一种替代抗生素饲料添加剂的地衣芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种地衣芽抱杆菌及其应用，特别设及一种替代抗生素饲料添加剂的 地衣芽抱杆菌及其应用，属于农业生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 抗生素在畜牧业中作为抗菌促生长剂已有60多年的历史。抗生素作为促生长剂 大幅度降低饲养成本、发病率和死亡率，提高动物生产性能，从而显著提高畜牧业的劳动生 产率和经济效益。但抗生素长期使用直接危害人类健康和公共卫生，长期低剂量饲用抗生 素增加细菌的抗药性，加速了 "超级细菌"的产生；饲用药物W原形或代谢物的形式随动物 排泄物排放于环境中，也会直接导致环境生态的改变，并污染水源和±壤，养殖业排放到环 境中的抗生素已成为一种新的重要污染源，并引起了日益严峻的社会问题。目前世界上有 20多种抗生素及十几种合成抗菌剂药物被应用到饲料中。饲用抗生素存在的主要问题表现 在：①破坏动物体内原有的微生态平衡，造成对抗生素非敏感的微生物大量繁殖，从而产生 了新的感染；②耐药菌的产生，有抗药性的病原微生物大量繁殖后，就可能使人和动物患病 机会增多，并给疾病的治疗带来了困难，甚至使抗生素失去作用；③畜禽产品中抗生素的残 留，对人体健康带来威胁；④机体免疫力下降，更容易感染疾病。近年来，消费者对"无抗" 畜产品的呼声也越来越高，一些国家已开始限制饲用抗生素的使用，瑞±在1992年即禁止 使用饲用抗生素；2006年欧洲规定饲料中禁止添加抗生素，2013年美国FDA明确=年后饲 料中禁止添加抗生素。2015年9月1日我国农业部公告第2292号，规定在我国食品动物中 禁止使用洛美沙星、培氣沙星、氧氣沙星、诺氣沙星4种兽药。
[0003] 20世纪80年代W来，研究开发饲料中抗生素替代产品日益受到重视。饲用微生物 制剂作用功能与抗生素添加剂最相近，而且不存在耐药性二重感染和有害物质残留等抗生 素弊端，而且可改善畜产品肉质风味，有利于生态环境，是最有潜力的抗生素饲料添加剂替 代广品。
[0004] 目前欧洲等发达国家的无抗生素和生长促进剂饲料及养殖从技术到产业处于领 先水平，其主要措施是通过添加微生物和酶制剂等现代生物技术措施，通过肠道保健，达到 促生长和防病抗病目的，实现对抗生素的替代。我国在无抗生素饲料添加剂领域起步较晚， 从理论研究的系统深入性和产业化推广应用均与发达国家存在较大差距。 阳00引 中国专利文献CN101965912A(申请号CN201010274044. 5)公开了一种替代抗生素 的微生物饲料添加剂，主要由枯草芽抱杆菌、酿酒酵母菌、黑曲霉菌、米曲霉菌等组成；其制 备方法为：各菌种的母种由液态发酵而成，生产种由母种固态发酵而成，生产种进一步固态 发酵得到菌种，将菌种按一定比例混合即得本微生物饲料添加剂。该添加剂能提高动物非 特异免疫力，增强机体抗应激能力，激活动物生长潜能，全面提高生产性能，解决畜禽产品 品质低下、风味缺失，仔猪腹泻、母猪便秘、鸡鸭粪便稀漉，饲料原料抗营养因子多、消化利 用低的问题。
[0006] 中国专利文献CN103005210A(申请号CN201210569755. 4)公开了一种可替代抗 生素的猪饲料添加剂，其配方中的组分及其重量份数为：神曲1-5份、当归1-5份、黄巧1-5 份、山植1-5份、党参1-5份；巧樣酸10-20份，乳酸10-20份，包被憐酸20-30份，微生态制 剂5-10份，酵母细胞壁多糖5-10份，复合植物精油1-5份W及载体5-10份。
[0007]W上专利文献，没有明确使用地衣芽抱杆菌，利用酿酒酵母菌、黑曲霉菌、米曲霉 菌等菌种进行，采用发酵效率较低的固体发酵技术，通过提高动物非特异免疫力，增强机体 抗应激能力，提高动物生产性能，没有明确替代抗生素的种类和作用机制；有的是与中药、 有机酸等配合，没有突出说明在专利产品中微生态制剂的具体种类和在产品中起的作用。
【发明内容】
[0008] 本发明针对现有技术的不足，提供一种地衣芽抱杆菌及其应用。 阳009] 本发明的技术方案如下：
[0010] 一株地衣芽抱杆菌度acillusIicheniformis)SDZD02,于2015年4月2日保藏 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCCNO. 10682。
[0011] 上述地衣芽抱杆菌度acillus Iicheni化rmis) SDZD02在制备替代畜牧业饲料抗 生素添加剂中的应用。
[0012] 根据本发明优选的，所述替代畜牧业抗生素饲料添加剂，地衣芽抱杆菌度acillus Iicheniformis)SDZD02 含量不少于 2.OXl〇i°C即/ 克。
[0013] 上述替代畜牧业抗生素饲料添加剂的制备方法，步骤如下：
[0014] (1)取活化后的地衣芽抱杆菌度acillus Iicheni化rmis) SDZD02斜面种子，在无 菌条件下接种于摇瓶培养基中，培养得摇瓶种子液；
[0015] (2)将步骤（1)制得的摇瓶种子液接种于种子培养基中，在通气揽拌条件下发酵 罐培养，制得发酵罐种子液；
[0016] (3)将步骤似制得的发酵罐种子液接种于发酵培养基进行发酵培养，至芽 抱率高于90%;然后将发酵液经70~85 °C处理25~40分钟，制得芽抱含量不低于 2.OXl〇i°CFU/mL的发酵液；
[0017] (4)将步骤（3)制得的发酵液经过滤、干燥，制得地衣芽抱杆菌菌粉，加入稀释剂， 制得地衣芽抱杆菌芽抱含量不低于2.OXl〇i°CFU/克的替代畜牧业抗生素饲料添加剂。
[001引根据本发明优选的，所述步骤（1)中的活化后的地衣芽抱杆菌度acillus Iicheni化;rmis)SDZD02斜面种子，采用如下方法制备：
[0019] 将地衣芽抱杆菌度acillusIicheni化rmis)SDZD02接种于活化培养基中，32~ 35°C活化培养34~40h，制得活化后的地衣芽抱杆菌度acillusIicheniformis)SDZD02斜 面种子；
[0020] 所述活化的固体培养基，每升组分如下：
[0021] 蛋白腺10克，酵母膏5克，氯化钢10克，琼脂粉15克，蒸馈水定容至1L。 阳02引根据本发明优选的，所述步骤（1)中摇瓶培养为：32~35°C、转速180~20化pm的条件下，摇瓶培养16~24h，摇瓶培养基占摇瓶总体积的65~70% ; 阳023] 所述摇瓶培养基，每升组分如下：
[0024] 蛋白腺10克，酵母膏5克，氯化钢10克，蒸馈水定容至1L。
[00巧]根据本发明优选的，所述步骤（2)中，发酵罐培养为：溫度32~35°C、通气量为 1 : (1. 0~1. 1)发酵液体积mV空气体积m3 ?分钟、压力0. 015~0. 02MPa、揽拌速度为 220~26化pm的条件下，发酵罐培养16~20h;接种量为2~5% (体积百分比），种子培 养基占发酵罐体积的65~70%;
[00%] 所述种子发酵培养基组分如下，均为重量份：
[0027] 蛋白腺0. 1~2份、酵母膏0. 1~2份、玉米淀粉0. 2~2份、大豆粉0. 2~3份、 氯化钢0.Ol~0. 2份、硫酸氨0. 02~0. 1份、硫酸儘0.Ol~0. 5份，水90. 2~99. 36份。
[0028] 根据本发明优选的，所述步骤（3)中，发酵培养为：溫度32~35°C，通气量为 1 : (1. 0~1. 1)发酵液体积mV空气体积m3 ?分钟，压力0. 015~0. 02MPa，揽拌速度为 200~24化pm，发酵培养16~20h;接种量为5~10% (体积百分比），发酵培养基占发酵 罐体积的60~70%;
[0029] 所述发酵培养基组分如下，均为重量份：
[0030] 玉米淀粉0. 5~5份、豆饼粉0. 5~4份、糖蜜0. 3~2份、氯化钢0.O