一种抗肿瘤生物多糖的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及多糖制备领域，具体涉及一种抗肿瘤生物多糖的制备方法。
【背景技术】
[0002]糖类是生物体内除蛋白质和核酸以外的一类重要生物分子，尤其是一类重要的信息分子，具有多种多样的生物功能。其中，多糖是自然界中储量丰富的生物聚合物，它是由醛糖或酮糖通过糖苷键连接在一起的多聚物，广泛存在于动物细胞膜、植物和微生物细胞壁中。目前已发现的活性多糖有几百种，有真菌多糖、高等植物多糖、藻类地衣多糖、动物多糖、细菌多糖。多糖具有能量储存、结构支持、防御作用和抗原决定性等多方面的生物功能。
[0003]植物多糖，尤其是从中药中提取的水溶性多糖尤为重要，已发现有多种中药中的多糖类化合物具有丰富多彩的生物活性，如抗肿瘤、免疫调节、降血糖、抗病毒、降血脂、抗凝血以及促进伤口愈合等活性，这类多糖没有细胞毒性，而且药物质量通过化学手段容易控制，已经成为当今新药的发展方向之一。
【发明内容】
[0004]为解决上述问题，本发明提供了一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，工艺简单，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有条件温和、杂质易除和得率高等优点，所得多糖具有提高免疫力，抗疲劳、抗肿瘤等多种功效，适用于肿瘤患者。
[0005]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0006]—种抗肿瘤生物多糖的制备方法，包括如下步骤:
[0007]S1、取干燥树酶10?20份、锁阳15?20份、金樱子果实10?20份，送入超声破碎器经超声破碎处理，得粉体；
[0008]S2、将所得的粉体脱脂处理后，置于高压釜中，加入粉体2?3倍的水，通入氮气至高压爸内压力为0.7?1.5MPa，处理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至高压爸内压力为1.5?2.5Mpa，浸提1?1.5h，得提取液；
[0009]S3、将所得提取液过滤，浓缩，加入无水乙醇进行沉淀处理后，干燥，得粗多糖；
[0010]S4、将所得的粗多糖溶于0.2?0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纤维素52静态吸附30?40min，冲洗DEAE-纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液，得脱色后的粗多糖溶液；
[0011]S5、将所得的脱色后的粗多糖溶液置于酶解罐内，按320?370克/吨的比例加入复合酶解液，30?35°C，酶解1?2小时，每半小时搅拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之间；
[0012]S6、酶解结束后，将酶解液升温至85?100 °C，灭酶30?40分钟；
[0013]S7、灭活完成后冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，水分控制在7 %以下，得抗肿瘤生物多糖。
[0014]优选地，所述步骤S1所得的粉体粒度小于3 μ m0
[0015]优选地，所述复合酶解液包含以下重量份的组分:
[0016]纤维素酶3?5份、果胶酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、风味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生质液10?15份、含微量元素的无机盐3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份。
[0017]优选地，原生质液由山竹果汁、鱼油和酪蛋白水解肽按质量比1: 2: 3混合所得。
[0018]优选地，所述的含微量元素的无机盐包含1 %的Κ2ΗΡ04，1 %的ΚΗ2Ρ04，0.5%的
(NH4)2S04O
[0019]本发明具有以下有益效果:
[0020]工艺简单，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有条件温和、杂质易除和得率高等优点，所得多糖具有提高免疫力，抗疲劳、抗肿瘤等多种功效，适用于肿瘤患者。
【具体实施方式】
[0021]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0022]以下实施例中，所使用的复合酶解液包含以下重量份的组分:
[0023]纤维素酶3?5份、果胶酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、风味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生质液10?15份、含微量元素的无机盐3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份，原生质液由山竹果汁、鱼油和酪蛋白水解肽按质量比1: 2: 3混合所得，所述的含微量元素的无机盐包含 1 % 的 Κ2ΗΡ04，1 % 的 ΚΗ2Ρ04，0.5 % 的(NH4) 2S04。
[0024]实施例1
[0025]S1、取干燥树酶10份、锁阳15份、金樱子果实10份，送入超声破碎器经超声破碎处理，得粉体，所得的粉体粒度小于3 μ m ;
[0026]S2、将所得的粉体脱脂处理后，置于高压釜中，加入粉体2倍的水，通入氮气至高压釜内压力为0.7MPa，处理25min ;然后迅速通入蒸汽至高压釜内压力为1.5Mpa，浸提
1.5h，得提取液；
[0027]S3、将所得提取液过滤，浓缩，加入无水乙醇进行沉淀处理后，干燥，得粗多糖；
[0028]S4、将所得的粗多糖溶于0.2mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纤维素52静态吸附30min，冲洗DEAE-纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液，得脱色后的粗多糖溶液；
[0029]S5、将所得的脱色后的粗多糖溶液置于酶解罐内，按320克/吨的比例加入复合酶解液，30°C，酶解2小时，每半小时搅拌、充氧一次，控制PH值在3.5 ;
[0030]S6、酶解结束后，将酶解液升温至85 °C，灭酶40分钟；
[0031]S7、灭活完成后冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，水分控制在7 %以下，得抗肿瘤生物多糖。
[0032]实施例2
[0033]S1、取干燥树酶20份、锁阳20份、金樱子果实20份，送入超声破碎器经超声破碎处理，得粉体，所得的粉体粒度小于3 μ m ;
[0034]S2、将所得的粉体脱脂处理后，置于高压釜中，加入粉体3倍的水，通入氮气至高压爸内压力为1.5MPa，处理8min ;然后迅速通入蒸汽至高压爸内压力为2.5Mpa，浸提lh，得提取液；
[0035]S3、将所得提取液过滤，浓缩，加入无水乙醇进行沉淀处理后，干燥，得粗多糖；
[0036]S4、将所得的粗多糖溶于0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纤维素52静态吸附40min，冲洗DEAE-纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液，得脱色后的粗多糖溶液；
[0037]S5、将所得的脱色后的粗多糖溶液置于酶解罐内，按370克/吨的比例加入复合酶解液，35°C，酶解1小时，每半小时搅拌、充氧一次，控制PH值在6.2 ;
[0038]S6、酶解结束后，将酶解液升温至100°C，灭酶30分钟；
[0039]S7、灭活完成后冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，水分控制在7 %以下，得抗肿瘤生物多糖。
[0040]实施例3
[0041]S1、取干燥树酶15份、锁阳17.5份、金樱子果实15份，送入超声破碎器经超声破碎处理，得粉体，所得的粉体粒度小于3 μ m ;
[0042]S2、将所得的粉体脱脂处理后，置于高压釜中，加入粉体2?3倍的水，通入氮气至高压釜内压力为1.1MPa，处理16.5min ;然后迅速通入蒸汽至高压釜内压力为2Mpa，浸提1.25h，得提取液；
[0043]S3、将所得提取液过滤，浓缩，加入无水乙醇进行沉淀处理后，干燥，得粗多糖；
[0044]S4、将所得的粗多糖溶于0.25mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纤维素52静态吸附35min，冲洗DEAE-纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液，得脱色后的粗多糖溶液；
[0045]S5、将所得的脱色后的粗多糖溶液置于酶解罐内，按345克/吨的比例加入复合酶解液，32.5°C，酶解1.5小时，每半小时搅拌、充氧一次，控制PH值在4.85之间；
[0046]S6、酶解结束后，将酶解液升温至92.5 °C，灭酶35分钟；
[0047]S7、灭活完成后冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，水分控制在7%以下，得抗肿瘤生物多糖.
[0048]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、取干燥树酶10?20份、锁阳15?20份、金樱子果实10?20份，送入超声破碎器经超声破碎处理，得粉体； 52、将所得的粉体脱脂处理后，置于高压釜中，加入粉体2?3倍的水，通入氮气至高压爸内压力为0.7?1.5MPa，处理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至高压爸内压力为1.5?2.5Mpa，浸提I?1.5h，得提取液； 53、将所得提取液过滤，浓缩，加入无水乙醇进行沉淀处理后，干燥，得粗多糖； 54、将所得的粗多糖溶于0.2?0.3mol/L的NaCl溶液中，加入DEAE-纤维素52静态吸附30?40min，冲洗DEAE-纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液，得脱色后的粗多糖溶液； 55、将所得的脱色后的粗多糖溶液置于酶解罐内，按320?370克/吨的比例加入复合酶解液，30?35°C，酶解I?2小时，每半小时搅拌、充氧一次，控制PH值在3.5?6.2之间； 56、酶解结束后，将酶解液升温至85?100°C，灭酶30?40分钟； 57、灭活完成后冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，水分控制在7%以下，得抗肿瘤生物多糖。2.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤SI所得的粉体粒度小于3 μ m。3.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，其特征在于，所述复合酶解液包含以下重量份的组分: 纤维素酶3?5份、果胶酶3?6份、葡萄糖淀粉酶4?7份、木聚糖酶3?5份、漆酶3?5份、溶菌酶3?5份、中性蛋白酶3?5份、风味蛋白酶2?5份、木瓜蛋白酶2?5、原生质液10?15份、含微量元素的无机盐3?5份、羧甲基茯苓多糖3?4份。4.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，其特征在于，原生质液由山竹果汁、鱼油和酪蛋白水解肽按质量比1: 2: 3混合所得。5.根据权利要求1所述的一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，其特征在于，所述的含微量元素的无机盐包含I %的K2HPO4,1 %的KH2PO4,0.5 %的(NH4) 2S04。
【专利摘要】本发明公开了一种抗肿瘤生物多糖的制备方法，包括如下步骤：将干燥树酶、锁阳、金樱子果实超声破碎处理后，置于高压釜中浸提，将所得提取液过滤，浓缩，沉淀处理，干燥，脱色处理后置于酶解罐内进行酶解，酶解结束后，灭酶，冷却至室温，过滤，浓缩后，真空干燥或低温冷冻干燥，得抗肿瘤生物多糖。本发明工艺简单，可提高多糖的提取率及其多糖含量，具有条件温和、杂质易除和得率高等优点，所得多糖具有提高免疫力，抗疲劳、抗肿瘤等多种功效，适用于肿瘤患者。
【IPC分类】A61P37/04, C08B37/00, A61P35/00
【公开号】CN105254773
【申请号】CN201510726431
【发明人】岳丽玲
【申请人】齐齐哈尔医学院
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年10月27日