一种具有神经保护作用的异戊烯基化黄酮类化合物的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药，特别是一种具有神经保护作用的异戊締基化黄酬类化合物的制 备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 神经退行性疾病是神经系统的严重疾病，是一种大脑或脊髓的细胞神经元丧失的 疾病状态。主要包括阿尔茨海默病、亨廷顿式病、帕金森式病、肌萎缩性侧索硬化症、多发性 硬化症、糖尿病性视网膜病、多发性脑梗塞性痴呆、黄斑变性等。伴随着人类老龄化时代的 到来，神经退行性疾病尤其是阿尔茨海默病的发病率呈逐年上升的趋势，75岁W上的患病 率为11. 5%，85岁W上高于30%，对整个社会和家庭将造成沉重的负担。目前临床上使用 的药物仅是减轻或改善神经退行性疾病的症状，目前尚未找到有效的方法对其进行彻底的 治疗。中草药应用历史悠久，从中草药中寻找高效低毒的具有神经保护作用的活性物质，研 制选择性强、毒副作用低的新型防治神经退行性疾病的药物是药学科研工作者迫切解决的 首要问题。
[0003] 小叶莲是小築科桃儿屯属植物鬼白Sinopodophyllumemodi(Wall.)Ying.的干 燥成熟果实。鬼白是一种具有悠久历史的药用植物，古代《神农本草经》中就有记载：杀大 毒，疗咳嗽喉疾，风邪烦感，失魄妄见。不入汤。W后的历代本草亦多有记载，主要用于活血 散结、桂风除湿、虫蛇咬伤、跌打、屯、胃痛、风寒咳嗽、月经不调、铁棒键中毒、风湿筋骨痛及 气管炎等症。鬼白分布比较广泛，我国主要分布在四川、青海、西藏、甘肃、陕西。小叶莲作 为传统藏药始载于《月王药诊》，具有悠久的药用历史。化学成分研究表明主要含有木脂素 和黄酬类化合物，其中异戊締基化黄酬是小叶莲中代表性的活性成分，具有重要而广泛的 生物活性如抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗骨质疏松、预防老年痴呆、抗糖尿病、屯、脑血管保 护、雌激素样等。本发明所设及的异戊締基化黄酬类化合物及其生物活性，迄今为止未见有 专利或文献报道。
【发明内容】
[0004] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种具有神经保 护作用的异戊締基化黄酬类化合物的制备方法及应用，可有效解决制备具有神经保护作用 的异戊締基化黄酬类化合物，实现制备防治神经退行性疾病的药物问题。
[0005] 本发明解决的技术方案是，该类化合物是从小叶莲药材中分离得到的桃儿屯酬 C(SinoflavonoidC)、桃儿屯酬D(SinoflavonoidD)、桃儿屯酬F(SinoflavonoidF)、桃儿 屯酬G(SinoflavonoidG)，分子结构式分别为：
[0006]
[0007] 其制备方法是，W小叶莲6 - 9kg为原料，W2 - 5倍原料重量、体积比为75% -95%的乙醇加热回流提取3次，提取溫度为90 - 95°C，每次提取时间为1. 5 - 2小时，减压回 收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2 - 3.化的蒸馈水中，依次W石油酸、二氯甲烧、乙酸 乙醋、正下醇萃取3次，每次2 - 3.化，时间为1. 5 - 2小时；将乙酸乙醋萃取部位经硅胶柱 色谱分离，依次用体积比为 100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、100:70、100:100、 100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1 - 1化洗脱液，流速 为10 - 15mLmin1，每350 - 500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测 分析，用GF254薄层板，分别W体积比1 : 1的石油酸-丙酬和体积比5 : 1的二氯甲烧-甲 醇作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据 薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 - 182、 流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 -260,得到化.1-Fr. 16个组份；将组份化.2经Se地adexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗脱，每 5 -lOmL为一流份，收集35个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板， W体积比8 : 1的二氯甲烧-丙酬作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为 显色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 32、流 份33 - 35,得到3个亚组份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;将亚组份化.2-1经开放0DS柱色谱， 用体积比60 : 40、体积比65 : 35、体积比70 : 30、体积比75 : 25的甲醇-水作洗脱液 进行梯度洗脱，收集体积比60 : 40甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬F、收集体积比65 : 35甲 醇-水洗脱液得桃儿屯酬C、收集体积比70 : 30甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬D、收集体积 比75 : 25甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬G。
[0008] 本发明制备的具有神经保护作用的异戊締基化黄酬类化合物桃儿屯酬C、桃儿屯 酬D、桃儿屯酬F、桃儿屯酬G具有保护神经的作用，有效用于制备防治神经退行性疾病的药 物，具有实际的临床意义，经济和社会效益显著。
【具体实施方式】
[0009]W下结合实施例对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0010] 本发明在具体实施中可由W下实施例给出。
[0011] 实施例1
[0012] 本发明在具体实施中，具有神经保护作用的异戊締基化黄酬类化合物可由小叶 莲9kg为原料，W1化、体积比为95 %的乙醇加热回流提取3次，提取溫度为95°C，每次提 取时间为1. 5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.化的蒸馈水中，依次W 石油酸、二氯甲烧、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次3.化，时间为1. 5小时；将乙酸乙醋萃 取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用13L 洗脱液，流速为15mLmin1，每500mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱 检测分析，用GF254薄层板，分别W体积比1 : 1的石油酸-丙酬和体积比5 : 1的二氯甲 烧-甲醇作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3-5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到化.1-Fr. 16个组份；将组份化.2经Se地adexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗 脱，每lOmL为一流份，收集35个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层 板，W体积比8 : 1的二氯甲烧-丙酬作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作 为显色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 32、 流份33 - 35,得到3个亚组份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;将亚组份化.2-1经开放0DS柱色 谱，用体积比60 : 40、体积比65 : 35、体积比70 : 30、体积比75 : 25的甲醇-水作洗脱 液进行梯度洗脱，收集体积比60 : 40甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬F、收集体积比65 : 35 甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬C、收集体积比70 : 30甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬D、收集体 积比75 : 25甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬G。
[001引实施例2
[0014] 本发明在具体实施中，具有神经保护作用的异戊締基化黄酬类化合物也可由小叶 莲6kg为原料，W1化、体积比为95 %的乙醇加热回流提取3次，提取溫度为95°C，每次提 取时间为1. 5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于3.化的蒸馈水中，依次W 石油酸、二氯甲烧、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次3.化，时间为1. 5小时；将乙酸乙醋萃 取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用9. 1L 洗脱液，流速为lOmLmin1，每350mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄层色谱 检测分析，用GF254薄层板，分别W体积比1 : 1的石油酸-丙酬和体积比5 : 1的二氯甲 烧-甲醇作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂，105°C加热3-5min， 根据薄层色谱检测结果，分别合并流份1 - 35、流份36 - 85、流份86 - 104、流份105 - 115、 流份 116 - 132、流份 133 - 144、流份 145 - 157、流份 158 - 163、流份 164 - 170、流份 171 -182、流份 183 - 188、流份 189 - 195、流份 196 - 204、流份 205 - 208、流份 209 - 234、流份 235 - 260,得到化.1-Fr. 16个组份；将组份化.2经Se地adexLH-20凝胶柱色谱，甲醇洗 脱，每5mL为一流份，收集35个流份，各个流份经硅胶薄层色谱检测分析，用GF254薄层板， W体积比8 : 1的二氯甲烧-丙酬作为展开剂，W体积比10 : 90的硫酸-乙醇溶液作为 显色剂，105°C加热3 - 5min，根据薄层色谱检测结果，分别合并流份5 - 18、流份19 - 32、流 份33 - 35,得到3个亚组份化.2-1，化.2-2,化.2-3 ;将亚组份化.2-1经开放ODS柱色谱， 用体积比60 : 40、体积比65 : 35、体积比70 : 30、体积比75 : 25的甲醇-水作洗脱液 进行梯度洗脱，收集体积比60 : 40甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬F、收集体积比65 : 35甲 醇-水洗脱液得桃儿屯酬C、收集体积比70 : 30甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬D、收集体积 比75 : 25甲醇-水洗脱液得桃儿屯酬G。
[001引 实施例3
[0016] 本发明在具体实施中，具有神经保护作用的异戊締基化黄酬类化合物也可由小叶 莲8kg为原料，W2化、体积比为85 %的乙醇加热回流提取3次，提取溫度为92°C，每次提 取时间为1. 5小时，减压回收乙醇，得浸膏状乙醇提取物，混悬于2.化的蒸馈水中，依次W 石油酸、二氯甲烧、乙酸乙醋、正下醇萃取3次，每次2.化，时间为1. 5小时；将乙酸乙醋萃 取部位经硅胶柱色谱分离，依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10、100:30、100:50、 100:70、100:100、100:200、0:100的石油酸-丙酬混合溶剂进行梯度洗脱，每一梯度用 11.化洗脱液，流速为13mLmin1，每450mL为一流份，收集260个流份，各个流份经硅胶薄 层色谱检测分析，用GF254薄层板，分别W体积比1 : 1的石油酸-丙酬和体积比