G1/g0期阻滞的五环吲哚喹嗪、其合成、抗肿瘤活性和应用
【专利说明】G1/GO期阻滞的五环间噪喧睫、其合成、抗肿瘤活性和应用 发明领域
[000。 本发明涉及G1/G0期阻滞的五环巧隙哇嗦，即化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基 醜基）-氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙巧，3-a]哇嗦，涉及它们的合成，涉及它们 的抗细胞增殖活性，进一步涉及它们在小鼠移植性肿瘤模型上的抗肿瘤活性。因而本发明 涉及化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化剛巧 [2, 3-a]哇嗦作为G1/G0期阻滞剂的临床应用前景。本发明属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002] 细胞通过增殖产生新细胞代替因为衰老，死亡和创伤所损失的细胞，为机体生长 发育和延续种族提供基础。细胞增殖的过程称为细胞周期。或细胞周期是指细胞从一次分 裂结束开始生长，到下一次分裂结束所经历的过程。细胞增殖周期分为间期和分裂期两个 时期。
[0003] 细胞分裂W后进入间期，完成结构和生物合成的复杂变化。间期又分为DNA合成 前期（G1期），DNA合成期（S期）和DNA合成后期（G2期）H个分期。G1期细胞可分为永 远停留在G1期直至死亡、暂时不增殖和继续增殖H种类型。暂时不增殖的细胞又称Go期 细胞。S初期细胞内迅速形成DNA聚合酶及四种脱氧核巧酸。S期末细胞核DNA复制为细 胞分裂作准备。S期大约持续7~8小时。G2期细胞合成RNA和蛋白质例如组蛋白、微管 蛋白和膜蛋白等，为纺健体和新细胞膜等备足原料，W便进入有丝分裂期。G2期大约持续 1~1.5小时。有丝分裂又称M期。M期是前期、中期、后期和末期构成的连续过程，完成由 一个母细胞分裂成为两个子细胞的任务。一般需1~2小时。
[0004]肿瘤细胞属于持续增殖的G1期细胞，细胞周期是抗肿瘤药物的重要祀点。作用 于肿瘤细胞细胞的化疗药物又称细胞周期特异性药物。虽然有些临床应用的化疗药物，例 如5-氣脈嚼巧，巧喃氣尿嚼巧，阿霉素，自力霉素和阿糖胞巧，影响细胞周期，但缺乏特异 性。由是，肿瘤细胞周期抑制剂成为抗肿瘤药物研究的重要领域。尤其是发明能够让肿瘤 细胞永远停留在G1期的化疗药物，即G1/G0期阻滞剂，是抗肿瘤药物设计的重要方向。不 过，至今没有G1/G0期阻滞剂的成功案例。按照送些理解，发明人提出了五环剛巧哇嗦，即 (6S)-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）-氧化甲基-4,6,7，12-四氨-4-氧化剛巧巧， 3-a]哇嗦，作为G1/G0期阻滞的发明。
【发明内容】
[0005]本发明的下式代表的化合物7a-i，
[0006]
[0007] 7a中AA为k丙氨醜基，7b中AA为k鄉氨醜基，7c中AA为k苯丙氨醜基，7d 中AA为甘氨醜基，7e中AA为k脯氨醜基，7f中AA为k异亮氨醜基，7g中AA为k亮氨 醜基，化中AA为k蛋氨醜基，7i中AA为k色氨醜基。
[0008] 本发明的第二个内容是按照图1的路线制备化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基 醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦仍-i)，包括：
[000引 1)制备1-化2-二甲氧己基）-3-居甲基-1，2,3,4-四氨巧晰（3);
[0010]
[0011] 。制备化巧-3-己醜基-6-居甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦 (6)；
[0012]
[001引如制备化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6,7，12-四 氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦（7a-U。7a中AA为k丙氨醜基，化中AA为k鄉氨醜基， 7c中AA为k苯丙氨醜基，7d中AA为甘氨醜基，7e中AA为k脯氨醜基，7f中AA为k异 亮氨醜基，7g中AA为k亮氨醜基，化中AA为k蛋氨醜基，7i中AA为k色氨醜基。
[0014]
[0015] 本发明的第H个内容是评价化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲 基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦（7a-i)的抗细胞增殖活性。
[0016] 本发明的第四个内容是评价化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲 基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化剛巧[2, 3-a]哇嗦（7a-i)的抗肿瘤活性。
[0017] 本发明的第五个内容是W其中一个化合物为代表，考察对细胞周期的影响。
【附图说明】
[0018] 图1.化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧 化巧隙[2,3-a]哇嗦（7a-U的合成路线.a)二氯亚讽/甲醇；（ii)l，l，3,3-四甲氧基丙 焼，H氣己酸/甲醇；（m)LiAlH4,THF;(iv)双己帰丽，H己胺/丙丽；（v)2N肥1/丙丽； (vUKzCOs/甲醇；（vU)N-苯己醜氨基酸，DCC/册Bt，NMM，THF。7a中AA为k丙氨醜基，7b 中AA为k鄉氨醜基，7c中AA为k苯丙氨醜基，7d中AA为甘氨醜基，7e中AA为k脯氨 醜基，7f中AA为k异亮氨醜基，7g中AA为k亮氨醜基，化中AA为k蛋氨醜基，7i中AA为k色氨醜基。
【具体实施方式】
[0019] 为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。送些实施例完全是例证性的，它 们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0020] 实施例1制备k色氨酸甲醋盐酸盐（1)
[0021] 50ml无水甲醇在冰浴下滴加3. 75ml(50mmol)氯化亚讽，30min内滴加完毕后，分 批加入9. 20g(42mmol)k色氨酸，室温揽拌2地，化"(：肥13 :Me0H=2 : 3)监测至原料 消失终止反应。水泉抽走未反应完的氯化亚讽S0C12和肥1，用己離反复研磨得白色固体， 甲醇-己離重结晶，得心色氨酸甲醋盐酸盐为无色固体。收率在85-99%之间。ESI-MS(m/ e) 219 [M+Hr，烙点、旋光等物理常数与已报道的数据一致。
[002引实施例2制备1-化2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰駿酸甲醋似
[0023] 在250ml的圆底烧瓶中加入k色氨酸甲醋盐酸盐20g(78. 6mmol)，100ml甲醇， 加入H氣己酸20ml，活化半小时，再加入1，1，3, 3-四甲氧基丙焼16mU97. 6mmol)，揽拌下 升温到8(TC，保温反应10小时，TLC监测原料斑点消失，将反应液降温至室温，滴加饱和 化肥化水溶液调节抑至中性，减压回收甲醇，残余物中加入100ml二氯甲焼，分液后水层 用二氯甲焼萃取巧0mlX3)，合并有机层，无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残余 物用硅胶柱层析（石油離：丙丽=2 : 1)纯化得14. 2g(57% )化合物2,为黄色油状物。 ESI-MS(m/e)319[M+Hr。
[0024] 实施例3制备1-化2-二甲氧己基）-3-居甲基-1，2,3,4-四氨巧晰（3)
[002引在250ml的圆底烧瓶中加入50ml无水四氨巧喃，揽拌下分批加入LiAlH40. 9g(23. 6mmol)，活化半小时。将5g(15. 7mmol)化合物（2)溶于50ml无水四氨巧 喃中，再将其缓慢滴入反应瓶中，升温到4(TC，保温反应3小时，TLC监测原料斑点消失。 将反应液降温至室温，加入0. 5mll5%的化0H水溶液，卒灭反应，用布什漏斗过滤除去铅 盐，滤液减压浓缩至干，加入己酸己醋，己離磨洗得到目2. 52g(54% )合物3,为无色粉末。 ESI-MS(m/e)291[M+Hr。
[002引实施例4制备1-化2-二甲氧己基）-2- (1，3-二撰基了基）-3- (1，3-二撰基了 基）氧化甲基-1,2, 3,4-四氨巧晰（4)
[0027]在100ml的圆底烧瓶中加入1.Og(3. 8mmol)化合物（3)，再加入20ml丙丽揽拌溶 解，在冰浴下加入双己帰丽1ml(11. 9mmol)，H己胺0. 4ml。反应液室温揽拌24小时，TLC监 测原料斑点消失，加入0. 2ml水卒灭未反应的双己帰丽，减压回收溶剂。残余物中加入50ml 二氯甲焼和50ml饱和化Cl水溶液，分液后水层用二氯甲焼萃取（30mlX3)，合并有机层，无 水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，残余物用硅胶柱层析（石油離：丙丽=6 : 1)纯 化得1. 32g(76% )化合物4,为黄色粉末。ESI-MS(m/e)459[M+田+。
[002引实施例5制备3-己醜基-6- (1，3-二撰基了基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧 化巧隙[2,3-a]哇嗦巧）
[0029]在100ml的圆底烧瓶中加入1. 98g(4. 3mmol)化合物（4)，加入50ml丙丽揽拌溶 解，在冰浴下加入3ml盐酸水溶液（2mol/L)，室温反应12小时。TLC监测原料斑点消失，加 入饱和NaHC〇3水溶液调节抑至中性，减压回收溶剂，残余物中加入50ml二氯甲焼，分液后 水层用二氯甲焼萃取（30mlX3)，合并有机层，无水硫酸钢干燥，过滤，滤液减压浓缩至干， 残余物用硅胶柱层析（石油離：丙丽=6 : 1)纯化得1.26g(75%)化合物5,为黄色粉末。 ESI-MS(m/e)393[M+Hr。
[0030] 实施例6制备化巧-3-己醜基-6-居甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙巧，3-a] 哇嗦化）
[0031] 在100ml的圆底烧瓶中加入1.06g(2. 7mmol)化合物巧），加入20ml甲醇揽拌 溶解，再加入745mg(5.4mol/L)碳酸钟粉末，室温反应8小时，有固体生成。TLC监测原 料斑点消失，过滤，滤饼用甲醇洗，得到黄色粉末338mg，即目标化合物化）。滤液减压浓 缩至干，加入丙丽溶解，过滤除盐，滤液用硅胶柱层析（二氯甲焼：甲醇=40 : 1)纯化 得 709mg(85% )化合物 6,为黄色粉末。Mp;210-2irC;[0]。25 = -42. 7(c= 0. 10,甲 醇）；IR(邸r) ;3321，2974, 2922,1655,1551，1429,1364,1327,974,831，743cm1 ;ESI-MS(m/ e)307[M-H] ;1H-醒R(300MHz，DMS0-de) :5/ppm= 11.83(s，lH)，8. 10(d，J= 7.8Hz, 1H)，7. 65(d，J= 7. 8Hz，lH)，7. 45(d，J= 8.lHz，lH)，7. 28(t，J= 7. 8Hz，lH)，7.ll(t， J= 7. 8Hz，IH)，6.82 (d，J= 7. 8Hz，IH) ,5.40-5. 46 (m，lH)，5.18 (t，J= 6.0Hz，IH)， 3. 54-3. 60(m，lH)，3. 28-3. 41(m，2H)，3.ll(dd，J= 6. 9Hz，J= 17.lHz，lH)，2. 59(s，lH); "C-醒R(75MHz，DMSO-de) ;S/ppm= 196. 62,160. 68,142. 75,142.