抗cd56蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗cd56单克隆抗体和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，特别设及一种抗CD56蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及 其产生的抗CD56单克隆抗体和应用。
【背景技术】 阳00引CD56又称为神经细胞粘附分子（N-CAM)，属于I型跨膜糖蛋白。广泛存在于大部分 的神经外胚层来源的细胞、组织和肿瘤中，包括视网膜母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、 神经母细胞瘤、小细胞癌，也表达于一些中胚层衍生的肿瘤、自然杀伤细胞和NK淋己瘤。
[0003] CD56的表达量可反映肿瘤细胞的迁移能力，目前临床上通常通过免疫组织化学 (IHC)病理实验检测肿瘤细胞中CD56蛋白的表达状况。IHC实验的核屯、为特异性结合CD56 蛋白的单克隆抗体，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一 种结合特异性较高的针对CD56蛋白的单克隆抗体具有重要的意义。
【发明内容】
[0004] 有鉴于此，本发明提供一种抗CD56蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗 CD56单克隆抗体和应用。本发明所述单克隆抗体可与CD56蛋白特异性结合，而与细胞内其 他蛋白无交叉反应，显著提高了CD56蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，真实反映 肿瘤细胞内CD56蛋白表达水平，可应用于视网膜母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、神经 母细胞瘤、小细胞癌、NK淋己瘤和自然杀伤细胞的辅助诊断与分型。
[0005]为了实现上述发明目的，本发明提供W下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种单克隆抗体，其与CD56蛋白特异性结合。
[0007] 在本发明的一些具体实施方案中，单克隆抗体由保藏编号为CGMCC No.11081的杂 交瘤细胞株产生。
[0008] 本发明还提供了所述单克隆抗体在制备用于检测CD56蛋白的免疫检测工具中的 应用。
[0009] 在本发明的一些具体实施方案中，所述免疫检测工具为试剂、试剂盒、忍片或试 纸。
[0010] 本发明还提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括所述单克隆抗体。
[0011] 本发明还提供了所述单克隆抗体在制备用于标记组织细胞的试剂或试剂盒中的 应用。
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，所述免疫组化检测试剂盒中所述组织细胞为自 然杀伤（NK)细胞、NK样T细胞、神经、神经内分泌组织或相关肿瘤。所述相关肿瘤为与上 述细胞、组织类型相同的肿瘤。
[0013] 本发明还提供了一种标记组织细胞的试剂盒，包括所述单克隆抗体。
[0014] 在本发明的一些具体实施方案中，所述标记组织细胞的试剂盒中所述组织细胞为 自然杀伤（NK)细胞、NK样Τ细胞、神经、神经内分泌组织或相关肿瘤。所述相关肿瘤为与 上述细胞、组织类型相同的肿瘤。
[0015] 本发明还提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCCNo. 11081。
[0016] 与现有技术相比，本发明提供了一种杂交瘤细胞株（保藏编号为CGMCC No. 11081)，W及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体Umab83。本发明还提供了单克隆抗体 Umab83在制备用于检测CD56蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体Umab83的免疫 组化试剂盒，W及单克隆抗体Um油83在制备用于标记肿瘤的试剂盒中的应用。本发明所述 单克隆抗体可与CD56蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了CD56 蛋白免疫检测的特异性、准确性和可靠性，真实反映肿瘤细胞内CD56蛋白表达水平，可应 用于视网膜母细胞瘤、髓母细胞瘤、星形细胞瘤、神经母细胞瘤、小细胞癌、NK淋己瘤和自然 杀伤细胞的辅助诊断与分型。
[0017] 生物保藏说明
[0018] 用于保藏的杂交瘤细胞株UMAB83的分类命名为：神经细胞黏附分子1 (CD56)单克 隆抗体杂交瘤细胞株；
[0019] 保藏单位全称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、；
[0020] 保藏单位简称：CGMCC;
[0021] 保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所； 阳02引保藏日期：2015年07月03日；
[0023]保藏编号：CGMCCNo. 11081。
【附图说明】
[0024] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[00对图1示实施例1克隆位点设计如图，其中底纹部分为0RF区；
[00%] 图2示实施例2重组CD56蛋白Westernblot检测结果图，Wanti-孤K检测重组CD56蛋白在肥K293T细胞中的表达，其中左侧泳道为转染空载体的肥K293T细胞裂解液为 抗原的检测结果、右侧泳道为转染pCMV6-rCD56质粒的肥K293T细胞裂解液抗原的检测结 果；
[0027] 图3示实施例2重组CD56蛋白SDS-PAGE结果图，用抗孤K亲和层析柱纯化重组 CD56蛋白，纯化后的蛋白通过SDS-PAGE胶电脉、考马斯亮蓝染色； 阳02引 图4示实施例3W单克隆抗体Um油83识别完整的CD56(Fulllength CD56，CD56-FL)蛋白的Westernblot检测结果图。泳道1为转染pCMV6-Ent巧的细胞裂解 液；泳道2为转染PCMV6-CD56-化的细胞裂解液；
[0029] 图5示实施例4福尔马林固定、石蜡包埋的成年人大脑组织免疫组化结果图（一 抗为CD56单克隆抗体Um油83);
[0030] 图6示实施例4福尔马林固定、石蜡包埋的人胚胎小脑组织免疫组化结果图（一 抗为CD56单克隆抗体Um油83);
[0031] 图7示实施例5化iGene蛋白忍片鉴定结果图（一抗为CD56单抗Um油83,1:100; 二抗为DyLi邑ht649-conju邑曰ted AffiniPure Fragment Go曰t-曰nti_Mouse I邑G，1:400)。
【具体实施方式】
[0032] 本发明公开了一种抗CD56蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞及其产生的抗CD56单克隆 抗体和应用，本领域技术人员可W借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的 是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本 发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和 应用本发明技术。
[0033] 本发明提供了一种杂交瘤细胞株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中屯、（简称为CGMCC)，保藏日期为2015年07月03日，保藏编号为CGMCCNo. 11081。
[0034] 本发明还提供了一种特异性结合CD56蛋白的单克隆抗体Umab83,由上述杂交瘤 细胞株产生。
[0035] 本发明所述单克隆抗体的制备方法如下：
[0036] (1)重组表达载体的构建：根据CD560RF核巧酸序列（CD560RF核巧酸序列如SEQ IDNO. 1所示，2574bp;CD56氨基酸序列如沈QIDNO. 2所示）
[0037] 设计引物PCR扩增CD560RF第58bp位到第2154bp位序列，基因两侧分别引入限 制性内切酶位点Sgfl和Mlul，插入表达载体pCMV6-Entry，构建CD56氨基酸序列第20位 到第718位的重组表达质粒pCMV6-rCD56 ;上游扩增引物序列，SEQIDNO. 3:CACGCGATCGCA TGCTGCAGGTGGATATTGTTC下游扩增引物序列沈QIDNO. 4:ACCGACGCGTCACCAGGAGCAGGACGAA GAT
[0038] (2)CD56重组蛋白的表达与纯化：将CD56重组表