一种新的柠檬苦素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从枳实的干燥幼果中分离得到的一种柠檬苦 素类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 枳实为临床常用中药，为芸香科植物酸橙CitrusaurantiumL.及其栽培变种或 甜橙CitrussinensisOsbeck的干燥幼果。5~6月收集自落的果实，除去杂质，自中部横 切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥。枳实的产地主要有四川、江西、湖 南、福建等地，以江西产酸橙为道地药材，且以江西产鹅眼枳实质量最好。枳实具有破气消 积，化痰散痞等功效。临床用于积滞内停，痞满胀痛，泻痢后重，大便不通，痰滞气阻，胸痹， 结胸，脏器下垂，《中医方大辞典》收录的方剂中超过7%的方剂中含有枳实，足见枳实药材 在临床应用之广。
[0003] 枳实的主要有效成分为挥发油类、生物碱类及其黄酮类成分。其中，挥发油类主要 成分为右旋柠檬烯、枸橼酸等；生物碱类成分主要为辛弗林、N-甲基酪胺；黄酮类成分主要 为柚皮苷、新橙皮甙及橙皮甙。基原不同的枳实其辛弗林、柚皮苷和橙皮苷的含量差异很 大。酸橙果实未成熟时含新橙皮甙，在果实成熟时新橙皮甙消失。甜橙果实不含新橙皮苷。 不同生长期采摘的枳实药材、不同粒径大小的枳实药材其有效成分的含量也不同。枳实挥 发油中的成分除与品种有关外，还与产地有关。辛弗林的含量随着采摘期的延长，辛弗林的 含量降低明显，但其含量差异与品种、产地没有明显的相关性。随着枳实粒径的增加，枳实 中柚皮苷的含量呈上升趋势。湘枳实中总生物碱和挥发油的含量最高，但与赣枳实、绿衣枳 实无明显差异，甜橙枳实含量最低。其中，辛弗林的含量以鹅眼枳实最高，橙皮苷的含量以 绿衣枳实最高，柚皮苷的含量以柚含量最高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种从枳实的干燥幼果中分离得到的一种柠檬苦素类化合 物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0005] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0006] 具有下述结构式的化合物（I ):
[0007]
[0008] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将枳实的干燥幼果粉 碎，用65~75 %乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和 水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤 (a)中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10 %乙醇洗脱6个柱体积，再用70 %乙醇洗脱 8个柱体积，收集70 %洗脱液，减压浓缩得70 %乙醇洗脱浓缩物；（c)步骤（b)中70 %乙醇 洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到4个组分；（d)步骤（c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、 5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烷基硅 烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱 体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0009] 进一步地，步骤（a)中，用70%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0010] 进一步地，所述大孔树脂为D101型大孔吸附树脂。
[0011] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载体。
[0012] 所述的化合物（I)在制备神经保护的药物中的应用。
[0013] 所述的药物组合物在制备神经保护的药物中的应用。
[0014] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0015] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0016] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
[0017] 说明书附图
[0018] 图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算E⑶和实验E⑶图；
[0020] 图3MTT代谢率检测Αβ25 35对PC12细胞的毒性作用；
[0021 ] 图4Αβ25 35对PC12细胞LDH释放率的影响；
[0022] 图5Αβ25 35和/或化合物（I)对PC12细胞LDH释放率的影响。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0024] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0025] 乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0026] 实施例1:化合物（I)分离制备及结构确证
[0027] (a)枳实的干燥幼果（10kg)粉碎，用70%乙醇热回流提取（30LX3次），合并提 取液，浓缩至无醇味（6L)，依次用石油醚（6LX3次）、乙酸乙酯（6LX3次）和水饱和的正 丁醇（6LX3次）萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（375g)和正丁醇萃取物； (b) 步骤（a)中乙酸乙酯萃取物用D101大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱6个柱体积，再 用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（125g); (c) 步骤（b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1 (8个柱体积）、 20:1 (8个柱体积）、10:1 (8个柱体积）和5:1 (10个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 得到4个组分；（d)步骤（c)中组分4(25g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8 个柱体积）、5:1 (8个柱体积）和2:U6个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组 分；（e)步骤（d)中组分2 (12g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为 65%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I) (35mg)。
[0028] 结构确证：HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z739. 2914,结合核磁特征可得分子式 为C37H4S014，不饱和度为 14。核磁共振氢谱数据δH (ppm，DMS0-d6, 400MHz) :H-1 (4. 72， dd，J= 3. 0,2. 4)，H-2(2. 11，ddd，J= 16. 8,3. 0,3. 0)，H-2(2. 21，ddd，J= 16. 8,2. 4， 2. 4)，H-3(4. 87,dd，J= 3. 0,2. 4)，H-5(2. 48,d，J= 12. 7)，H-6(4. 01，dd，J= 12. 7， 3. 1)，H-7(4.96, d，J = 3. 1)，H-9(2.84, d，J = 3.5)，H-ll(5.00, ddd，J = 9·6,3·9， 3. 5)，Η-12(2· 02, dd，J = 15. 1，9· 6)，H-12(L 39, dd，J = 15. 1，3· 9)，Η-15(3· 67, s)， H-17 (5.46, s)，H-18 (1. 17, s)，H-19 (1.13, s)，H-21 (7.27, br，s)，H-22 (6.19, br，s)， H-23 (7. 29, dd，J = 1. 7,1. 7)，H-28 (3. 45, br，d，J = 7. 7)，H-28 (3. 42, d，J = 7. 7)， H-29(l. 09，s)，H-30(1. 22，s)，H-3'（6. 78，dq，J = 7. 1，1. 3)，H-4'（1. 66，br，d，J = 7. 1)， H-5'（1.73, br，s)，l-〇Ac (1.81，s)，7-0Ac (1.98, s)，ll-〇Ac (1.98, s);核磁共振碳谱数 据δ c (ppm, DMS0-d6,125Hz) :72. 0 (CH，1-C)，26. 2 (CH2, 2-C)，70. 1 (CH，3-C)，41. 7 (C，4-C)， 41. 1 (CH，5-C)，71. 3 (CH，6-C)，72. 9 (CH，7-C)，43. 1 (C，8-C)，38. 6 (CH，9-C)，39. 1 (C，10-C)， 65. 4 (CH2,11-C)，37. 4 (CH，12-C)，36. 9 (C，13-C)，67. 6 (C，14-C)，53. 4 (CH，15-C)，165. 7 (C， 16-C)，77. 2(CH，17-C)，17. 5(CH3, 18-C)，16. 3(CH3,19-C)，119. 0(C，20-C)，140. 3(CH， 21-C)，108. 8 (CH，22-C)，142. 4 (CH，23-C)，77. 3 (CH2, 28-C)，18. 4 (CH3, 29-C)，19. 4 (CH3， 30-C)，165.5(C，l' -C)，127.7(C，2' -C)，136.7(CH，3' -C)，ll. 1(CH3,4' -C)，13.4(CH3， 5' -C)，168. 1 (C，l-〇Ac)，20. 3 (CH3, l-〇Ac)，168. 0 (C，7-0Ac)，20. 7 (CH3, 7-0Ac)，168. 7 (C， ll-0Ac)，19. 9(CH3，ll-0Ac);碳原子标记参见图1。NMR数据表明该化合物含有一个3-取 代呋喃环（δ Η7·29,7· 27和6. 19)，三个甲基（δ H1. 22,1.27,1. 13,1.09)，一个巴豆酰氧 基（SC165· 5,136. 7,127. 7,13.4,和11. 1)，三个乙酰氧基（δ Η1.98,1.98和1.81)和内酯 羰基（δC165. 7)。HMBC数据显示该化合物还含有6, 28-醚桥。HMBC谱中，H-l(δ4. 72)、Η-7 (δΗ4. 96)和H-l1 (δΗ5. 00)与相应的酯羰基碳δC168. 1、168. 0和168. 7的相关性说 明三个乙酰氧基分别与C-l、C-7和C-11相连。此外，HMBC谱中Η-3(δΗ4. 87)与相应酯羰 基碳（δC165. 5)的相关性表明巴豆酰氧基位于C-3位上。ROESY谱中Η-6与Η3-29,Η3-29 与Η-2β，Η-2β与Η3-19 以及Η3-19 与Η3-30 的相关性表明Η-2β，H-6,Me-19,Me-29 和 Me-30为β构型；J5』（12. 7Ηζ)的耦合常数以及ROESY谱中Η-5/Η-9，Η-9/Η3-18的相关性确 定了Η-5,Η-9和Me-18为α构型。此外，C-l，C-3,C-7和C-11的构型是建立在较小的耦 合常数基础上的[1,^/^(3.0/2.4^),J2a/{S，3(3.0/2.4Hz)，J6,7(3. 1Hz)和J9,n(3.5Hz)]。 ROESY谱中Η-12β与H-17为交叉峰，说明了H-17为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和 R0ESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体