肽及其复合物、组织修复用支架及其表面处理方法、以及表面处理液或处理液组的制作方法

文档序号:9509670阅读:305来源:国知局
肽及其复合物、组织修复用支架及其表面处理方法、以及表面处理液或处理液组的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及适合用于组织修复用支架的表面处理的肤和含有该肤的复合物。此 夕F,本发明设及使用该肤或该复合物进行了表面处理的组织修复用支架。进而,本发明设及 使用该肤或该复合物进行的组织修复用支架的表面处理方法、W及含有该肤或该复合物的 组织修复用支架的表面处理用的处理液或处理液组。
【背景技术】
[0002]W往,各种活体组织的修复使用的是成为细胞生长的架子的、称为支架的材料。作 为运样的支架的材质,使用各种天然或合成高分子、无机材料,但运些材料与活体组织的亲 和性不一定高。因此,有时即使在活体组织的修复中应用支架也无法将组织修复至期望的 程度,或者组织的修复需要大量时间。
[0003]为了解决运样的问题,已知将支架与细胞生长因子一起使用。作为将支架与细 胞生长因子一起使用的活体组织修复用材料,已知例如含有支架和成纤维细胞生长因子 (FG巧等细胞生长因子的骨再生材料(参照专利文献1)。
[0004] 现有技术文献 阳00引专利文献
[0006] 专利文献1:日本特开2012-016517号公报

【发明内容】

[0007]发明所要解决的课题
[0008] 可是,正如专利文献1记载的那样,只是将支架和细胞生长因子物理混合而使用 则细胞生长因子会在对组织进行修复时从支架游离,难W获得期望的促进组织修复的效 果。为了防止细胞生长因子从支架游离,可W考虑利用化学交联剂、静电相互作用将细胞生 长因子固定在支架上。可是,运样的方法中,不仅有细胞生长因子的结构发生变化、活性降 低的可能,而且有固定化所用的材料对活体组织的修复产生不良影响的可能。
[0009]本发明是鉴于上述课题做出的,其目的在于,提供一种肤、含有该肤的复合物、使 用该肤或该复合物进行了表面处理的组织修复用支架、使用该肤或该复合物进行的组织修 复用支架的表面处理方法、W及该表面处理方法中使用的处理液或处理液组,所述肤能够 进行组织修复用支架的表面处理,所述表面处理能够不使用对活体组织的修复产生不良影 响的材料地促进活体组织的修复。
[0010] 用于解决课题的方法
[0011] 本发明人等发现,通过将含有粘接性部位和碱性部位的肤与糖胺聚糖组合而进行 组织修复用支架的表面处理能够解决上述课题,从而完成了本发明,所述粘接性部位和碱 性部位分别包含规定的氨基酸残基。
[0012] 发明的效果
[0013]根据本发明,能够提供一种肤、含有该肤的复合物、使用该肤或该复合物进行了表 面处理的组织修复用支架、使用该肤或该复合物进行的组织修复用支架的表面处理方法、 W及该表面处理方法中使用的处理液或处理液组,所述肤能够进行组织修复用支架的表面 处理,所述表面处理能够不使用对活体组织的修复产生不良影响的材料地促进活体组织的 修复。
【附图说明】
[0014] 图1是实施例8中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0015] 图2是实施例9中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0016] 图3是比较例1中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0017] 图4是参考例1中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0018] 图5是参考例2中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0019] 图6是参考例3中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[0020] 图7是参考例4中拍摄的、显示埋入支架后第7天的ICR小鼠的皮下组织的图像 的图。
[OOW图8是实施例10中拍摄的、显示埋入支架后第28天的ICR小鼠的皮下组织的肥 染色和抗CD31抗体免疫染色后的图像的图。
[0022]图9是实施例11中拍摄的、显示填充支架4周后的小鼠的骨缺损部的X射线CT 图像的图。
[0023] 图10是比较例2中拍摄的、显示填充支架4周后的小鼠的骨缺损部的X射线CT 图像的图。
【具体实施方式】
[0024][第1方式]
[0025] 本发明的第1方式设及的肤是氨基酸序列中具有粘接性部位和碱性部位的肤,所 述粘接性部位包含2, 3-二径基苯基或3, 4-二径基苯基的氨基酸残基,碱性部位中有3个 W上的碱性氨基酸残基相连。W下,在本申请的说明书中,也将该肤记为"粘接性肤"。该粘 接性肤能够通过粘接性部位与组织修复用支架的表面结合,能够通过碱性部位与糖胺聚糖 结合。W下,在本申请的说明书中,也将"组织修复用支架"简单地记为"支架"。
[00%] 第1方式设及的肤适合用于组织修复用支架的表面处理。使用经表面处理的组织 修复用支架修复的组织没有特别限定。作为优选的使用经表面处理的组织修复用支架修复 的组织,可W列举血管、皮肤、肌肉、软骨、骨、消化管、乳房、屯、脏瓣膜、牙周组织和眼周组织 等。
[0027] 在不损害本发明的目的的范围内,构成第1方式设及的肤的氨基酸残基的数目没 有特别限定。典型而言,构成粘接性肤的氨基酸残基的数目优选为4个W上100个W下,更 优选为5个W上50个W下,特别优选为10个W上30个W下。
[0028] 粘接性肤所具有的粘接性部位包含具有2, 3-二径基苯基或3, 4-二径基苯基的氨 基酸残基。粘接性部位具有两个径基相邻的二径基苯基,因此能够与支架的表面结合。当 支架由金属材料形成时,利用存在于支架的表面的金属原子与二径基苯基的馨合,粘接性 肤通过粘接性部位结合于支架的表面。当支架由具有径基、氨基那样的含有活性氨的官能 团的有机高分子、陶瓷等材料形成时,利用二径基苯基氧化生成的酿与径基、氨基那样的含 有活性氨的官能团的反应,粘接性肤通过粘接性部位结合于支架的表面。
[0029] 2, 3-二径基苯基和3, 4-二径基苯基中,从与支架的表面反应的容易度出发,优选 3, 4-二径基苯基。作为具有3, 4-二径基苯基的氨基酸的具体例子,可W列举3-化4-二 径基苯基)丙氨酸α-多己)、3-化4-二径基苯基)-2-甲基-k丙氨酸(甲基多己) 和(3时-3-(3,4-二径基苯基)寸-丝氨酸值0P巧等。其中,实际上,从W在贻贝那样的生 物中构成肤的氨基酸的形式进行利用、调制肤时容易获得等方面出发,优选3-化4-二径 基苯基)A-丙氨酸α-多己)。
[0030] 粘接性肤通过碱性部位与糖胺聚糖结合,第1方式设及的粘接性肤具有3个W上 的碱性氨基酸残基相连的碱性部位,因此在使粘接性肤与糖胺聚糖接触时,能够有效地使 糖胺聚糖结合于碱性部位。构成碱性部位的连续的碱性氨基酸残基的数目优选为3个W上 30个W下,更优选为3个W上10个W下。构成碱性部位的碱性氨基酸残基从赖氨酸残基 化ys)、精氨酸残基(Arg)、组氨酸残基化is)、W及5-径基赖氨酸、鸟氨酸、犬尿氨酸和经修 饰的上述氨基酸残基中选择。运里,关于氨基酸残基的修饰,只要修饰后的氨基酸残基是碱 性的就没有特别限定,可W从各种公知的氨基酸残基的修饰中选择。
[0031] 粘接性肤中,粘接性部位与碱性部位优选通过间隔区部位而结合。构成间隔区部 位的氨基酸残基的数目没有特别限定,优选为1个W上50个W下,更优选为3个W上30个 W下。当粘接性部位与碱性部位通过由运样的数目的氨基酸残基构成的间隔区部位而结合 时,W粘接性部位为起点从支架的表面伸出的肤链能够比较自由地运动,因此容易利用碱 性部位捕捉糖胺聚糖、利用碱性部位所结合的糖胺聚糖捕捉细胞生长因子。
[0032] 粘接性肤中,优选N末端或C末端是在末端或其附近具有碱性部位的碱性末端。在 末端或其附近具有碱性部位是下述状态:在比该碱性部位更靠近碱性末端一侧不存在氨基 酸残基或存在包含1个W上5个W下的氨基酸残基且不含粘接性部位的部位。当比碱性部 位更靠近碱性末端一侧存在某种程度长度的肤链时,有时由于比碱性部位更靠近碱性末端 一侧的肤链的空间位阻而难W利用碱性部位捕捉糖胺聚糖。可是,若碱性部位位于粘接性 肤的末端或其附近,则难W发生运样的不良状况。
[0033] 此外,粘接性肤中,优选除碱性末端W外的另一端为在末端或其附近具有粘接性 部位的粘接性末端。在末端或其附近具有粘接性部位是下述状态:从粘接性末端开始的5 个氨基酸残基内含有粘接性部位且不含碱性部位。若粘接性肤具有粘接性末端,则形成粘 接性肤的大体整个长度能够在支架的表面自由地运动的状态,因此容易利用碱性末端捕捉 糖胺聚糖。
[0034] 作为具有运样的碱性末端和粘接性末端的粘接性肤,优选从C末端开始的9个残 基的氨基酸序列是下述序列号1所示的氨基酸序列。下述序列号1所示的氨基酸序列是贻 贝所产生的粘接性肤的氨基酸序列中重复存在的序列。贻贝所产生的粘接性肤具有包含运 样的重复序列的部位,因此能够牢固地对各种基质进行结合。
[0035]A1曰-Lys-Pro-Ser-Tyr-Hyp-Thr-X曰曰-Lys· · · (1)
[0036](序列号(1)中,乂日日为心多己残基。)
[0037] 粘接性肤可W按照设计的氨基酸序列通过公知的方法取得。作为合适的方法,可 W列举Fmoc法、Boc法那样的固相合成方法。通过运样的固相合成方法得到的粗制粘接性 肤可W根据需要使用反相HPLC等方法来精制。可W通过公知的方法确认得到的粘接性肤 是否是期望的序列。作为运样的方法,可W列举对通过MLDI-T0F/MS测定的粘接性肤的分 子量与从氨基酸序列算出的粘接性肤的理论分子量进行比较的方法。
[0038] W上说明的粘接性肤能够通过粘接性部位结合于各种支架的表面,能够使糖胺聚 糖结合于碱性部位。此外
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