一种新的柠檬苦素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从东风桔的干燥根中分离得到的一种具有血 管保护作用的柠檬苦素化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 东风桔Atalantiabuxifolia(Poir).Oliv.为芸香科酒饼勒属植物，始载于《岭南 采药录》，目前为《全国中草药汇编》及《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册附录收载。 东风桔药用根与根茎，其性辛、苦，微温，归肺、胃、脾经，有祛风解表、化痰止咳、理气定痛的 功效。海南、广西、广东、福建等地历来沿用本品治疗急、慢性气管炎，临床效果较好，另外有 研究表明其具有较好的化痰、止咳、平喘的功效。东风桔作为一种民间用药，其疗效明显，而 且广泛应用于各大医院复方中，引起了国内外学者的兴趣，对其研究逐渐深入。随着研究的 不断深入，东风桔的化学成分和药理活性越来越受到人们的重视。
[0003] 东风桔包含的化学成分复杂多样，迄今为止主要分离得到挥发油、柠檬苦素类、生 物碱、香豆素类、黄酮类等成分。柠檬苦素类化合物是由大戟烷或甘遂烷型三萜衍生而来的 一类高度氧化的四降三萜类化合物，是芸香科植物主要特征的化学成分，结构独特，具有明 显的抗癌和抗菌等生物活性。近年来的研究比较多，主要集中在其化学结构、生物合成和生 物活性等方面。芸香科植物中柠檬苦素类化合物主要分为3类：柠檬苦素苷元类、降解型柠 檬苦素类和糖苷型柠檬苦素类，其中以苷元居多。
[0004] 海南、广西、广东、福建等地历来沿用东风桔治疗急、慢性气管炎，取得了较好的临 床效果，但对于本品药理活性研究的文献报道相对比较少。曾广辉等报道东风桔药材具有 止咳、化痰的功效，能减少痰液蛋白的水平，其生物碱有解痉作用，平喘效果较好。东风桔糖 衣片是以东风桔的根与茎经过水煎液提取而成，在对东风桔糖衣片的止咳平喘药理实验研 究中，用18~22g小鼠按成人20倍剂量ig给药，浓氨水喷雾致咳，EDT5。为131. 9%，表明 其有止咳作用；用220~250g豚鼠以磷酸组织胺喷雾致喘，给药前致喘时间为136s，给药 后为412s，平喘有效率302. 94%，证明东风桔糖衣片有平喘作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从东风桔的干燥根中分离得到的一种具有血管保护作 用的柠檬苦素化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)东风桔的干燥根粉碎， 用乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁 醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤（a)中乙酸乙 酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用10~20%乙醇和70~80%乙醇洗脱，收集70~80%乙 醇洗脱液，减压浓缩得70~80 %乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤（b)中70~80 %乙醇洗脱浸膏 用正相硅胶分离，依次用体积比为75~85:1、45~55:1、25~35:1、10~20:1和0. 5~ 1.5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为15~25:1、10~14:1和4~6:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到 3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为 65~75%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的 化合物（I)。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80~90%。
[0012] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为85 %。
[0013] 进一步地，步骤（b)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，依次用15%乙醇和75% 乙醇洗脱，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏。
[0014] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载体。
[0015] 所述的化合物（I)在制备血管保护的药物中的应用。
[0016] 所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。
[0017] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0018] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0019] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0020] 说明书附图
[0021] 图1为化合物（I)结构式；
[0022] 图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0024] 实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0025] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0026]制备方法：（a)东风桔的干燥根（8kg)粉碎，用85%乙醇热回流提取（25LX3次）， 合并提取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和 的正丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（355g)和正丁醇萃取 物；(b)步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，依次用15%乙醇（8L)和75% (12L)乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（136g) ;(c)步骤 (b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为80:1 (8个柱体积）、50:1 (8个 柱体积）、30:U6个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；(d)步骤（c)中组分4 (31g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比 为20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积）和5:U6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2 (llg)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体 积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8-10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得 到纯的化合物（I) (23mg)。
[0027]结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z667. 3512,结合核磁特征可得分子式为 QAA。，不饱和度为 11。核磁共振氢谱数据 5H(ppm，DMS0-d6,400MHz) :H-1(3.48,ddd，J =8· 7,3· 2,2· 4)，Η-2(2· 24,m)，Η-2(1· 89,ddd，J= 16. 3,2· 8,2· 4)，Η-3(5· 01，dd，J= 2· 8, 2· 8)，Η-5 (2· 22,d，J= 12. 5)，Η-6 (4· 12,dd，J= 12. 5, 3· 2)，Η-7 (5· 73,d，J= 3· 2)， Η-9(2· 98,dd，J= 1L8,7· 3)，H-11(L66,L71，m)，H-12(L48,ddd，J= 13. 2,9· 8,2· 9)， Η-12(2·36,m)，Η-15 (5.80,s)，Η-18 (1.01，s)，Η-19 (0.99,s)，Η-21 (7.44,dd，J= 1.7， 0· 8)，Η-22 (6· 27,dd，J= 1· 7,0· 8)，Η-23 (7· 30,dd，J= 1· 7,1· 7)，Η-28 (3· 28,br，d，J= 7.6)，H-28(3.44，d，J= 7.6)，Η-29(1· 17,s)，H-30 (1.25,s)，H-2'（2.22,m)，H-3'（1.41， 1. 68,m)，H-4'（0· 90,t，J= 7. 5)，H-5'（1. 14,d，J= 7. 0)，H-2"（2. 22,m)，H-3"（1. 38， 1.65，m)，H-4"（0.82，t，J= 7·4)，Η-5"（1. 10，d