一种心肌保护作用的柠檬苦素类化合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体设及从陈皮的干燥成熟果实中分离得到的一种巧 樣苦素类化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 陈皮是芸香科植物橘（CitrusreticulataBlaneo)及其栽培变种的干燥成熟果 皮。采摘成熟果实，剥取果皮，晒干或低溫干燥。味苦、辛，性溫，具有理气健脾、燥湿化疲作 用，用于腕腹胀满，食少吐泻，咳嗽疲多。药材分为"陈皮"和"广陈皮"。一般来说，陈皮果 皮常剥成数瓣，基部相连或呈不规则碎片。外表面澄黄色或红栋色，有细皱纹及凹下的点状 油室；内表面黄白色，粗糖呈海绵状，附黄白色或黄栋色筋络状维管束，质稍硬而脆，气香， 味辛而微苦。而广陈皮果皮则多剖成3至4瓣，基部相连，形状整齐有序，厚度约1毫米。点 状油室较大，对光照视透明清晰，质较柔软。但是不管是陈皮还是广陈皮都W片大、色鲜、油 润、质软、香气浓、味甜苦辛者为佳。主产于广东、福建、四川、江苏、浙江、江西、湖南等地。
[0003] 陈皮主要含有挥发油、黄酬类、有机胺类及微量元素等成分。陈皮含挥发油约占 2 %~4 %，主要成分为巧樣苦素和巧樣醒。
[0004] 现代药理学表明陈皮在屯、血管、胃肠道、呼吸道、内分泌、抗癌、抗衰老、养颜美容、 营养补虚方面具有很好作用，运为陈皮深度开发提供广阔前景。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种从陈皮的干燥成熟果实中分离得到的一种巧樣苦素类 化合物，含其的药物组合物及其制备方法和应用。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得W实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物（I ):
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含W下操作步骤：(a)将陈皮的干燥成熟果实 粉碎，用70~80%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋 和水饱和的正下醇萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化）步 骤（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔树脂除杂，先用5%乙醇洗脱6个柱体积，再用70%乙醇洗 脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物；(C)步骤化）中70% 乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烧-甲 醇梯度洗脱得到4个组分；（d)步骤（C)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 8:1、5:1和2:1的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤（d)中组分2用十八烧 基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12 个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物（I)。
[0010] 进一步地，步骤（a)中，用75%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 一种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的 载体。
[0013] 所述的化合物（I)在制备屯、肌保护的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备屯、肌保护的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可W直接使用，或者W药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、 对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 W及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物W单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[001引图1为化合物（I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)计算ECD和实验ECD图。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不W此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可W对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0021] 主要材料、试剂来源及仪器类型：
[0022] 乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲烧为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限 公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[002引实施例1 :化合物（I)分离制备及结构确证
[0024] (a)将陈皮的干燥成熟果实（8kg)粉碎，用75%乙醇热回流提取（3化X3次），合 并提取液，浓缩至无醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水饱和 的正下醇化LX3次）萃取，分别得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（375g)和正下醇萃取 物；化）步骤（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8大孔树脂除杂，先用5 %乙醇洗脱6个柱体积，再 用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩得70%乙醇洗脱浓缩物（129g); (C)步骤（b)中70%乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1 (8个柱体积）、 30:1 (8个柱体积）、15:1 (8个柱体积）和5:1 (10个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱 得到4个组分；（d)步骤（C)中组分4(27g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8 个柱体积）、5:1 (10个柱体积）和2:1 (8个柱体积）的二氯甲烧-甲醇梯度洗脱得到3个 组分；（e)步骤（d)中组分2 (15g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为70%的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化 合物（I) (38mg)。
[00巧]结构确证：HR-ESIMS显示[M+NaiT为m/z681. 3316,结合核磁特征可得分子式为 〔36馬。011，不饱和度为 12。核磁共振氨谱数据 (卵m，DMS0-de，400MHz) 49,ddd，J =8. 7,3. 2,2. 4)，H-2(2. 27,m)，H-2(l. 91，ddd，J= 16. 3,2. 8,2. 4)，H-3(5. 03,dd，J= 2. 8, 2. 8)，H-5 (2. 24,d，J= 12. 5)，H-6 (4. 15,dd，J= 12. 5, 3. 2)，H-7 (5. 74,d，J= 3.。， H-9 (2. 99,dd，J= 11. 8, 7. 3)，H-11 (1. 69,m)，H-11 (1. 73,m)，H-12 (1. 49,ddd，J= 13. 2， 9. 8, 2. 9)，H-12 (2. 37,m)，H-15 (5. 81，s)，H-18 (1. 03,s)，H-19 0). 97,s)，H-21 (7. 45,dd，J= 1. 7,0. 8)，H-22 化.28,dd，J= 1. 7,0. 8)，H-23 (7. 32,dd，J= 1. 7,1. 7)，H-28 (3. 29,br，d，J =7. 6)，H-28(3. 45，d，J= 7. 6)，H-29(1. 18，s)，H-30(l. 22，s)，H-2,（2. 23，m)，H-4,（2. 31， s)，H-5'（1. 08,d，J= 7. 0)，H-2" (2. 14,m)，H-3" (1. 29,m)，H-3" (1. 56,m)，H-4" (0. 80， t，J= 7. 4)，H-5" (1. 04,d，J= 7. 0)，1-0H(4. 77,s)，6-0H巧.37,s)，17-OH化.08,s)， 28-0H(4. 24,s);核磁共振碳谱数据δc(卵m，DMSO-de，125MHz) :71. 1 (CH，1-C)，29. 7(邸2， 2-C)，72. 6 (CH，3-C)，41. 5 (C，4-C)，40. 1 (CH，5-C)，71. 8 (CH，6-C)，72. 0 (CH，7-C)，45. 9 (C， 8-C)，34. 1 (CH，9-C)，39. 7 (C，10-C)，13. 7 (細2,11-C)，21. 0 (邸2, 12-C)，50. 1 (C，13-C)， 192. 4 (C，14-C)，120. 5 (CH，15-C)，205. 2 (C，16-C)，80. 0 (C，17-C)，29. 6 (畑3, 18-C)， 15. 1 (細3, 19-C)，122. 2 (C，20-C)，140. 9 (CH，21-C)，109. 1 (CH，22-C)，142. 3 (CH，23-C)， 77. 2(細2,28-0，18. 7(邸3,29-0，24. 3(邸3,30-0，174. 5(C，Γ-C)，51. 1 (CH，2, -C)， 203.2(C，3' -C)，27. 1佩，4' -0，16.2佩，5' -C)，174.6(C，1"-C)，41. 1(CH，2"-C)， 26. 0(邸2,3"-0，11.2(邸3,4"-0，17. 1(邸3,5"-0 ;碳原子标记参见图1。红外光谱表明 该化合物含有径基（3433cm1)和幾基（1746和1714cm1)基团。古和"CNMR数据表明该化 合物含有的一个α，β-不饱和幾基，一个β-取代的巧喃基，一个2-甲基下酷氧基，一个 2-甲基-3-酬-下酷氧基，四个含氧次甲基，1个含氧亚甲基W及四个叔甲基碳。上述数据 表明该化合物为巧樣苦素类化合物。2-甲基下酷氧基基团和2-甲基-3-酬-下酷氧基分别 位于C-7 和C-3 位上。HMBC谱中，Η-3(δ册.03，dd，J= 2. 8,2. 8)和Η-7(δ册.74，d，J= 3. 。与相应醋幾基碳（δC174. 5 ;174.6)的相关性验证了上述结论。此外，C-1 (δC71. 1)、 C-6(δC71.8)、C-17 (δC80. 0)和C-28 (δC77. 2)的化学位移表明了 1-0Η、6-0Η、17-0Η和 28-0Η的存在。R犯SY谱中，&-29 与Η-2β，Η-6和 &-19 讯-19 与Η-2β，Η-6和 &-30 ;W 及&-30与Η-6Ν犯信号增强，表明Η-2β，Η-6,Me-19,Me-29和Me-30是β构型，因而C-6 位的径基α构型。此外，J5,e(12. 5化）的大小表明Η-5是α构型，从而确定了Η-9和Me-18 为曰构型，R犯SY谱中H-9与H-5和H3-I8相关性验证了上述推论。另外，Ji,2e化4Hz)， J2e,3(2.細z)和Je,7(3.2Hz)较小的禪合常数表明和H-7为β构型，从而使得C-1，C-3，C-7位的取代基团均为α构型。最后，通过与其他具有相同C，D环的巧樣苦素类化合 物比较核磁数据，确定17-0H为β构型。综合氨谱、碳谱、HMBC谱和R犯SY谱，W及文献关 于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确 定，理论值与实验值基本一致（图2)。
[002引实施例2 :化合物（I)药理作用试验[0027]一、材料和仪器
[002引新生1~3天SD大鼠乳鼠（SPF级），雌雄不拘，由广西医科大学实验动物中屯、提 供（试验动物生产许可证：SCXK桂2009-0002)。化合物（I)(纯度> 98% )为自制。胎 牛血清购于曲010116公司，016]\1培养基购于0180)公司，二甲