与cd34分子特异性结合的多肽及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物医药领域，特别设及能与CD34分子特异性结合的多肤及其应用。
【背景技术】
[0002] CD34分子是一种高度糖基化的I型跨膜蛋白，分子量在105~120kD，结构上 具有独特性，特异性的表达于人类及其他哺乳动物造血干/祖细胞化emopoieticstem/ progenitorcell,服C/HPC)表面，并随着造血细胞逐渐成熟，CD34的表达量逐渐减少，直至 消失。其次，CD34分子还表达于正常及肿瘤的微血管内皮细胞中，其在血管内皮中的作用 机制尚不明确。
[0003] 已有的研究结果表明CD34分子在介导细胞间黏附作用中发挥着重要作用，参与 服C/HPC造血干细胞的运输、定位和归巢CD34单克隆抗体与CD34分子的胞外域结合后可上 调细胞CD34分子与骨髓间质层的结合。在HSC/HPC归巢中，细胞表面的CD34分子首先和 内皮细胞及骨髓基质的L选择素结合启动黏附，然后穿越内皮细胞层，定位于骨髓血管外 基质，增殖分化，完成归巢过程。CD34介导的黏附信号通过酪氨酸蛋白激酶信号通路调节 CXCR4等G蛋白偶联受体表达，促使细胞发生趋化、黏附和迁移。酪氨酸蛋白激酶抑制剂和 CXCR4阻断剂可抑制细胞黏附，动员服C/HPC到外周血循环。
[0004] 服C/HPC黏附作用的调节药物已经被广泛应用于骨髓抑制的修复。在服C/HPC移 植治疗过程中，首先应用服C/HPC动员药物，抑制细胞黏附作用，使服C/HPC易于穿过髓血 屏障，进入外周血循环，W便于HSC/HPC的富集和采取；在移植后，应用HSC/HPC黏附促进 药物，提高CD34黏附作用，增强CD34分子与骨髓基质细胞表面分子的结合，促进HSC/HPC 的定植，归巢和造血及免疫功能的恢复重建。 阳0化]临床上还利用服C/HPC动员药物等抑制细胞黏附作用，使服C/HPC进入外周血循 环，修复治疗组织损伤如屯、脑梗塞等。
[0006] 在临床应用中，CD34分子的检测可用于服C/HPC的确认、计数、富集和纯化，在 服C移植W及肿瘤生物治疗中具有重要意义。利用CD34纯化服C/HPC可减少异基因造血 干细胞移植时移植物中的T细胞，从而有效减少由于T细胞引起的急慢性移植物抗宿主疾 病（graft-vs-hostdisease，GVHD)的发生；CD34分子可W用于白血病的诊断及分型，CD34 分子特异性的表达于某些未分化或低分化的白血病细胞，并且在急性髓系白血病（acute myeloidleukemia,AML)细胞上的表达差异与临床化疗疗效、预后有一定的相关性；CD34 分子被认为是最敏感的血管内皮标记物，可用于计数微血管，判定肿瘤血管生成状况W及 肿瘤血管生成抑制剂的疗效。
[0007] CD34还参与炎症反应W及淋己细胞的归巢，CD34抗体是深入研究CD34分子在造 血、炎症反应和血管新生中的作用机制，W及HSP/HPC分离纯化和急性髓系白血病的诊断 不可缺少的分子探针。至今仅美、英、法、丹麦等极少数国家研制出10余株鼠源性抗人CD34 抗体，均采用经典的杂交瘤技术。运些CD34抗体均特异性的结合CD34分子，并能识别服C/ HPC、血管内皮细胞及某些白血病细胞。但CD34抗体在制备和临床应用中仍面临着一些问 题：首先，由于CD34分子免疫原性很弱，不易刺激机体产生分泌特异抗体的B细胞，致使CD34抗体的制备工作量大且成功率低，具有成本高，生产周期长的缺点；其次，在造血干细 胞移植的过程中，运些鼠源性抗体将不可避免地伴随着造血干细胞进入人体，从而引起人 抗鼠抗体免疫应答化umananti-mouseantibodyresponse，KAMA),遗留医疗安全隐患。
【发明内容】
[0008] 本发明为弥补现有技术的不足，提供一种能与CD34分子特异性结合的多肤，其具 有易于制备，分子量小，不易产生免疫排斥反应等特点。
[0009] 本发明为达到其目的，采用的技术方案如下：提供与CD34分子特异性结合的多 肤，所述多肤选自17号多肤、19号多肤中的至少一种，所述17号多肤、19号多肤的氨基酸 序列分别如序列表中序列1、序列2所示。
[0010] 本发明提供的多肤能与CD34分子特异性结合，可W用人工合成或基因工程的 方法生产。该多肤亦可称之为一种非抗体结合蛋白（non-antibodybindingprotein), 非抗体结合蛋白是相对于抗体/抗原特异性结合的特征而言，又称之为支架结合蛋白 (scaffoldsbindingprotein)。运类蛋白在Ξ维结构上通过其表面氨基酸形成的支架能 结合特定的分子，与抗体比较，具有分子量小，渗透力强，耐热，稳定性好，容易操作和适合 大规模生产等特点。 阳011] 本发明提供的多肤能与CD34+造血干细胞、血管内皮细胞和白血病细胞（具体如 K562白血病细胞）结合，不与CD34-的MNNG/册S骨肉瘤细胞结合。
[0012] 本发明提供的多肤与CD34+细胞结合后不影响细胞的增殖速率。
[0013] 本发明提供的多肤可作为CD34阳性表达细胞的标记物使用，具体如作为导管上 皮细胞、血管内皮细胞标记物。
[0014] 本发明提供的多肤还可在干细胞，特别是服C/HPC细胞的鉴定、富集、筛选或纯化 中应用。
[0015] 本发明提供的多肤还可在制备用于白血病诊断或分型的试剂中应用。
[0016] 本发明提供的多肤还可用于制备CD34祀点药物，该药物其活性成分包括上文所 述的多肤。
[0017] 本发明提供的多肤可用于调节CD34阳性细胞的黏附和归巢作用，例如可用于制 备具有抑制CD34阳性细胞的黏附和归巢作用的药物制剂。
[0018] 本发明提供的多肤还可用于制备吸附和富集CD34阳性细胞的制剂，例如用于组 织再生区域可吸附造血干细胞，促进组织的再生和愈合；用于白血病患者癌细胞的初筛。
[0019] 上述利用本发明的多肤制备药物或制剂时，还可W包括药学上可接受的载体、辅 料等。运些载体或辅料本领域技术人员可根据所需制备的药物剂型等要求而具体选择， 例如载体可W为稀释剂、赋形剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载 体、润滑剂中的一种或多种；辅料例如可W包括有香味剂、甜味剂等。药物剂型例如可W是 胶囊、软胶囊、片剂、口服液、分散片、冻干粉针、注射液或滴丸等。
[0020] 本发明提供的多肤还可作为药物祀向分子使用，其可在制备药物祀向制剂中应 用，例如祀向CD34+细胞的药物祀向制剂。
[0021] 本发明提供的多肤可在分离或检测CD34阳性细胞的方法中进行应用，从而替代 现有技术中使用CD34抗体来分离或检测CD34阳性细胞。
[0022] 本发明提供的多肤，能够满足W下医学应用和医学研究的要求： 阳02引 1)可W用于检、富集和纯化服C/HPC;
[0024] 2)可W用于作为血管内皮标记物； 阳0巧]3)可W用于白血病诊断、分型；
[00%] 4)可W作为药物祀向分子；
[0027] 5)可W用于作为免疫巧光CD34抗体的代替物；
[002引 6)可W用于抑制CD34阳性细胞的黏附作用；
[0029] 7)可W用于吸附干细胞，促进组织再生和修复。
[0030] 另外，本发明提供的多肤还具有W下优点：
[0031] 1)该多肤结合效率高，可W特异的结合CD34+干细胞、造血干细胞、血管内皮细胞 和K562白血病细胞；
[0032] 2)该多肤毒副作用小，与CD34+细胞的结合，对目标细胞没有明显的杀伤和抑制 增殖的效果；
[0033] 3)该多肤分子量小，具有通透性好、不易变性、免疫原性低等特点；
[0034] 4)该多肤制备方便，成本低，可用人工合成方法直接合成，也可W通过基因工程的 方法制备，避免了如抗体动物生产的异种蛋白隐患，增进了干细胞分离制备的医疗安全，有 利于减少干细胞移植并发症。
【附图说明】 阳03引图1 :为隧菌体展示技术筛选到的能与CD34分子结合的17、1