一种生物活性肽的酶法提取工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于多肽提取技术领域，具体涉及一种生物活性肽的酶法提取工艺。
【背景技术】
[0002]生物活性肽是指具有特殊生物活性的多肽。在蛋白质的空间结构中具有生物活性的多肽类，通过相应的酶解，可将其释放出来，单独从蛋白链中释放片断，可显示出独特的生物活性，形成的生物活性肽。生物活性肽具有丰富的生物学功能，如降胆固醇、改善元素吸收和矿物质运输、免疫调节抗衰老、抗血栓、抗高血压、激素作用、促进生长、抑制细菌和病毒、抗癌抗氧化、调节口味和硬度、食品风味等。所以，生物活性肽是选药物、制疫苗及食品添加剂的天然资源库。
[0003]酶水解法是选择合适的蛋白酶水解各种蛋白质来获得生物活性肽，与酸水解和碱水解比较，酶法水解蛋白质具有多种优点:反应条件温和，反应时间短，效率高，不破坏氨基酸，产品纯度高，产物易分离，成本低等。影响酶解过程的主要因素有:底物添加量、酶浓度、反应温度和初始pH值等。高温、过酸或者过碱对酶的变性是不可逆的，因此，在试验中尤其要注意控制初始PH及反应温度，以防止酶变性失活。蛋白酶的作用是水解蛋白质中的肽键，将大分子长链蛋白质变成长短不一的肽段和氨基酸。由于不同蛋白酶酶解位点不同，因此，同样的蛋白质在不同酶作用下可产生不同的多肽片段。研究表明，一些抑制肽的形成需要2种以上的蛋白酶参与水解。因而，如何选择符合生产要求的复合蛋白酶就要根据生物活性肽的结构功能特性来定。目前国内外针对酶解法制备多肽已做了大量研究。武萌萌等用碱性蛋白酶水解螺旋藻蛋白制备生物活性肽；朱艳华用碱性蛋白酶酶解玉米粉获得生物活性肽，此外还有酶解黑豆、金丝枣、银杏等各种来源的生物活性肽，目前生物活性肽酶解时间长，通常在几个小时或几十个小时不等，酶用量多，操作周期长，生产效率低。
【发明内容】
[0004]为了解决上述问题，本发明提供一种生物活性肽的酶法提取工艺，在酶解过程中加入氨基酸，可以大幅缩短酶解时间，减少蛋白酶的用量。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
一种生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，在加入蛋白酶酶解时，同时加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根据提取原料的质量添加，每lg提取原料添加10~30mg氨基酸。
[0006]氨基酸的添加量根据提取原料的质量每lg提取原料添加20mg。
[0007]酶解时加入的蛋白酶为碱性蛋白酶时，加入的氨基酸为碱性氨基酸。
[0008]酶解时加入的蛋白酶为中性蛋白酶时，加入的氨基酸为中性氨基酸。
[0009]酶解时加入的蛋白酶为酸性蛋白酶时，加入的氨基酸为酸性氨基酸。
[0010]所述碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸或者组氨酸中的至少一种。
[0011]所述中性氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸或者甲硫氨酸中的至少一种。
[0012]所述酸性氨基酸为天冬氨酸或者谷氨酸中的至少一种。
[0013]有益效果:本发明提供一种生物活性肽的酶法提取工艺，在酶解过程中加入氨基酸，可以大幅缩短酶解时间，减少蛋白酶的用量。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例中用凯氏定氮法测定溶液中的多肽含量。碱性蛋白酶购自于上海中信生物有限公司，中性蛋白酶购自于上海蓝季科技发展有限公司。
[0015]实施例1黑豆多肽的酶法提取工艺
一种黑豆多肽的酶法提取工艺，取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸馈水600mL，调节pH为9.0，温度为50°C，加入200U碱性蛋白酶，加入lg赖氨酸，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的前30min，多肽含量呈直线上升趋势，30min以后趋于稳定，可见酶解完全需要30min。
[0016]对比例1
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸馏水600mL，调节pH为9.0，温度为50°C，加入200U碱性蛋白酶，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的8h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，8h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要8h。
[0017]对比例2
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸馏水600mL，调节pH为9.0，温度为50°C，加入2000U碱性蛋白酶，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的4h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，4h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要4h。
[0018]对比例3
取50g黑豆，粉碎至200目，加蒸馏水600mL，调节pH为9.0，温度为50°C，加入200U碱性蛋白酶，加入lg丝氨酸，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的3h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，3h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要3h。
[0019]根据实施例1及对比例1、2和3中可以看出，在添加碱性氨基酸的情况下，水解酶用量少，且水解时间短，30min即可完成酶解反应、在碱性蛋白酶的条件下，添加中性氨基酸虽然能在一定程度上缩短酶解时间，但是效果远远低于添加碱性氨基酸带来的效果。
[0020]实施例2金丝枣多肽的提取
取浓缩枣汁(山东鼎力枣业食品集团有限公司)30mL，加蒸馏水100mL，调节pH为7.0，温度为45°C，加入200U中性蛋白酶，加入1.5g甘氨酸，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的lh内，多肽含量呈缓慢上升趋势，lh以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要lh0
[0021]对比例4
取浓缩枣汁(山东鼎力枣业食品集团有限公司)30mL，加蒸馏水100mL，调节pH为7.0，温度为45°C，加入200U中性蛋白酶，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的10h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，5h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要10h。
[0022]对比例5
取浓缩枣汁(山东鼎力枣业食品集团有限公司)30mL，加蒸馏水100mL，调节pH为7.0，温度为45°C，加入6000U中性蛋白酶，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的4h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，4h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要4h。
[0023]对比例6
取浓缩枣汁(山东鼎力枣业食品集团有限公司)30mL，加蒸馏水100mL，调节pH为7.0，温度为45°C，加入200U中性蛋白酶，加入1.5g组氨酸，定时取样测定溶液中多肽含量，结果显示，在水解的6h内，多肽含量呈缓慢上升趋势，6h以后趋于稳定，可见酶解完全至少需要6h0
[0024]根据实施例1及对比例4、5和6中可以看出，在添加中性氨基酸的情况下，水解酶用量少，且水解时间短，lh即可完成酶解反应。添加碱性氨基酸同样能缩短酶解时间，但是效果有限，远不如添加中性氨基酸效果好。
【主权项】
1.一种生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，在加入蛋白酶酶解时，同时加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根据提取原料的质量添加，每Ig提取原料添加10~30mg氨基酸。2.根据权利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，氨基酸的添加量根据提取原料的质量每Ig提取原料添加20mg。3.根据权利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，酶解时加入的蛋白酶为碱性蛋白酶时，加入的氨基酸为碱性氨基酸。4.根据权利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，酶解时加入的蛋白酶为中性蛋白酶时，加入的氨基酸为中性氨基酸。5.根据权利要求1所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，酶解时加入的蛋白酶为酸性蛋白酶时，加入的氨基酸为酸性氨基酸。6.根据权利要求3所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，所述碱性氨基酸为赖氨酸、精氨酸或者组氨酸中的至少一种。7.根据权利要求4所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，所述中性氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、苏氨酸、色氨酸或者甲硫氨酸中的至少一种。8.根据权利要求5所述的生物活性肽的酶法提取工艺，其特征在于，所述酸性氨基酸为天冬氨酸或者谷氨酸中的至少一种。
【专利摘要】本发明公开了一种生物活性肽的酶法提取工艺，在加入蛋白酶酶解时，同时加入氨基酸，所述氨基酸的添加量根据提取原料的质量添加，每1g提取原料添加10~30mg氨基酸。优选每1g提取原料添加20mg氨基酸。氨基酸的种类根据所用的蛋白酶的性质选择，当酶解所用的蛋白酶为碱性蛋白酶时，加入的氨基酸为碱性氨基酸，酶解时加入的蛋白酶为中性蛋白酶时，加入的氨基酸为中性氨基酸；酶解时加入的蛋白酶为酸性蛋白酶时，加入的氨基酸为酸性氨基酸。本发明工艺可以大幅缩短酶解时间，减少蛋白酶的用量。
【IPC分类】C12P21/06
【公开号】CN105238834
【申请号】CN201510618787
【发明人】金仲恩, 全春兰, 张帆, 喻国贞, 欧阳智琨, 陈晋纳
【申请人】苏州蔻美新材料有限公司
【公开日】2016年1月13日
【申请日】2015年9月25日