化合物1,3-二油酸-2-亚油酸甘油酯、制剂、制备方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及有机化学和药学领域，具体而言，本发明涉及化合物1,3-二油 酸-2-亚油酸甘油醋、制剂、制备方法及其在抗肿瘤药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 意巧仁是禾本科意巧属植物意巧Coixlacryma-jobiL.varma-yuen(Roman.) Stapf的成熟干燥种仁，为利水渗湿药，很久W来为药食两用品种。现代研究发现意巧仁具 有镇痛抗炎、免疫调节、抗溃瘍、降血脂和减肥等药理作用。近年来，国内外学者通过化C、 HPLC-MS、GC等方法对意巧仁的化学成分进行了研究，发现其主要的活性成分包括醋类、不 饱和脂肪酸类、糖类及内醜胺类等。其中，醋类是首先被发现的具有抗肿瘤活性的成分，也 是报道最多最受关注的化学成分，在中国临床上已经得到普遍应用的康莱特注射液的有效 成分便是提自意巧仁中的醋类。杨玲等[食品科学，2001，22巧）：59-62]研究表明，意巧仁 油脂中甘油Η醋的摩尔百分比在87. 64% -97. 66%之间，其次为甘油一醋、甘油二醋和脂 肪酸醋。同时，进一步研究表明，意巧仁油甘油Η醋中，相对含量不低于3%的的成分多达8 种，如Η亚油酸甘油醋（1)、二亚油酸油酸甘油醋（2)、踪搁酸二亚油酸甘油醋（3)、亚油酸 二油酸甘油醋（4)、踪搁酸亚油酸油酸甘油醋巧）、二踪搁酸亚油酸甘油醋化）、Η油酸甘油 醋（7)和踪搁酸二油酸甘油醋，约占甘油Η醋总量的90%W上。由此可见，意巧仁油脂成分 的复杂性，送必然会使实际生产过程中的质量控制和临床用药安全面临很大的挑战。
[0003] 因此，开发一种安全、有效、可控的治疗肿瘤的药物即成为本发明关注的热点。本 发明对上述意巧仁油甘油Η醋成分之一一亚油酸二油酸甘油醋进行了分离，首次制备得 到了一种具有式（I)结构的化合物，即1,3-二油酸-2-亚油酸甘油醋，目前尚未见关于 此化合物及其药物制剂用于治疗肿瘤的报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种具有式（I)结构化合物，即1，3-二油酸-2-亚油酸 甘油醋：
[0005]
[0006] 本发明的又一目的在于提供一种含有式（I)结构化合物的药物组合物，其还可 含有药学上可接受的载体。
[0007] 本发明的目的还在于提供一种具有式（I)结构化合物的制备方法，其包括如下 步骤：
[0008] (1)意巧仁油的制备；
[0009] 似1，3-二油酸-2-亚油酸甘油醋的初步分离；
[0010] (3) 1，3-二油酸-2-亚油酸甘油醋的二次分离。
[0011] 其中，
[001引步骤（1)中意巧仁油的制备方法为：
[0013] 取水分《10%的意巧仁粉碎成10~300目，采用超临界流体萃取，分离得到意巧 仁粗油；加入意巧仁粗油重量40%~58%的石油離，及适量碱溶液碱炼，分液后取有机相， 加入中性氧化铅和/或高岭±，过滤，150~18(TC减压回收溶剂，干热灭菌，冷却过滤，得意 巧仁油。
[0014] 优选的，
[0015] 所述超临界流体萃取溶媒为二氧化碳，萃取温度30~6(TC，萃取压力19~ 24Mpa，分离温度30~60°C，分离压力6~15Mpa，二氧化碳流量10~5000L/h，连续萃取 1 ~4h;
[0016] 所述碱溶液可W为0.5%~3%的氨氧化钟、氨氧化钢的水溶液；
[0017] 所述加入中性氧化铅和/或高岭±的过程为；首先加入意巧仁粗油重量3 %~8 % 的活化中性氧化铅过滤，滤液加热至40~5(TC，又加入意巧仁粗油重量2 %~6 %经活化的 高岭±过滤，减压除溶剂，再加入意巧仁粗油重量8%~12%活化中性氧化铅过滤即可。 [001引更优选的，
[0019] 取水分《10 %的意巧仁粉碎成10~300目，采用超临界二氧化碳萃取装置萃 取，将意巧仁粉装入萃取蓋，加热二氧化碳预热器、萃取蓋和分离柱，使萃取温度达到30~ 6(TC，分离温度达到30~6(TC，升高压力，使萃取压力达到19~24Mpa，分离压力达到6~ 15Mpa，萃取意巧仁油后的超临界二氧化碳流体进入解析蓋解析循环，解析蓋可根据需要设 一至多个，控制解析温度30~6(TC，解析压力2~6Mpa，整个循环保持二氧化碳流量10~ 5000LA，连续萃取1~地，自分离柱下端分离得到意巧仁粗油；
[0020] 将上述意巧仁粗油加入油重量40 %~58 %的石油離，再加入适量的2 %化0H溶 液碱炼，分液后取有机相用纯化水进行水洗，取水洗后有机相加适量丙丽破乳后，取上层油 溶液，加入粗油重量3%~8%的活化中性氧化铅过滤，取滤液加热到40~5(TC后，加入 粗油重量2%~6%经活化的高岭±过滤，滤液减压回收溶剂后，再加粗油重量8%~12% 活化中性氧化铅过滤得油，过滤后的油再经150~18(TC减压干热灭菌1~化，冷却后经 《0. 2μm微孔滤膜过滤，得意巧仁油。
[0021] 其中，
[0022] 步骤（2)中1，3-二油酸-2-亚油酸甘油醋的初步分离方法为：
[0023]采用Gilson制备型高效液相色谱仪和蒸发光散射检测器联用；制备型色谱柱为 AgilentZorbaxSB-C18(250mmX21.2mm, 7um);流动相为流动相A(己膳）和流动相B(四 氨巧喃：己腊=1:1)，采用梯度条件洗脱；流动相B;0~27min，50% - 60%，27~35min， 60% - 90%，35 ~45min，90% - 100%;流速；18ml/min。进样体积为 200 ~300μ1 ;收集 响应设置；peaklevelmin= 30mV;
[0024] 供试品配制；用流动相B配制成0.Ig/ml的意巧仁油溶液；
[0025] 收集保留时间约为16min前后的色谱峰流分，低温减压抽干溶剂。
[002引 其中，
[0027]步骤（3)中1，3-二油酸-2-亚油酸甘油醋的二次分离方法为：
[002引一次制备条件为；AgilentllOO分析型高效液相色谱仪，DAD检测器，，色谱柱：VenusilXBPC18 化）（10 巧 50mm，5μm，150Λ)，流动相，己腊；四氨巧喃= 75:25，流速；4mL/ min;检测波长；205nm;供试品配制；取1，3-二油酸-2-亚油酸甘油醋的初步分离样品，加 入适量正己焼，超声促溶后备用，进样量；60μ1，收集保留时间约为19min的色谱峰流分， 将此流分氮吹浓缩；
[0029] 二次制备条件为：色谱柱，VenusilCAα0*250mm，5μm，l{K)0裘），流动相，正己焼： 己醇=95:5,紫外检测波长；205nm，流速：4血/min;供试品配制；取一次制备的流分样品若 干，加入适量正己焼，超声促溶后备用；进样量；60μ1，收集保留时间约为2. 5min~5min 的色谱峰，氮吹浓缩、低温冻存。
[0030] 本发明化合物经过理化性质、质谱、核磁、紫外和红外光谱的鉴定，确证了其结构， 具体如下：
[0031] 1.实验仪器
[0032] 高效液相色谱仪;AgilentllOO(DAD，ELSD)(美国安捷伦公司）；
[0033] 核磁共振波谱仪；BRUKERAVANCE500MHZ(美国布鲁克公司）；
[0034] 质谱仪；MacromassGCT飞行时间质谱灯OF)(美国沃特世公司）；
[0035]FinniganTRACEDSQ-MS(美国热电公司）；
[0036] 液相质谱联用仪；FinniganLCQadvantageMAX(美国热电公司）；
[0037] 红外光谱仪；Nicolet6700(美国热电公司）；
[0038]旋光仪JascoP-1030 (日本JASC0 公司）。
[00測 2.实验方法
[0040]HPLC;取纯品 20mg于 1ml二氯甲焼溶液中，AgilentllOOHPLC，色谱柱；Agilent ZorbaxSB-C18(250mmX4. 6mm，i.d. 5um)，二氯甲焼-己腊（35:65，v/v)为流动相，进样量 10μ1。
[0041]LC-MS;按液相条件，在FinniganLCQadvantageMAX上WAPCI正离子模式测定。
[0042] IR;将所得纯品分别涂膜于漠化钟晶体表面，在红外光谱仪Nicolet6700上测定。
[004引HR-EI与如.-EI;取所得纯品5μg，涂于进样池中，于MacromassGCT飞行时间质 谱灯0巧上，WSourceTemp:200°C;SampleTemp:400°C;DIRECT，70eV测定。同样WSource Temp;25(TC;SampleTemp;25(TC;DIRECT，70eV条件在FinniganTRACEDSQ-MS上测定。
[0044]NMR;将所得纯品取30~40mg，置于核磁管中，加0.