
,诸如醋 酸钢、碳酸钢或碳酸氨钢溶液,最优选碳酸氨钢溶液,且碳酸氨钢溶液浓度优选介于1. 5~ 3.Owt%之间,更优选介于2. 0~2. 5wt%之间,最优选为约2. 4wt% ;解析剂的流速为每小 时为0. 5~1. 0倍树脂总体积,优选每小时0. 75倍树脂总体积;解析开始后,采用高效液 相色谱法检测树脂柱出口流出液中杂质脱乙酷头抱菌素C值CPC)纯度,当DCPC纯度低于 10% (该纯度为液相检测纯度,即峰面积百分比)时开始收集流出液,收集到出口流出液中 7-ACA浓度低于0. 5g/L时停止收集,此部分收集到的流出液即为解析液,用于回收7-ACA。
[0029] 在收集的吸附余液中,D-a-氨基己二酸浓度为80. 0~130.Og/L,7-ACA浓度则 低于0.Ig/L;在收集的解析液中,7-ACA的浓度约为5. 0~10.Og/l,D-a-氨基己二酸浓度 则低于0.Ig/L,CPC浓度约为1~5g/L;7-ACA解析收率大于等于95%。
[0030] 在所述步骤(3)D-a-氨基己二酸的制备中,将上述步骤(2)所得的吸附余液用酸 调节抑至3. 00~4. 50,D-a-氨基己二酸晶体析出,0~l〇°C低溫养晶后,经过滤、洗涂、 干燥得到D-a-氨基己二酸成品。
[0031] 其中,上述步骤(2)所得的吸附余液用酸缓慢调节抑至3. 00~4. 50,优选抑 3. 00~3. 50,最优选抑3. 20 ;所用酸为10~15% (v/v)的盐酸;在该抑条件下,吸附余 液中的D-a-氨基己二酸溶解度相对最低,保证了吸附余液中D-a-氨基己二酸W晶体形 式大量析出。
[0032]然后,低溫养晶,养晶过程中缓慢降溫至0~10°C,优选0~5°C,最优选3~5°C, D-a-氨基己二酸在该条件下最大限度地W晶体形式析出;一般需养晶40~80分钟,最优 选择养晶时间为60分钟;养晶结束后经过滤可W分离得到D-a-氨基己二酸晶体,然后经 洗涂、干燥得到D-a-氨基己二酸成品。
[0033] 在所述步骤(4)7-ACA的制备中,采用截留分子量为150~300道尔顿的纳滤膜将 上述步骤似得到的解析液进行浓缩,得到浓缩液;向该浓缩液中加入固定化头抱菌素C酷 化酶,在抑8. 00~8. 60、溫度5~30°C,浓缩液中的CPC进行裂解;在裂解结束后,筛网过 滤除去固定化头抱菌素C酷化酶,所得滤液用酸调节抑至3. 00~5. 50, 7-ACA结晶析出, 得到7-ACA晶体。
[0034] 其中,上述步骤(2)所得的解析液中7-ACA浓度约为5. 0~10.Og/l,未达到结晶 所需浓度,需经纳滤膜浓缩至15. 0~25.Og/l,优选20. 0~25.Og/L;纳滤膜应选择截留分 子量为100~300道尔顿的纳滤膜,优选截留分子量为150~200道尔顿的纳滤膜,最优选 截留分子量为160道尔顿的纳滤膜,一般在5~8°C低溫条件下进行纳滤浓缩;浓缩过程中 CPC也被浓缩,浓度约3~9g/l,需要通过固定化头抱菌素C酷化酶将CPC转化为7-ACAW 降低CPC残留,所需酶可市购得到,例如山东鲁抗立科药业有限有公司、湖南福莱格生物技 术有限公司等可W购买得到;在头抱菌素C的转化中,每升解析液浓缩液所对应的投酶量 为8000~12000U,反应过程中pH需维持在8. 00~8. 60,优选8. 20~8. 40 ;反应溫度5~ 30°C,优选8~20°C,最优选10~15°C,反应时间约需30~60分钟。 阳03引 CPC彻底转化为7-ACA后,使用80~100目筛网,优选90目筛网,完成固定化头 抱菌素C酷化酶颗粒与水解液的分离,固定化头抱菌素C酷化酶经过洗涂后可W重复使用; 向筛网过滤后的裂解液中缓慢滴加10~15% (v/v)盐酸,待溶液中略微有晶体析出后停 止加酸,养晶20~30分钟;继续滴加前述盐酸至抑3. 00~5. 50,优选抑3. 50~4. 50,最 优选抑3. 80,养晶120~240分钟;养晶结束后经过滤可W分离得到7-ACA晶体,然后经洗 涂、干燥得到7-ACA成品。另外,在过滤后得到的母液可W套回至步骤(1)重新浓缩。
[0036] 下面通过实施例更具体地说明本发明,但本发明的保护范围不局限于运些实施例 中。
[0037] 在下面实施例中,7-ACA采用高效液相色谱法检测浓度;D-a-氨基己二酸采用甲 醒滴定法检测浓度;头抱菌素C采用高效液相色谱方法检测浓度。 阳0測实施例1
[0039] 按如下步骤综合回收酶裂解法生产7-ACA结晶母液中有效成分: W40] (1)7-ACA母液浓缩液的制备
[0041] 取7-ACA结晶分离之后的7-ACA结晶母液20.0 L,母液中7-ACA浓度1. Ig/L, D-曰-氨基己二酸浓度11.6g/l,CPC浓度为0. 3g/L,抑5.19。
[0042] 用15wt%氨氧化钢溶液缓慢调节上述7-ACA结晶母液至溶清,调节完毕抑为 7. 10,然后采用截留分子量为160道尔顿的纳滤膜在5~8°C将该7-ACA结晶母液浓缩至 2.OL其中 7-ACA浓度 10. 6g/l,D-a-氨基己二酸浓度 113. 3g/l,CPC浓度为 2. 9g/L。 阳0创 似母液浓缩液上柱,7-ACA、CPC吸附与解析 W44] 将上述步骤(1)得到的7-ACA母液浓缩液W每小时1.化的流速通过大孔吸附树 脂(型号为LX-033,湿法装柱,装量1.化,高径比为4. 0),上柱量共计2.化,收集流过树脂 的吸附余液。在吸附结束后,采用纯化水作为解析剂,W每小时0.化流速解析,采用液相色 谱法检测到柱下端出口流出液中DC纯度低于10%时开始收集流出液,解析到柱下端出口 流出液中7-ACA浓度低于0. 5g/L时停止收集,此部分收集到的流出液即为解析液,该解析 液中7-ACA浓度为5.Ig/L,CPC浓度为1. 4g/L。 柳例做D-a-氨基己二酸的制备
[0046] 上述步骤(2)所得的吸附余液用15% (v/v)的盐酸缓慢调节抑至3. 80,有大量 的晶体析出,低溫5 °C养晶60分钟后,经过滤得到D-a-氨基己二酸晶体,再经洗料、干燥后 得到D-a-氨基己二酸成品147. 2g,含量为95. 2%。
[0047] (4)7-ACA的制备 W48] 上述步骤似所得的解析液采用截留分子量为160道尔顿的纳滤膜在5~8°C下 将解析液中7-ACA浓缩至19.Og/l,再向其中投入100.Og固定化头抱菌素C酷化酶(80U/ g),在抑8. 30、溫度12°C下,CPC裂解至0.05g/LW下后停止裂解;在裂解结束后,采用90 目筛网将固定化头抱菌素C酷化酶从反应液中分离出来,然后向筛网过滤后的反应液中缓 慢滴加15% (v/v)盐酸,待溶液中略微有晶体析出后停止加酸,养晶20分钟,再继续滴加上 述盐酸至pH4. 20,养晶120分钟,养晶结束后经过滤、洗料、干燥后得到7-ACA产品22. 8邑。 W49] 实施例2
[0050] 按如下步骤综合回收酶裂解法生产7-ACA结晶母液中有效成分:
[0051] (1) 7-ACA母液浓缩液的制备 阳05引取7-ACA结晶分离之后的酶裂解法生产7-ACA结晶母液20.0L,母液中7-ACA浓度 1.0邑/1,0-〇-氨基己二酸浓度11.2邑/1,〔口(:浓度为0.5邑/1,抑5.16。
[0053] 用15wt%氨氧化钢溶液缓慢调节上述7-ACA结晶母液至溶清,调节完毕抑为 6. 90,然后采用截留分子量为160道尔顿的纳滤膜在5~8°C将该7-ACA结晶母液浓缩至 2. 5L其中7-ACA浓度7. 8g/L,D-a-氨基己二酸浓度89. 2g/l,CPC浓度为3. 9g/L。
[0054] 似母液浓缩液上柱,7-ACA、CPC吸附及解析 阳化5] 将上述步骤(1)得到的7-ACA母液浓缩液W每小时1.化的流速通过大孔吸附树 脂(型号为DM-700,湿法装柱,装量1.化,高径比为8),上柱量共计2.化,收集流过树脂的 吸附余液。
[0056] 在吸附结束后,采用2. 4wt%碳酸氨钢溶液作为解析剂,W每小时0.化流速解析, 采用液相色谱法检测到柱下端出口流出液中DC纯度低于10%时开始收集流出液,解析到 柱下端出口流出液中7-ACA浓度低于0. 5g/L时停止收集,此部分收集到的流出液即为解析 液,该解析液中7-ACA浓度为6. 3g/L,CPC浓度为3. 2g/L。
[0057] (3)D-a-氨基己二酸的制备
[0058] 上述步骤(2)所得的吸附后余液用15%(v/v)的盐酸缓慢调节抑至3.2,有大量 的晶体析出,低溫5 °C养晶60分钟后,经过滤得到D-a-氨基己二酸晶体,再经洗料、干燥后 得到D-a-氨基己二酸成品136.Og,含量为96. 5%。
[0059] (4)7-ACA的制备
[0060] 上述步骤(2)所得的解析液采用截留分子量为160道尔顿的纳滤膜在5~8°C下 将解析液浓缩至7-ACA22.Og/l,再向其中投入90.Og固定化头抱菌素C酷化酶(80U/g), 在抑8. 20、溫度15°C下,CPC进行裂解至0. 05g/LW下后停止裂解;在裂解结束后,采用90 目筛网将固定化头抱菌素C酷化酶从反应液中分离出来,然后向筛网过滤后的反应液中缓 慢滴加12% (v/v)盐酸,待溶液中略微有晶体析出后停止加酸,养晶30分钟,再继续滴加上 述盐酸至抑3. 80,养晶180分钟,养晶结束后经过滤、洗料、干燥后得到7-ACA产品24.Ig。 W61] 实施例3
[0062] 按如下步骤综合回收酶裂解法生产
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