NO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO22的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO38的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。12. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO7的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO23的氨基酸序列示出的CDR1;由SEQIDNO41的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。13.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 6的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 24的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。14.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 6的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 25的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。15.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 8的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 26的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 42的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。16.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 6的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 27的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。17.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 9的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 28的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 43的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。18.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1)轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 5的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2)重链可变区，其包含： 由SEQIDNO29的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO44的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。19. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO10的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO30的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO45的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。20. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO11的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO31的氨基酸序列示出的CDR1;由SEQIDNO42的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。21. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO11的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO20的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO39的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。22. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO11的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO32的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO46的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。23. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO5的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO33的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO45的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。24. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 5的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 34的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 47的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。25.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 6的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 25的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 48的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。26.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 12的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 31的氨基酸序列示出的CDR1;由SEQ ID NO 38的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。27.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 9的氨基酸序列示出的⑶R1 ;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 31的氨基酸序列示出的CDR1;由SEQ ID NO 46的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。28.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 10的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 17的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQ ID NO 42的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQ ID NO 3的氨基酸序列示出的⑶R3。29.权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQ ID NO 13的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQ ID NO 1的氨基酸序列示出的⑶R 2 ;和由SEQ ID NO 2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO34的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO49的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。30. 权利要求2所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体包含： 1) 轻链可变区，其包含： 由SEQIDNO14的氨基酸序列示出的⑶R1;由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3 ;以及 2) 重链可变区，其包含： 由SEQIDNO17的氨基酸序列示出的CDR1 ;由SEQIDNO50的氨基酸序列示出的 ⑶R2 ;和由SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。31. 权利要求1所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体是人抗体或人源化抗体。32. 权利要求1所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、 IgAl、IgA2、IgD、IgE、IgM或者其组合或变体。33. 权利要求32所述的与VEGF结合的抗体，其中所述抗体的形式为Fab、FaV、 F(aV) 2、Fv、dAb、scFv或骨架缀合物，其包含所述抗体的⑶R作为用于与VEGF结合的主 要部分。34. 编码与VEGF结合之抗体的轻链可变区的DNA，所述轻链可变区包含由SEQIDNO1 的氨基酸序列示出的⑶R2 ;和由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的⑶R3。35. 权利要求34所述的DNA，其包含： SEQIDNO51的碱基序列，所述碱基序列编码由SEQIDNO1的氨基酸序列示出的⑶R2;以及 SEQIDNO52的碱基序列，所述碱基序列编码由SEQIDNO2的氨基酸序列示出的CDR3〇36. 编码与VEGF结合之抗体的重链可变区的DNA，所述重链可变区包含由SEQIDNO3 的氨基酸序列示出的CDR3。37. 权利要求36所述的DNA，其包含SEQIDNO53的碱基序列，所述碱基序列编码由 SEQIDNO3的氨基酸序列示出的⑶R3。38. 包含权利要求34所述的DNA的表达载体，所述载体表达与VEGF结合之抗体的轻链 可变区。39. 包含权利要求36所述的DNA的表达载体，所述载体表达与VEGF结合之抗体的重链 可变区。40. 动物细胞系，其被权利要求38和39所述的表达载体转化。41. 权利要求40所述的动物细胞系，其中所述动物细胞系是CH0细胞、HEK细胞或NS0 细胞。42. 用于预防、诊断或者治疗由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症的药物组 合物，所述组合物包含根据权利要求1所述的抗体。43. 权利要求42所述的药物组合物，其中所述由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病 或癌症选自：选自结肠直肠癌、胰腺癌、肾癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和脑癌的癌症；以及选 自黄斑变性、糖尿病性视网膜病变和缺血性视网膜病变的眼部疾病。44. 权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物与选自以下的化学治疗剂组 合使用：烷基化剂、抗代谢物、叶酸同系物、嘧啶同系物、嘌呤同系物和相关抑制剂，长春花 生物碱、表鬼白毒素、抗生素、L-天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、干扰素、铂配合物、蒽二酮 取代的尿素、甲基肼衍生物、肾上腺皮质抑制剂、肾上腺皮质类固醇、孕激素、雌激素、抗雌 激素、雄激素、抗雄激素和促性腺激素释放激素同系物。45. 权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物与选自以下的药物组合使 用：基于氟嘧啶的药物、紫杉醇、基于铂的药物，干扰素a-2a、卡铂、多柔比星、顺铂、吉西 他滨、5-氟尿嘧啶、甲酰四氢叶酸、伊立替康、奥沙利铂、卡培他滨、多西他赛及其混合物。46. 用于由VEGF过表达引起的血管发生相关疾病或癌症的诊断试剂盒，所述试剂盒包 含根据权利要求1所述的与VEGF结合的抗体。
【专利摘要】本发明涉及：对血管内皮生长因子(VEGF)具有强结合亲和力并能够体内抑制肿瘤生长的新抗VEGF抗体；以及包含所述抗体的用于治疗癌症的组合物。本发明的抗体表现出对人VEGF和小鼠VEGF的明显结合特性，抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖和渗透性并可阻抑肿瘤生长，因此可用作用于治疗癌症的抗体。
【IPC分类】C07K16/22, A61K39/395, C12N15/13, A61P35/00
【公开号】CN105263961
【申请号】CN201480030403
【发明人】都贤美, 金炳文, 金埰宁, 李圣熙, 金东贤, 金柳辰, 李东燮, 韩京美, 宋东燮, 郑恩伊, 李珍硕, 承佑尽, 黄圭详
【申请人】东亚社会控股株式会社, 东亚St株式会社
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2014年5月30日
【公告号】CA2913126A1, EP3006465A1, US20160122426, WO2014193191A1