一种利用双酶解法制备肝素钠的方法

文档序号:9465816阅读:397来源:国知局
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法
【专利说明】
[0001](一)
技术领域
本发明属于生化行业领域,特别涉及一种利用双酶解法制备肝素钠的方法。
[0002](二)
【背景技术】
肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖,主要存在与肥大细胞中,具有抗凝血作用,被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000— 37500,对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体,肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视.也是我国主要的出口药物之一,随着研究的深入,人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用,还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素钠粗品是我国的传统出口产品,在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后,肝素钠产率低,肝素钠产品质量不稳定。
[0003](三)

【发明内容】

本发明为了弥补现有技术的不足,提供了一种疗效快、治愈率高的利用双酶解法制备肝素钠的方法。
[0004]本发明是通过如下技术方案实现的:
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法,包括以下步骤:
(1)酶解:取小肠粘膜,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5-8,每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45_55°C,保温I小时后,过80目滤膜,收集过滤液,在滤液中加入2709碱性蛋白酶,保温I小时;
(2)升温:步骤(I)结束后,将步骤(I)中酶解中的滤液加热至温度60-65°C,保温5分钟,过80目滤膜,收集过滤液;
(3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中,每40L滤液中加4-6g树脂,进行搅拌,然后降温至55°C,保温55°C并搅拌吸附8小时后过滤,放出废液;
(4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤后的树脂,每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml,保持55°C洗脱,收集洗脱液;
(5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤,然后移入沉淀罐中,加入乙醇沉淀肝素钠;
(6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
[0005]其中,步骤(I)中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4 ;小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。
[0006]其中,步骤(I)中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。
[0007]其中,步骤(I)中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。
[0008]其中,步骤(2 )中所述步骤(I)中酶解中的滤液的温度为50-55 °C。
[0009]传统生产工艺在肝素钠生产过程中,往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉,致使产品收率低。本发明通过双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度,减轻污染,降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用,每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
[0010]本发明的有益效果是:本发明能解决单酶解工艺中酶解液活性低的问题,采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。
[0011](四)【具体实施方式】实施例1:
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(O酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜500kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.5%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.8,加胰酶100g,加热至温度升至51°C,保温I小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶125g,保温I小时。
[0012](2)升温:步骤(I)结束后,加热至温度升至63°C,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
[0013](3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至550C,加500g树脂,保温55°C,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
[0014](4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水694.4ml,保持55°C洗脱。
[0015](5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
[0016](6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
[0017]实施例2:
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(I)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜600kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5,加胰酶120g,加热至温度升至45°C,保温I小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶300g,保温I小时。
[0018](2)升温:步骤(I)结束后,加热至温度升至60°C,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
[0019](3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至550C,加650g树脂,保温55°C,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
[0020](4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水903ml,保持55°C洗脱。
[0021](5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
[0022](6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
[0023]实施例3:
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法,通过下述步骤实现:
(I)酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜800kg,加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH8,加胰酶160g,加热至温度升至55°C,保温I小时后,过80目膜过滤,收集过滤液,加入2709碱性蛋白酶300g,保温I小时。
[0024](2)升温:步骤(I)结束后,加热至温度升至65°C,保温5分钟,过80目膜过滤,收集过滤液。
[0025](3)树脂吸附:步骤(2)结束后,将上述所得过滤液加入到吸附罐中,搅拌,降温至550C,加1200g树脂,保温55°C,搅拌吸附8小时,过滤,放出废液。
[0026](4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤树脂,各加饱和盐水1667ml,保持55°C洗脱。
[0027](5)醇沉:步骤(4)结束后,反复冲洗过滤后的树脂,将冲洗干净的树脂,倒入到洗脱器,收集洗脱液,将洗脱液过滤移入沉淀罐中,加入酒精沉淀肝素钠。
[0028](6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。
【主权项】
1.一种利用双酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:包括以下步骤:(I)酶解:取小肠粘膜,加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%,与水一起置于酶解罐中,调节PH7.5-8,每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45_55°C,保温I小时后,过80目滤膜,收集过滤液,在滤液中加入2709碱性蛋白酶,保温I小时; (2)升温:步骤(I)结束后,将步骤(I)中酶解中的滤液加热至温度60-65°C,保温5分钟,过80目滤膜,收集过滤液; (3)树脂吸附:将步骤(2)中所得过滤液加入到吸附罐中,每40L滤液中加4-6g树脂,进行搅拌,然后降温至55°C,保温55°C并搅拌吸附8小时后过滤,放出废液; (4)洗脱:步骤(3)结束后,收集过滤后的树脂,每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml,保持55°C洗脱,收集洗脱液; (5)醇沉:将步骤(4)中收集的洗脱液过滤,然后移入沉淀罐中,加入乙醇沉淀肝素钠; (6)烘干:步骤(5)结束后,将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水,即可得到肝素钠。2.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(I冲所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4 ;小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2 ο3.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(I冲所述小肠粘膜与水的质量比1:9。4.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(I冲所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。5.根据权利要求1或2所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法,其特征在于:步骤(2)中所述步骤(I)中酶解中的滤液的温度为50-55 °C。
【专利摘要】本发明属于生化行业领域,特别涉及一种利用双酶解法制备肝素钠的方法。该利用双酶解法制备肝素钠的方法包括以下步骤:采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离,然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来,提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度,减轻污染,降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用,每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
【IPC分类】C08B37/10
【公开号】CN105218705
【申请号】CN201510630373
【发明人】谢成君, 甄爱华, 刘敏
【申请人】山东绅联生物科技有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月29日
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